吳焱 王鵬 魏春波 張亮 閆會(huì)文 倫文輝 李興旺

·論著·

人免疫缺陷病毒陽(yáng)性人群人乳頭狀瘤病毒感染的型別分析

吳焱 王鵬 魏春波 張亮 閆會(huì)文 倫文輝 李興旺

目的 了解人免疫缺陷病毒（HIV）陽(yáng)性人群人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染狀況、型別分布特征及與HIV陰性人群的差異。方法 選擇門(mén)診患有尖銳濕疣或主訴近期與可疑尖銳濕疣患者有性接觸者作為研究對(duì)象，包括HIV陽(yáng)性組62例和HIV陰性組2 716例，采用基因芯片技術(shù)對(duì)外生殖器部位皮膚黏膜樣本進(jìn)行HPV檢測(cè)，采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。結(jié)果 HIV陽(yáng)性組中，HPV總感染率74.19%（46/62），高危型HPV感染率67.74%（42/62），低危型HPV感染率58.06%（36/62）；HIV陰性組三者感染率分別為42.30%、29.57%、24.71%，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。HIV陽(yáng)性組男性HPV檢出率高達(dá)92.11%（35/38），和HIV陰性組男性檢出率相比（37.38%，382/1 022）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=45.98，P＜0.01）。低危型HPV在HIV陽(yáng)性組檢出率前3位為HPV6（37.10%，23/62）、43和11型，在HPV陰性組檢出率排序相同但HPV6的檢出率僅11.12%（302/2 716）。高危型HPV在HIV陽(yáng)性組檢出率前5位依次是HPV16（22.58%，14/62）、52、66、58和18型，在HIV陰性組前5位依次為HPV16（7.77%，211/2 716）、58、56、66和52型。HPV亞型重疊感染情況，HIV陽(yáng)性組最多八重，HIV陰性組最多九重，三重及以上感染者，HIV陽(yáng)性組65.21%（30/46），HIV陰性組16.71%（192/1 149），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 HIV陽(yáng)性人群HPV總感染率、高危型HPV感染率、低危型HPV感染率、男性HPV感染率以及HPV多重感染率均明顯高出HIV陰性組，值得臨床高度重視。

HIV感染；乳頭狀瘤病毒感染；α乳頭狀瘤病毒屬；重疊感染

人乳頭狀瘤病毒（HPV）是一種屬于乳多空病毒科的乳頭狀瘤空泡病毒，目前已被鑒定出的HPV血清亞型有100多種。臨床上根據(jù)HPV血清亞型致病力大小或致癌危險(xiǎn)性大小的不同，將HPV分為低危型和高危型兩大類(lèi)。國(guó)外研究表明，HPV和人免疫缺陷病毒（HIV）感染的關(guān)系密切［1-2］，而我國(guó)近年來(lái)HIV合并尖銳濕疣及HPV感染的病例也在逐漸增加［3］，多局限于單一性別人群和小樣本觀察［4-5］。我們對(duì)HIV陽(yáng)性人群進(jìn)行了HPV檢測(cè)分析，并和大樣本HIV陰性人群進(jìn)行比較，以了解中國(guó)HIV陽(yáng)性人群HPV感染情況、HPV型別感染的特征。

對(duì)象與方法

一、對(duì)象

2012年12月至2013年12月在我院皮膚科/性病艾滋病中心就診的HIV/AIDS人群及同期就診的非HIV人群，將其中患有尖銳濕疣或主訴近期與尖銳濕疣患者有性接觸者作為研究對(duì)象，進(jìn)行回顧性研究，比較兩組外生殖器部位HPV檢測(cè)結(jié)果。納入研究的HIV陽(yáng)性組62例，年齡23～65歲，平均31.76歲；男38例，女24例，HIV感染的診斷均經(jīng)過(guò)蛋白印跡試驗(yàn)確認(rèn)，其中較為明確的經(jīng)性接觸感染HIV者57例，占91.93%，血液途徑1例，其余感染途徑不詳。HIV陰性組2 716例，年齡18～68歲，平均33.18歲；男1 022例，女1 694例。兩組各年齡段患者比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HIV陽(yáng)性組合并尖銳濕疣者19例（30.65%），HIV陰性組合并尖銳濕疣625例（23.01%），兩組尖銳濕疣并發(fā)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.98，P ＞ 0.05）。

二、標(biāo)本采集

男性患者HPV檢測(cè)樣本取自龜頭包皮及肛周肛內(nèi)，女性患者取自陰道口和宮頸。采集方法：有尖銳濕疣者，直接用采樣器從疣體表面刷取采集脫落細(xì)胞；無(wú)尖銳濕疣者，直接刷取性接觸部位皮膚黏膜表面采集脫落細(xì)胞，然后把采樣器加入取樣管內(nèi)的細(xì)胞保存液中，置于4℃冰箱保存待檢。取樣及檢測(cè)均專(zhuān)人負(fù)責(zé)。

三、檢測(cè)原理和試劑

通過(guò)基因芯片技術(shù)（PCR和反向點(diǎn)雜交技術(shù)）檢測(cè)HPV，即利用HPV基因組中晚期區(qū)（L區(qū)）相對(duì)保守區(qū)的引物，對(duì)待測(cè)樣品中可能存在的HPV基因型進(jìn)行PCR擴(kuò)增并進(jìn)行生物素標(biāo)記，再將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與固定在膜芯片上的基因型特異性探針進(jìn)行核酸分子雜交，最后通過(guò)化學(xué)顯色進(jìn)而判讀結(jié)果。HPV基因分型檢測(cè)試劑盒為亞能生物技術(shù)（深圳）有限公司產(chǎn)品。該方法可同時(shí)一次性檢測(cè)到18種高危型 HPV 基因型（包括 HPVl6、18、31、33、35、39 45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4）和 5 種低危型 HPV（HPV6、11、42、43、44）。按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

結(jié) 果

一、高危型及低危型HPV檢出情況

無(wú)論是高危型、低危HPV檢出率，還是總的HPV檢出率，HIV陽(yáng)性組均高于HIV陰性組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

二、男性及女性HPV檢出情況

HIV陽(yáng)性男性38例中，檢出HPV35例（92.11%）HIV陽(yáng)性女性24例中，檢出HPV11例（45.83%）。HIV陰性男性1022例中，檢出HPV382例（37.38%），HIV陰性女性1 694例中，檢出HPV 767例（45.28%）男性HIV陽(yáng)性與HIV陰性組HPV感染率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=45.98，P ＜ 0.01）,而女性 HIV 陽(yáng)性與HIV陰性組HPV感染率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.003，P ＞ 0.05）。

三、低危型HPV型別檢出情況

HIV陽(yáng)性組低危型HPV檢出率由高到低排序見(jiàn)表2，其中HPV6檢出率最高，為37.10%，未檢出HPV44型。HPV陰性組HPV檢出率由高到低的順序與HIV陽(yáng)性組一致，但HPV6的檢出率僅11.12%，HPV6檢出率兩組比較，χ2=39.60，P＜0.01。

表1 HIV陽(yáng)性組與陰性組HPV檢出情況［例（%）］

表2 HIV陽(yáng)性/陰性組HPV型別檢出情況

四、高危型HPV型別檢出情況

HIV陽(yáng)性組高危型HPV檢出率由高到低排序見(jiàn)表2，其中HPV16型檢出率最高，為22.58%，未檢出HPV83型及MM4型。HIV陰性組檢出率前5位依次為HPV16、58、56、66和 52型，與HIV 陽(yáng)性組略有不同，HPV16型檢出率仍為最高，為7.77%。HPV16型檢出率兩組比較，χ2=17.87，P＜0.01。

五、HPV多重感染情況

HIV陽(yáng)性組檢出的46例HPV陽(yáng)性病例中，共檢出低危型HPV 61例次，高危型HPV 105例次。HIV陰性組查出的1 149例HPV陽(yáng)性病例中，共查出低危型HPV 784例次，高危型HPV 1 187例次。HIV陽(yáng)性組最常見(jiàn)的感染前3位是一重感染（高1），五重感染（高3低2）和四重感染（高3低1）。而HIV陰性組最常見(jiàn)的感染前3位是一重感染（高1）、一重感染（低1）和二重感染（高1低1）。HIV陽(yáng)性組最多有八重HPV亞型感染，HIV陰性組最多有九重HPV亞型感染。其中，二重及以上感染在HPV陽(yáng)性者中所占比例HIV陽(yáng)性組為78.26%，HIV陰性組為42.91%；三重及以上感染在HIV陽(yáng)性組為65.21%，HIV陰性組為16.71%；四重及以上感染在HIV陽(yáng)性組為50%，HIV陰性組為6.44%。見(jiàn)表3。

討 論

有研究表明，HIV陽(yáng)性人群有更高的HPV感染率，且更易于感染HPV高危型，HPV感染持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)，更易于發(fā)生癌變［1-2，6-7］。我們的研究表明，HIV陽(yáng)性組HPV檢出率（74.19%）遠(yuǎn)高于HIV陰性組（42.30%），而且無(wú)論是HPV高危型檢出率，還是低危型檢出率，兩組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，尤其是HPV高危型表現(xiàn)得更為明顯。感染率最高的HPV型別，低危型HPV在兩組中都是HPV6，高危型HPV在兩組中都是HPV16。從型別分布的特點(diǎn)來(lái)看，雖然兩組在感染率高低的排名順序上有一定差異，但幾乎所有型別在HIV陽(yáng)性人群中的感染率都顯著高于HIV陰性人群。國(guó)外報(bào)道普通人群HPV感染率為8.4%～13.4%［8］，國(guó)內(nèi)尚未對(duì)普通人群的HPV感染率做過(guò)大規(guī)模的流行病學(xué)研究。我們?cè)? 716例HIV陰性人群中HPV檢出率為42.3%，高于上述報(bào)道，可能與研究對(duì)象來(lái)自皮膚性病科的患者，感染HPV的概率比普通人群更高有關(guān)。

不同性別HPV感染狀況會(huì)有差異。意大利北部男性的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，HIV陽(yáng)性患者中HPV感染率高達(dá)90.9%［9］。本研究HIV陽(yáng)性男性HPV檢出率高達(dá)92.11%（35/38），與國(guó)外報(bào)道一致，而且和HIV陰性男性HPV感染率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。女性感染方面，國(guó)外研究顯示，HIV陽(yáng)性婦女HPV感染率為54%～63%［7］。張永喜等［4］對(duì)比 HIV 陽(yáng)性和陰性婦女子宮頸HPV檢測(cè)，兩者HPV感染率分別為44.4%和20.0%。而我們的研究中，HPV感染率在女性HIV陽(yáng)性（45.83%）和陰性（45.28%）組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這一點(diǎn)和其他報(bào)道不一致，原因尚不清楚，其中可能的原因之一，與HIV陽(yáng)性女性樣本量過(guò)?。?4例）有關(guān)。

在既往的文獻(xiàn)中，HPV重疊感染最多有四重或五重感染的報(bào)道［10］。我們通過(guò)大樣本檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)HIV陽(yáng)性組最多8種HPV亞型重疊感染，HIV陰性組最多9種HPV亞型重疊感染，高危亞型最多出現(xiàn)7種亞型同時(shí)感染。從本研究還可以看出，HIV陽(yáng)性組和HIV陰性組多重感染情況有明顯差別，重疊感染的HPV亞型型別數(shù)越多，HIV陽(yáng)性組和HIV陰性組之間檢出率的差別就越明顯。今后我們會(huì)加大對(duì)HIV陽(yáng)性人群HPV重疊感染的研究，以獲得更多資料。需要注意到，多種型別HPV重疊感染，可能提示機(jī)體清除病毒不利，也可能更易發(fā)展為持續(xù)感染，增大臨床治療的難度。

表3 HIV陽(yáng)性組與陰性組HPV檢測(cè)陽(yáng)性者中HPV多重感染情況

HIV陽(yáng)性人群HPV感染率增高的機(jī)制目前尚不十分清楚。研究發(fā)現(xiàn)，HIV陽(yáng)性患者HIV病毒載量越高，CD4細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)越低（例如＜200×106/L），HPV感染率會(huì)增加，HPV相關(guān)疾病的發(fā)病率也會(huì)增加，免疫抑制可能會(huì)加快從HPV感染到出現(xiàn)HPV相關(guān)疾病的進(jìn)程［11］。除細(xì)胞免疫外，體液免疫功能異常也可能是HIV人群HPV感染增加的機(jī)制之一［12］，但體液免疫在其中的作用受到質(zhì)疑。此外，HIV血漿病毒載量高的患者，HPV持續(xù)感染和HPV相關(guān)疾病的發(fā)病率是增加的［11］，表明HIV可能通過(guò)與感染HPV細(xì)胞的直接相互作用，加重HPV引起的病變。

［1］Rositch AF,Gravitt PE,Smith JS.Growing evidence that HPV infection is associated with an increase in HIV acquisition:exploring the issue of HPV vaccination［J］.Sex Transm Infect,2013,89（5）:357.

［2］Auvert B,Lissouba P,Cutler E,et al.Association of oncogenic and nononcogenic human papillomavirus with HIV incidence［J］.J Acquir Immune Defic Syndr,2010,53（1）:111-116.

［3］陳曉霞,于建平,李民,等.北京市男男性接觸者人乳頭瘤病毒及人類(lèi)免疫缺陷病毒感染狀況調(diào)查［J］.國(guó)際病毒學(xué)雜志,2011,18（4）:101-105.

［4］張永喜,熊艷,桂希恩,等.HIV陽(yáng)性婦女子宮頸感染HPV狀況分析［J］.中華婦產(chǎn)科雜志,2012,47（3）:185-190.

［5］畢曼曼,趙學(xué)良.山東省濰坊市尖銳濕疣患兒乳頭瘤病毒檢測(cè)和型別分析［J］.中華皮膚科雜志,2014,47（9）:660-662.

［6］Conley LJ,Ellerbrock TV,Bush TJ,et al.HIV-1 infection and risk of vulvovaginal and perianal condylomata acuminata and intraepithelial neoplasia:a prospective cohort study［J］.Lancet,2002,359（9301）:108-113.

［7］Mbulawa ZZ,Coetzee D,Marais DJ,et al.Genital human papillo-mavirus prevalence and human papillomavirus concordance in heterosexualcouplesare positively associated with human immunodeficiency virus coinfection［J］.J Infect Dis,2009,199（10）:1514-1524．

［8］de Sanjosé S,Diaz M,Castellsagué X,et al.Worldwide prevalence and genotype distribution of cervical human papillomavirus DNA in women with normal cytology:a meta-analysis［J］.Lancet Infect Dis,2007,7（7）:453-459．

［9］de Pokomandy A,Rouleau D,Ghattas G,et al.Prevalence,clearance,and incidence of anal human papillomavirus infection in HIV-infected men:the HIPVIRG cohort study［J］.J Infect Dis,2009,199（7）:965-973．

［10］金玉姬,陶林,岳麗杰,等．深圳計(jì)劃生育門(mén)診中男性人乳頭狀瘤病毒感染狀況［J］.中國(guó)男科學(xué)雜志,2008,22（3）:22-25．

［11］Strickler HD,Burk RD,Fazzari M,et al.Natural history and possible reactivation of human papillomavirus in human immunodeficiency virus-positive women ［J］.J Natl Cancer Inst,2005,97（8）:577-586．

［12］Silverberg MJ,Ahdieh L,Munoz A,et al．The impact of HIV infection and immunodeficiency on human papillomavirus type 6 or 11 infection and on genital warts［J］.Sex Transm Dis,2002,29（8）:427-435．

皮膚科原料藥等供應(yīng)消息

西安大唐醫(yī)藥銷(xiāo)售有限公司化工原料部常年供應(yīng)皮膚性病科藥用輔料、各種性病病原體檢測(cè)試劑盒，最新醫(yī)用圖書(shū)、包裝材料等，品種齊全，價(jià)格低廉。為了回饋新老客戶(hù)對(duì)本公司的支持與關(guān)懷，定期舉辦制劑技術(shù)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，常年免費(fèi)技術(shù)咨詢(xún)。顧偉程教授主編的《精編皮膚病學(xué)》一書(shū)，介紹我國(guó)常見(jiàn)皮膚病千余種，為適應(yīng)臨床醫(yī)師需要詳盡收錄相關(guān)治療方法，32開(kāi)本攜帶方便，每?jī)?cè)定價(jià)90元。歡迎來(lái)電、來(lái)函。電話(huà)：029-86265583，13991328466，地址：西安市北關(guān)正街33號(hào)，郵編710014，聯(lián)系人：李永靖、羅廣林，Email：lglzsj@163.com，QQ：406576437，778069730。

Genotyping of human papillomavirus among human immunodeficiency virus-positive populations

Wu Yan*,Wang Peng,Wei Chunbo,Zhang Liang,Yan Huiwen,Lun Wenhui,Li Xingwang.*Department of Dermatology and Venereology,Beijing Ditan Hospital,Capital Medical Univesity,Beijing 100015,China

ObjectiveTo compare the prevalence and genotype distribution of human papillomavirus（HPV）between human immunodeficiency virus（HIV）-positive and-negative populations.MethodsPatients with condyloma acuminatum or persons who recently had sexual contact with patients with condyloma acuminatum were enrolled into this study,and classified into HIV-positive group （n=62）and HIV-negative group （n=2 716）.GeneChip analysis was performed to detect HPV and determine HPV genotypes in mucocutaneous samples collected from the external genitalia of these subjects.Statistical analysis was carried out by chi-square test using the SPSS software version 19.0.ResultsThe prevalence rates of HPV infection,high-risk HPV types and low-risk HPV types were significantly higher in HIV-positive persons than in HIV-negative persons（74.19%（46/62）vs.42.30%（1 149/2 716）,67.74%（42/62）vs.29.57%（803/2 716）,58.06% （36/62）vs.24.71% （671/2 716）,respectively,allP＜ 0.01）.The detection rate of HPV was also increased in HIV-positive men compared with HIV-negative men（92.11%（35/38）vs.37.38%（382/1 022）,χ2=45.98,P ＜ 0.01）.Although the top three genotypes of low-risk HPV were types 6,43 and 11 in both HIV-positive and-negative groups,the prevalence rate of HPV 6 was 37.10%（23/62）in HIV-positive group,but only 11.12%（302/2 716）in HIV-negative group.The top five genotypes of high-risk HPV were types 16 （22.58%,14/62）,52,66,58 and 18 in HIV-positive group,and types 16 （7.77%,211/2716）,58,56,66 and 52 in HIV-negative group.Coinfections with multiple HPV subtypes were common in both groups,and the number of concurrent HPV genotypes was as high as 8 in HIV-positive group,and 9 in HIV-negative group.The prevalence rate of coinfections with three or more HPV genotypes in HIV-positive group was significantly higher than that in HIV-negative group（65.21%（30/46）vs.16.71%（192/1 149））.ConclusionsCompared with HIV-negative populations,HIV-positive populations show elevated prevalence of HPV infection,high-risk HPV genotypes and low-risk HPV genotypes.Moreover,the prevalence of HPV is higher in HIV-positive men than in HIV-negative men.These findings are worthy of further attention in clinic.

HIV infections;Papillomavirus infections;Alphapapillomavirus;Superinfection

Lun Wenhui,Email:lunwenhui@163.com

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2015.02.002

“十二五”國(guó)家科技重大專(zhuān)項(xiàng)（2012ZX10005010）

100015北京，首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京地壇醫(yī)院皮膚性病科（吳焱、魏春波、閆會(huì)文、倫文輝），病理科（王鵬、張亮），感染科（李興旺）

倫文輝，Email：lunwenhui@163.com

2014-03-17）

（本文編輯：顏艷）