曾中華

（漳州市動物疫病預防控制中心，福建 漳州 363000）

上海黃浦江死豬漂浮事件后，病害生豬及其產品無害化處理引起社會廣泛關注，影響畜牧業(yè)健康穩(wěn) 定發(fā)展、動物疫病防控、環(huán)境污染整治、動物產品安全和公共衛(wèi)生安全。本研究用掩埋、無害化處理池、畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機 3種模式，對病害生豬及其產品進行無害化處理，檢測處理前后豬繁殖與 呼吸綜合癥、豬瘟、偽狂犬、圓環(huán)等 4 種病毒和大腸桿菌、蛔蟲卵及磺胺二甲基嘧啶、鹽酸土霉素的變 化情況，為科學處理提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器病害生豬及其產品，由龍海市益民農牧有限公司病死豬集中無害化處理點提供；T Y-FCW-26 型畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機購自漳州市天洋機械有限公司；天洋生物酵素購自漳州市天洋機械有限 公司；Spx-150 生化培養(yǎng)箱購自上海躍進醫(yī)療器械有限公司；Ac2-4s1 生物安全柜購自新加坡藝思高科技有限公司；光學顯微鏡購自奧林巴斯（中國）有限公司。Agilent 1100 高效液相色譜儀：美國Agilent 公 司；AllegraTM 21R 臺式高速冷凍離心機：美國Beckman公司；N-EVAP 111 氮吹儀：美國Organomation 公司。

1.1.2 主要試劑月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯（LST）：北京陸橋技術有限責任公司，批號 120201；煌 綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）：北京陸橋技術有限責任公司，批號 111029；大腸桿菌標準菌株：中國獸醫(yī)藥 品監(jiān)察所；鹽酸土霉素可溶性粉：山東德信生物科技有限公司，批號：2013101103，含量：鹽酸土霉素 50%；酒石酸泰樂磺胺二甲嘧啶可溶性粉：北京中農華威制藥有限公司，批號：20130105，含量：磺胺 二甲基嘧啶 10%。

1.1.3 檢測試劑盒豬繁殖與呼吸綜合征病毒 RT-PCR 檢測試劑盒（生產批號：PRRS20140217P）、豬瘟 病毒通用型 RT-PCR 檢測試劑盒（生產批號：CSF20140114P）、豬偽狂犬病毒 PCR 檢測試劑盒（生產批號：PR20140218P）、豬圓環(huán)病毒檢測試劑盒（生產批號：PC20140121P），均由北京世紀元亨動物防疫 技術有限公司提供。

1.1.4 病害生豬及其產品由龍海市益民農牧有限公司病死豬集中無害化處理點提供。

1.2 試驗方法

1.2.1 病害生豬及其產品前處理試驗分成4個批次，每批次選擇 10頭體重 20kg以上的病死生豬，采 集頜下淋巴結、腹股溝淋巴結、脾臟等組織送實驗室檢測（處理前樣品）。同時，將剖檢采樣的10 頭病 死生豬和100kg谷糠及 500kg病害生豬及其產品加入畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機料槽內，啟 動處理機 運轉 20min，停機將剩下物料加入處理機料槽內，各批次再加入物料品種及數量（具體見表1），再啟動 處理機運轉 3h后停機，根據 GBT6679-2003[1]采 樣標準采 3 份樣品（前處理樣品），1 份 0.5kg送實驗室 檢測，另外2 份各 50kg分別用掩埋和無害化處理池處理，剩余物料在處理機處理。

表1 4批次物料加入情況kg

1.2.2 無害化處理試驗掩埋處理：挖 1個長、寬、高各 1 m的掩埋坑，在坑底鋪撒 5cm厚的漂白粉，放入1份50kg前處理樣品，再用40cm的土層覆蓋，再鋪撒 5cm厚漂白粉，然后覆土掩埋，平整地面； 經過 30d處理，按GB/T6679-2003 采樣標準，采集1 份 0.5kg樣品（掩埋處理后樣品）送實驗室檢測。

無害化處理池處理：挖1個長、寬、高各1 m的正方體無害化處理池，放入1份50kg前處理物料；經 過30d處理，按GB/T6679-2003采樣標準，采集1份0.5kg樣品（處理池處理后樣品）送實驗室檢測。

處理機處理：剩余物料均勻加入天洋酵素 2kg，啟動處理機自動處理按鈕，設備自動運行 24h后，調出溫度記錄，檢查處理機溫度是否在設定范圍內，停機檢查處理物的干濕度、細度，檢查合格出料，按 GB/T6679-2003 采樣標準，采集 1 份0.5kg樣品（處理機處理后樣品）送實驗室檢測。

1.2.3 四種病毒的檢測按照四種病毒的檢測試劑盒說明書進行檢測。

1.2.4 大腸桿菌 MPN 計數按照國家標準GB/T 19524.1-2004《肥料中糞大腸菌群的測定》[2]進 行檢測。

1.2.5 蛔蟲卵死亡率的測定按照國家標準GB/T 19524.2-2004《肥料中蛔蟲卵死亡率的測定》[3]進 行檢測。

1.2.6 磺胺二甲基嘧啶的檢測色譜柱：ODS C18(5 μm)250mm×4.6 mm；柱溫 40℃；流動相：乙腈﹕ 水﹕冰乙酸=20﹕80﹕0.5；流速 1.0mL/min；紫外檢測器波長為 272 nm；進樣量 20μL；其它具體參考 GB 29694-2013《動物性食品中 13 種磺胺類藥物多殘留的測定（高效液相色譜法）》[4]方法測定。

1.2.7 鹽酸土霉素的檢測色譜柱：O DS C18(5 μm)250mm×4.6 mm；柱 溫 40℃；流動相：乙 腈：0.01 mol/L NaH2PO4溶液（pH=2.5）=30﹕70；流速1.0mL/min；檢測波長為355 nm；進樣量20μL。其它具體參考 GB/T 5009.116-2003《畜、禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量的測定（高效液相色譜法）》[5]方法測定。

2 分析與結果

2.1 四種病毒的檢測結果

4 批次樣品檢測結果分別見表2、表3 及圖1 至圖 6。

表2 4批次4種病毒核酸陽性統(tǒng)計

表3 4個批次備檢樣品PCR 檢測明細

圖1 豬瘟 PCR 特異性試驗結果

圖2 豬瘟 PCR 特異性試驗結果

圖 3 藍耳、圓環(huán)、偽狂犬 PCR 特異性試驗結果

圖 4 藍耳 PCR 特異性試驗結果

圖5 圓環(huán) PCR 特異性試驗結果

圖 6 偽狂犬 PCR 特異性試驗結果

圖1 中樣品編號為 1A、2A、1B、2B的樣品檢出豬瘟核酸陽性；圖2 中樣品編號為3A、4A、3B、4B、1C、2C、2D的樣品檢出豬瘟核酸陽性；圖 3 中樣品編號為 1A、2A、1B、2B的樣品檢出藍耳核酸 陽性；圖 4 中樣品編號為 4A、1D、1C、2C的樣品檢出藍耳核酸陽性；圖5 中樣品編號為 4A的樣品檢 出圓環(huán)病毒核酸陽性；圖 6 中樣品編號為 4A的樣品檢出偽狂犬核酸陽性。

2.2 大腸桿菌MPN數與蛔蟲卵死亡率檢測結果

無害化處理池處理后，大腸桿菌 MPN 數為前處理的1.6%～5.7%，蛔蟲卵死亡率為 84%～89%；掩埋 處理后，大腸桿菌 MPN 數為前處理的6.3%～18.7%，蛔蟲卵死亡率為 83%～85%；處理機處理后，大腸 桿菌幾乎全部被滅殺，蛔蟲卵死亡率為96%～99%。

對試驗結果進行單因素方差分析，因變量大腸桿菌 MPN 數：無害化處理池、掩埋、處理機與前處 理之間均存在顯著性差異（0.01＜P＜0.05），無害化處理池、掩埋、處理機之間差異不顯著（P＞0.05）； 因變量蛔蟲卵死亡率：無害化處理池、掩埋、處理機與前處理之間差異極顯著（P＜0.01），無害化處理 池與掩埋組之間差異顯著，無害化處理池、掩埋與處理機之間差異極顯著（P＜0.01）。

表4 處理前后大腸桿菌MPN數與蛔蟲卵死亡率

2.3 磺胺二甲基嘧啶和鹽酸土霉素檢測結果

2.3.1 最低檢測限磺胺二甲基嘧啶為0.05mg/kg，鹽酸土霉素為 0.15mg/kg。

2.3.2 磺胺二甲基嘧啶和鹽酸土霉素HPLC 檢測條件通過 HPLC 檢測，檢測條件適合檢測磺胺二甲基 嘧啶和鹽酸土霉素，峰型良好且無重疊，證明該條件下檢測磺胺二甲基嘧啶和鹽酸土霉素含量準確、可信，具有科學性，見圖 7，圖 8。

圖7 磺胺二甲基嘧啶色譜圖

圖8 鹽酸土霉素色譜圖

表5 處理前后磺胺二甲基嘧啶和鹽酸土霉素檢測情況

對試驗結果進行單因素方差分析，因變量磺胺二甲基嘧啶（SM2）含量：前處理與處理池、掩埋、處理機處理后差異極顯著（P＜0.01）；處理池、掩埋、處理機無顯著性差異（P＞0.05）。因變量鹽酸土 霉素：前處理與處理池、掩埋差異極顯著（P＜0.01），前處理與處理機無顯著性差異（P＞0.05），處理 機與處理池、掩埋差異極顯著（P＜0.01），處理池與掩埋差異不顯著（P＞0.05）。

3 結論與討論

（1）無害化處理池、掩埋和處理機作為病害生豬及其產品無害化處理模式，各有其優(yōu)缺點；無害化處理池是利用動物組織中微生物的自然分解能力對組織進行分解的處理方式，操 作簡單，適 用范圍較廣，但是建設地點難找，前期成本較高，處理周期長，容易滿載，存在隱患；掩埋作為一種常用的無害化 處理模式，它的運行成本較低，操作方便，但是地點難找，處理不徹底，處理不當時容易造成二次污 染；處理機是物理與生物降解相結合的方法，是利用微生物強大地分解轉化有機物的能力，將組織變 成有機肥料的過程，實現變廢為寶和資源的再利用[6-14]。其中畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機添加耐熱 微生物，可將尸體作為氮源和碳源，加速微生物繁殖，加快尸體有機物分解，處理速度快、環(huán)保無污 染、收益高[8-9]。

（2）處理機處理后的樣品大腸桿菌 MPN 數和蛔蟲卵死亡率均符合生物有機肥中糞大腸桿菌≤100個/g，蛔蟲卵死亡率≥95%的標準，可用作有機肥使用，增加收益，在徹底處理病害生豬及其產品的同時，生產出優(yōu)質有機肥料，實現變廢為寶和資源的再利用。

（3）從處理結果看，3 種處理模式對大腸桿菌的滅殺作用與前處理后比較均有顯著性差異，但是，處理機只用了一天，掩埋和無害化處理池需要 1個月，且從數據上看處理機的處理效果也是優(yōu)于無害化 處理池和掩埋；對蛔蟲卵的滅殺作用，無害化處理機的效果更是明顯，與掩埋組和無害化處理池均有極 顯著性差異；處 理機利用耐熱微生物最大化的分解動物組織并利用85℃高溫對大腸桿菌和蛔蟲卵進行滅 殺，故效果比無害化處理池和掩埋好。

（4）不同處理模式對磺胺二甲基嘧啶和鹽酸土霉素的降解效果，根據抗生素不同有明顯差異。三種 處理模式對磺胺二甲基嘧啶降解效果明顯，但是差異不顯著。而三種處理方法降解鹽酸土霉素的效果有明顯差異，處理機與處理池、掩埋差異極顯著。無害化處理池和掩埋降解效果非常好，處理機降解效果 不明顯。范菲菲等[15]研 究表明土霉素類在土壤中存在降解（生物降解、非生物降解）、吸附、遷移等行 為，可見土霉素類在土壤中能快速降解或被吸附。病害生豬及其產品經過畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機 處理后的產品，藥物殘留仍然存在，不能作為肉骨粉出售，作為有機肥返田是安全可行的。

（5）本 試驗通過掩埋、無 害化處理池和畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機等 3種無害化處理模式對病害 生豬及其產品進行處理比較，研究處理前后4 種生豬常見病毒的變化，發(fā)現病害生豬及其產品經 30d掩 埋和處理池處理后，還能檢出繁殖與呼吸綜合征病毒和豬瘟病毒核酸陽性，說明掩埋和無害化處理池處 理方式仍然存在生物安全隱患，可造成嚴重的二次污染。而 經畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機 24h處理后，4 種生豬常見病毒病檢測都為核酸陰性。

（6）綜合比較掩埋、無害化處理池和畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機等三種無害化處理模式，掩埋雖 然操作方便，但掩埋點難找、處理周期長、人工費用大、生物安全水平低，不僅造成資源浪費還會帶來 污染隱患；無害化處理池一度成為病害動物及其產品無害化處理的主要模式，但建設點難找、費用比較 高、需專人管理、容易滿載，同時存在污染地下水隱患；畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機，操作方便，周 期較短，處理徹底，同時生產出高檔有機肥，實現廢棄物的安全資源化利用，符合環(huán)境保護與資源再生的理念，是病死畜禽無害化處理的主要發(fā)展方向[16-22]。

總之，病害生豬及其產品三種無害化處理模式，對大腸桿菌、蛔蟲卵和病毒均有滅殺作用，對抗生 素有降解效果，但是處理機對病毒、細菌、蛔蟲卵的滅殺效果最好，對環(huán)境的污染也最小，實現廢棄物的無害化處理與資源化利用。

[1]中化化工標準化研究所.GB/T 6679-2003固體化工產品采樣通則[S].中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局.

[2]農業(yè)部微生物物肥料質量監(jiān)督檢驗檢測中心.GB/T 19524.1-2004 肥料中糞大腸菌群的測定[S].中華人民共和國國家 質量監(jiān)督檢驗檢疫總局.

[3]農業(yè)部微生物物肥料質量監(jiān)督檢驗檢測中心.GB/T 19524.2-2004 肥料中蛔蟲卵死亡率的測定[S].中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局.

[4]中華人民共和國農業(yè)部.GB-29694-2013動物性食品中13種磺胺類藥物多殘留的測定（高效液相色譜法）[S].

[5]中華人民共和國衛(wèi)生部.GB-5009.116-2003畜、禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量的測定（高效液相色譜法）[S].

[6]畜禽養(yǎng)殖主推技術專欄.病死畜禽無害化處理主推技術[J].中國畜牧業(yè),2013,24(2):48-51.

[7]林長光,邱章泉,江宵兵.借鑒臺灣經驗推進福建省病死畜禽無害化處理的政策建議[J].福建畜牧獸醫(yī),2009,31(3):23-25.

[8]徐百萬,李秀峰,陳國勝,等.GB 16548-2006 病害動物和病害動物產品生物安全處理規(guī)程[S].北京:中國標準出版社,2006.

[9]林維宣.各國食品中農藥獸藥殘留量規(guī)定[M].大連:大連海事大學出版社,2002:1298,1330.

[10]王曼霞,林黎明,劉心同等.高效液相色譜法測定動物組織中 8 種磺胺類藥物殘留量[J].化學分析計量,2004,13(2):14-16.

[11]耿志明,李鵬,陳明,等.基質固相分散～高效液相色譜法測定魚肉中磺胺類藥物殘留[J].江蘇農業(yè)學報,2006,22(3):310-312.

[12]張艷,吳銀良.固相萃取～高效液相色譜法測定動物肉組織中磺胺類藥物的殘留[J].色譜,2005,23(6):636-638.

[13]Thompson T S,Noot D K.Determination of sulfonamides in honey by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Analytica Chimica Acta,2005,551:168-176.

[14]柏紹蘭,包麗仙,解佳薇.病害動物及產品無害化處理現狀與對策[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘,2015(4):26,45.

[15]范菲菲,朱健等.獸藥土霉素在土壤環(huán)境中的行為[J].中國獸醫(yī)雜志,2013,49(8):58-59.

[16]黃曉蓉,鄭晶,吳謙等.食品中多種抗生素殘留的微生物篩檢方法研究[J].食品科學,2007,28(8):418.

[17]習佳林,董紅敏,朱志平等.死畜禽堆肥化處理研究進展[J].中國農業(yè)科技導報,2010,12(2):76-80.

[18]國家環(huán)?？偩?關于減免家禽業(yè)排污費等有關問題的通知[EB/OL].http://www.zhb.gov.cn/epi-sepa/zcfg/w3/fa2004- 43.htm2004/3/15/2012/1219,2004.

[19]馮金水.病死豬無害化處理的模式比較[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘,2013,29（9）:94.

[20]郝鳳佩,孔曉玲,尚斌等.死畜禽無害化處理技術及設施設備研究進展[J].中國農業(yè)科技導報,2014.

[21]Sander J E,Warbingfton M C,Myers L M.Selected methods of animal carcass disposal[J].J Am Veteri Med Assoc,2002,220(7):1003-1005.

[22]De Rouchey J M,Harner J P,Murphy J P.Catastrophic mortality composting:Is it safe and effective[J]J.Appl Poulrty Res,2005,14(2):414-416.