張榮濤

（天津市天獅生命科學(xué)與技術(shù)研究院，天津301700）

RP-HPLC法測定保健食品中阿魏酸、異阿魏酸含量

張榮濤

（天津市天獅生命科學(xué)與技術(shù)研究院，天津301700）

建立RP-HPLC色譜測定女士保健食品中阿魏酸、異阿魏酸含量的方法。采用70%甲醇加熱回流提取方法處理樣品，用YMC-C18色譜柱分離，梯度洗脫，以阿魏酸、異阿魏酸為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用PDA檢測器分別在320 nm波長處檢測。結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)阿魏酸、異阿魏酸的保留時(shí)間分別為9.2 min和9.8 min，不存在干擾，分離度大于1；分別在4.5 μg/mL～45.8 μg/mL、7.2 μg/mL～36.0 μg/mL濃度范圍比值呈良好的線性關(guān)系（r＞0.999 2），樣品日內(nèi)精密度的RSD小于2.2%，樣品平均加樣回收率：阿魏酸為99.5%、異阿魏酸97.2%。

阿魏酸；異阿魏酸；PDA

目前中國市場上主流的女性保健食品是以美容養(yǎng)顏、補(bǔ)氣養(yǎng)血、安神助眠為主要功能的。而以改善女性性功能為導(dǎo)向改善女性免疫力、緩解女性體力疲勞方向的功效產(chǎn)品，在中國保健品市場尚處于真空狀態(tài)。該方法對(duì)女士保健食品中功效成分阿魏酸、異阿魏酸含量同時(shí)進(jìn)行綜合測定。

1 儀器、試劑及原料

WATERS2695型高效液相色譜儀：美國WATERS公司；高效液相色譜柱：ODS-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μL，日本）；XS-205型電子天平：Mettler-Toldo公司；對(duì)照品阿魏酸、純度99.6%異阿魏酸：中國藥品生物制品檢定所；乙腈：色譜純，美國FISHER公司；超純水：由Milli-Q超純水系統(tǒng)制備，其它試劑均為分析純；原料：改善女性亞健康女士保健食品，天津市天獅生命科學(xué)與技術(shù)研究院。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱為ODS-C18柱（4.6mm×250mm，5μm，12m），柱溫：25℃，洗脫方式：梯度洗脫。洗脫條件見表1。

流量：1.0 mL/min；檢測波長：320 nm；進(jìn)樣體積：20 μL。

表1 色譜洗脫條件Table 1 Chromatographic elution conditions

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

用十萬分之一電子天平精確稱量阿魏酸、異阿魏酸標(biāo)樣，以70%甲醇配制成45.8、36.1 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。

2.3 樣品處理

精密稱量女士中藥保健品配方原料0.500 0 g，用70%甲醇70℃水浴回流提取30 min，定容100 mL，用0.45 μm針孔濾膜過濾，過濾液為待測液。

3 結(jié)果

3.1 方法專屬性

按2.1所述色譜條件，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)阿魏酸、異阿魏酸的保留時(shí)間分別為9.2 min和9.8 min，不存在干擾，分離度大于1.2，峰形良好，如圖1所示。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)阿魏酸與異阿魏酸圖譜Fig.1 Chromatogram of standard ferulic acid and isoferulic

圖2～圖3為RP-HPLC法測定女士中藥保健品水溶性提取物中阿魏酸、異阿魏酸的色譜圖與光譜圖。在圖2中，女士中藥保健品內(nèi)源性物質(zhì)320 nm不存在干擾物質(zhì)，專屬性強(qiáng)。圖3，阿魏酸與異阿魏酸200 nm～400 nm光譜圖相似。

圖2 樣品中阿魏酸與異阿魏酸圖譜Fig.2 Chromatogram of sample ferulic acid and isoferulic

圖3 樣品中阿魏酸（上）與異阿魏酸（下）光譜圖Fig.3 Spectrum of sample ferulic acid（up）and isoferulic（down）

3.2 線性

標(biāo)準(zhǔn)品阿魏酸溶液稀釋配制成36.64、27.48、18.32、9.16、4.58 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)針測試其對(duì)應(yīng)峰面積如圖所示：4 465 917.371、3 549 910.16、2 685 182.62、1 793 455.08、888 727.54、445 863.77（MV*S）；標(biāo)準(zhǔn)品異阿魏酸溶液濃度及對(duì)應(yīng)出峰面積：

36.0 、28.8、21.6、14.4、7.2 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，峰面積為2 720 568.4、2 186 454.7、1 692 341.08、1 078 227.39、554 113.6（mV·s）。

圖4 阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.4 Standard curve of ferulic acid

圖4標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)顯示，阿魏酸在4.5 μg/mL～36.6 μg/mL之間表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，R2值大于0.999 9。

圖5 異阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.5 Standard curve of isoferulic acid

圖5標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)顯示，阿魏酸在7.2 μg/mL～36.0 μg/mL之間也表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，R2值大于0.999。

3.3 精密度

3.3.1 阿魏酸日間精密度

取阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)線性內(nèi)高、中、低36.64、18.32、4.58 μg/mL 3點(diǎn)進(jìn)行測試，每次平行進(jìn)樣2次，日內(nèi)間隔4 h連續(xù)測試6次，見表2。

3.3.2 異阿魏酸日間精密度［1］

取異阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)線性內(nèi)高、中、低三點(diǎn)測試，結(jié)果見表3。

表2 阿魏酸測定日精密度6次進(jìn)樣Table 2 The result of ferulic acid's precision

表3 異阿魏酸測定日精密度6次進(jìn)樣Table 3 The result of isoferulic acid's precision

結(jié)果顯示，阿魏酸低、中、高3個(gè)濃度樣品的日內(nèi)精密度的RSD分別為：1.9%、1.2%、2.2%；異阿魏酸低、中、高3個(gè)濃度樣品的日內(nèi)精密度的RSD分別為：0.5%、1.1%、0.8%。

3.4 回收率

采用加標(biāo)回收法測試方法準(zhǔn)確度［2］，加入樣品溶液80%、100%、120%濃度水平［3］標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行測試，計(jì)算回收率見表4。

表4 阿魏酸加樣回收［4］Table 4 Collection of adding standard ferulic

阿魏酸回收率：高、中、低三濃度標(biāo)準(zhǔn)加樣回收率分別是101%、100.1%、98.6%

異阿魏酸回收率：高、中、低三濃度標(biāo)準(zhǔn)加樣回收率分別是97.9%、98.3%、98.9%。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示對(duì)阿魏酸與異阿魏酸的含量測定方法適應(yīng)性是滿足要求的。

表5 異阿魏酸加樣回收Table 5 Collection of adding standard isoferulic

3.5 檢出限

以10倍的信噪比［5］考察方法檢出限，其異阿魏酸注入濃度為1.2 μg/mL、阿魏酸注入濃度值0.3 μg/mL。

4 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)是針對(duì)一款改善女性亞健康狀態(tài)的中藥復(fù)方保健產(chǎn)品開發(fā)，旨在同時(shí)對(duì)其產(chǎn)品功效成分阿魏酸、異阿魏酸進(jìn)行一次性準(zhǔn)確測試的方法。中藥保健食品多屬于中藥復(fù)方產(chǎn)品，含有多種提取藥材，功效因子相互干擾，功效成分不易分離、定量測定。本實(shí)驗(yàn)通過建立并優(yōu)化梯度洗脫方法對(duì)混合異構(gòu)體（阿魏酸、異阿魏酸）進(jìn)行了準(zhǔn)確分離，摸索創(chuàng)建了一種較傳統(tǒng)方法更為實(shí)用的測試方法。阿魏酸、異阿魏酸線性R2＞0.999、平均回收率＞98%、日間中間精密度＜2.2%、檢測限度不低于1.2 μg/mL。結(jié)果表明其線性、專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、檢測限度均在合理變化范圍之內(nèi)。

［1］趙建平，張玲，張美玲.H PLC測定風(fēng)濕寧膠囊中阿魏酸的含量［J］.中成藥，2004，26（12）：1080

［2］肖智朋．RP-HPLC法測定安坤顆粒中阿魏酸的含量 ［J］．中國藥師，2009，12（10）：1389-1390

［3］王萬，原紅果，賀亞玲，等．當(dāng)歸配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J．中成藥，2006，28（12）：1843-1844

［4］袁麗霞，王紅．HPLC法測定當(dāng)歸苦參丸中阿魏酸的含量［J］．中國藥事，2008，22（1）：61-62

［5］謝先吉，王臨潤，吳文娟．經(jīng)通口服液中阿魏酸含量測定方法的研究［J］．藥物分析雜志，2005，25（8）：992-993

Determination the Content of Ferulic Acid and Isoferulic Acid in One Health Care Product by RP-HPLC

ZHANG Rong-tao
（Tianjin tiens academy of life science and technology，Tianjin 301700，China）

To found the method of determination the content of Ferulic acid，Isoferulic acid in one female herbal health-care product.Using 70%methanol heating reflux extraction，using HPLC with YMC-C18，equal elution，and having Ferulic acid，Isoferulic as standard material l，separated and determined it with PDA detector at 320 nm.Experiment result proved that Ferulic acid，Isoferulic acid was able to have good retained time at 9.2 min and 9.8 min，and no interference，separation degree＞1，Respectively in 4.5 μg/mL-45.8 μg/mL，7.2 μg/mL-36.0 μg/mL those are good linear relationship between the ratio （r＞0.999 0）.The recovery rate：Ferulic acid was 99.5%，Isoferulic acid 97.2%。

ferulic acid；isoferulic acid；Photo-Diode Array

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.04.033

2013-12-09

張榮濤（1978—），男（漢），副研究員，碩士，研究方向：保健食品功效成分分析及驗(yàn)證。