張毅波，楊念婉，張桂芬，王進(jìn)軍，萬(wàn)方浩*

(1．中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，植物病蟲(chóng)害生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100193;2．西南大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，重慶500070)

煙粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)因其分布范圍廣、危害嚴(yán)重、寄主譜廣泛、生物型復(fù)雜、產(chǎn)卵量大、傳播病毒種類(lèi)多、抗藥性強(qiáng)、擴(kuò)張蔓延速度快等特點(diǎn)，成為世界各國(guó)竭力防控的目標(biāo)(Brown et al．，1995;Pascual and Callejas，2004;De Barro et al．，2011;劉樹(shù)生，2012)。其中，尤以中東-小亞細(xì)亞1(MEAM1)隱種和地中海 (MED)隱種更為突出，兩者已成為制約我國(guó)蔬菜、觀賞植物及經(jīng)濟(jì)作物等產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要瓶頸 (羅晨等，2006;Wan et al．，2010;高建昌等，2011)。目前，我國(guó)粉虱類(lèi)害蟲(chóng)的防治主要依靠化學(xué)藥劑。由于化學(xué)農(nóng)藥對(duì)非靶標(biāo)天敵的危害和煙粉虱抗藥性的快速發(fā)展，利用自然天敵的生物防治方法已逐漸成為控制煙粉虱危害的一項(xiàng)潛在有力措施 (Wan et al．，2009;Xu et al．，2013;Yang et al．，2014)。

自1850年Haldeman建立槳角蚜小蜂屬以來(lái)，世界范圍內(nèi)已經(jīng)鑒定并命名的槳角蚜小蜂達(dá)65種，其中以煙粉虱為寄主的達(dá) 24種 (Kirk et al．，2000;Naranjo et al．，2004;Zolnerowich and Rose，2008;孟瑞霞等，2008;皇甫偉國(guó)等，2010;王繼紅等，2011)。槳角蚜小蜂屬寄生蜂是控制粉虱類(lèi)(尤其是煙粉虱)害蟲(chóng)的重要天敵類(lèi)群 (Rose et al．，1996)。然而，此類(lèi)寄生蜂個(gè)體微小，成蟲(chóng)體長(zhǎng)不足1 mm，而且外部形態(tài)極為相似，僅僅依據(jù)形態(tài)特征，包括雌蜂觸角棒節(jié)形狀和大小，產(chǎn)卵器形狀和長(zhǎng)度，前翅特征等外部特征(Haldeman，1850;Dozier，1932;Rose and Rosen，1991-1992;Rose and Zolnerowich，1997)，很難快速準(zhǔn)確區(qū)分。

2008年，中國(guó)農(nóng)科院植保所從美國(guó)德克薩斯農(nóng)工大學(xué)引進(jìn)了海氏槳角蚜小蜂Eretmocerus hayati，用于煙粉虱生防防治研究 (Yang and Wan，2011;Yang et al．，2012，Xu et al．，2013)。熱孜萬(wàn)古麗．阿布都哈尼等 (2013)在新疆維吾爾自治區(qū)吐魯番地區(qū)棉田發(fā)現(xiàn)一種自然發(fā)生的槳角蚜小蜂屬的地理種群。新疆種群能夠在自然條件極為干旱、晝夜溫差大的吐魯番地區(qū)建立種群并大范圍發(fā)生，我們猜測(cè)這種寄生蜂可能對(duì)極端氣候具有很強(qiáng)的適應(yīng)能力和大范圍應(yīng)用的生防潛力。同時(shí)，我們?cè)谥袊?guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院廊坊實(shí)驗(yàn)基地采集到一種自然發(fā)生槳角蚜小蜂種群。為了進(jìn)一步利用本地槳角蚜小蜂生物防治粉虱類(lèi)害蟲(chóng)，亟待對(duì)他們進(jìn)行準(zhǔn)確的物種鑒定。

當(dāng)前，基于線粒體COⅠ基因序列的分子生物學(xué)物種快速鑒定手段在昆蟲(chóng)鑒定中得到廣泛應(yīng)用。這些研究主要涉及:葉甲類(lèi) (鄭福山等，2007;代金霞和張大治，2010)、蝽類(lèi) (梁秋英，2009)、鱗翅目蛾類(lèi)(楊聰慧等，2012;張桂芬等，2013)、蚜蟲(chóng)類(lèi) (王劍峰和喬格俠，2007;陳占秀和顧耘，2012)、薊馬類(lèi) (喬瑋娜等，2012;Zhang et al．，2012)、介殼蟲(chóng)類(lèi) (田虎等，2013)等等。這種方法不僅能夠準(zhǔn)確快速區(qū)別和鑒定物種，也是發(fā)現(xiàn)、鑒定新種和隱種的有效手段 (Smith et al．，2005)。然而，新種的鑒定和命名不能僅僅依靠DNA分類(lèi)的結(jié)果，片面依賴(lài)分子數(shù)據(jù)來(lái)區(qū)分物種是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，準(zhǔn)確的物種鑒定還須與傳統(tǒng)形態(tài)或生態(tài)等特征相結(jié)合 (Miller，2007;Ross et al．，2010;Yeates et al．，2011)。

生殖隔離是生物種定義中最基本的特征之一。種間雜交作為驗(yàn)證物種生殖隔離的最直接方法，在膜翅目寄生性天敵間被廣泛的使用，并且為傳統(tǒng)分類(lèi)學(xué)的物種定名提供依據(jù) (Pinto and Stouthamer，1994;Billah et al．，2008)，比如赤眼蜂的鑒定 (Stouthamer et al．，2000;Pinto et al．，2003)，短背繭蜂屬果蠅寄生蜂 (Billah et al．，2008)等。槳角蚜小蜂大多營(yíng)孤雌產(chǎn)雄生殖方式，不同種群間能否雜交并產(chǎn)生具有生殖能力的雌性后代就成為判斷種群間基因能否交流的指標(biāo)，也是鑒定是否為同物種的重要特征之一 (Hunter et al．，1996)。

本研究針對(duì)槳角蚜小蜂體型小、難以與其他同域近緣種寄生蜂快速準(zhǔn)確區(qū)別的問(wèn)題，以海氏槳角蚜小蜂 Eretmocerus hayati，古橋槳角蚜小蜂Eretmocerus furuhashii，未知槳角蚜小蜂屬新疆吐魯番種群Eretmocerus sp．XJ和未知槳角蚜小蜂屬河北廊坊種群Eretmocerus sp．LF四種寄生蜂為研究對(duì)象，結(jié)合NCBI已發(fā)表的其他槳角蚜小蜂的基因序列，采用COⅠ基因序列分析明確兩個(gè)未知槳角蚜小蜂種群的系統(tǒng)發(fā)育地位，進(jìn)而利用親緣關(guān)系相近種種間雜交方法聯(lián)合鑒定未知物種。

1 材料與方法

1.1 供試蟲(chóng)源

海氏槳角蚜小蜂由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所生物入侵研究室2008年從美國(guó)德克薩斯農(nóng)工大學(xué)引入 (上世紀(jì)90年代從巴基斯坦引入美國(guó)，Zolnerowich and Rose，2008)，古橋槳角蚜小蜂種群由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲(chóng)研究所臧連生研究員提供，槳角蚜小蜂新疆種采自新疆維吾爾自治區(qū)吐魯番地區(qū)棉花地，槳角蚜小蜂廊坊種群采自河北省廊坊市中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所廊坊中試基地的棉花地，其中槳角蚜小蜂新疆種群和廊坊種群由福建農(nóng)林大學(xué)黃建教授幫助鑒定到屬。

1.2 DNA提取

寄生蜂DNA提取方法參照Teng et al．(2010)報(bào)道的方法并稍加改進(jìn)。用軟毛毛筆輕輕挑取單頭寄生蜂成蟲(chóng)，置于滴有20μL提取緩沖液(50 mmol/L Tris-HCl， l mmol/L EDTA， 1%SDS，20 mmol/L NaCl，pH8．0)的 parafilm 膜上，以PCR管底部作為勻漿器充分研磨，勻漿液移入1．5 mL離心管;然后以200μL緩沖液分2次沖洗勻漿器、合并混勻;加入 5μL蛋白酶 K(20 mg/mL)，充分混勻后于60℃水浴1 h(中途混勻1次);然后沸水浴5 min，加入220μL氯仿/異戊醇 (v∶v=24∶1)，輕柔混勻后，冰浴30 min;然后于4℃ 12000 r/min離心20 min，取上清液，加入440μL預(yù)冷無(wú)水乙醇，輕柔混勻后于-30℃放置30 min;4℃ 12000 r/min離心15 min，小心棄去上清液。加入500μL預(yù)冷75%乙醇洗滌，4℃ 12000 r/min離心15 min，小心棄去上清液;然后將離心管倒扣于潔凈濾紙上，自然干燥20 min。每管加入20μL超純水，充分溶解后于-30℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 PCR擴(kuò)增、電泳檢測(cè)以及序列測(cè)定

依據(jù)本實(shí)驗(yàn)室以往的經(jīng)驗(yàn)和電泳譜帶的多態(tài)性程度，選取引物 C1-J-2183(5'-CAAC ATTTATTTTGATTTTTTGG-3')和TL2-N-3014(5'-TCCAATGCACTAATCTGCCA TATT-3')(Simon et al．，1994)，引物由上海生工生物工程有限公司合成。然后，以四種槳角蚜小蜂的DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

反應(yīng)體系為25μL，其中超純水 18．75μL，10×緩沖液 2．5 μL(包含鎂離子)，0．2 mmol/L dNTPs 0．5μL，Taq聚合酶2．5 μL，5 pmol/L 每種引物0．5μL，模板DNA 2μL。擴(kuò)增程序?yàn)?95℃預(yù)變性3 min;35個(gè)循環(huán):94℃ 45 s，53℃ 1 min，72℃ 2 min;最后72℃延伸2 min。擴(kuò)增反應(yīng)在ABI-9700 PCR基因擴(kuò)增儀上運(yùn)行。

取1μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，加1μL上樣緩沖液(0．25% 溴酚蘭，40% 蔗糖水溶液)，以 DNA Marker為參照，在含有染色劑GoldView的1．5%的瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳分離 (電泳液為0．5×TBE)，105 V電泳25 min后，以GelDoc Universal Hood II型凝膠成像系統(tǒng)分析結(jié)果。將經(jīng)電泳檢測(cè)驗(yàn)證合格的PCR產(chǎn)物送上海生工生物工程有限公司雙向測(cè)序，獲得的序列利用MEGA 5．0軟件進(jìn)行拼接。根據(jù)標(biāo)本數(shù)量及PCR產(chǎn)物的質(zhì)量，海氏槳角蚜小蜂測(cè)序5頭，古橋槳角蚜小蜂測(cè)序6頭，槳角蚜小蜂新疆種群測(cè)序10頭，槳角蚜小蜂廊坊種群測(cè)序5頭。每種寄生蜂選取1條拼接序列錄入美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心 (National Center of Biotechnology Information，NCBI)數(shù)據(jù)庫(kù)。

1.4 COⅠ序列分析

以Bioedit軟件讀取序列，并對(duì)每條序列進(jìn)行人工堿基讀取和反復(fù)校對(duì)。校正后的堿基序列在NCBI上進(jìn)行同源性比對(duì)，以確保獲得的序列為目的基因片段。然后，結(jié)合NCBI中已公開(kāi)的有效槳角蚜小蜂屬寄生蜂的 COⅠ 序列 (表 1)，用ClustalX進(jìn)行COⅠ基因序列分析 (Herbert et al．，2004)，用MEGA 5．0軟件以Kimura雙參數(shù)模型計(jì)算種內(nèi)及種間遺傳距離 (Kumar et al．，2004;Tamura et al．，2007)，采用最大簡(jiǎn)約法 (Maximum parsimony，MP)和 最 大 似 然 法 (Maximum likelihood，ML)分別構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分支的置信度采用自展法 (bootstrap analysis，BP)重復(fù)檢測(cè)1 000次。為了檢驗(yàn)樣本種間遺傳變異與種內(nèi)個(gè)體間遺傳變異的差異是否顯著，使用MEGA 5．0軟件計(jì)算種內(nèi)及種間遺傳距離并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

1.5 雜交試驗(yàn)

由于只有海氏槳角蚜小蜂和槳角蚜小蜂新疆種群的室內(nèi)種群，所以我們針對(duì)兩個(gè)種群開(kāi)展了雜交實(shí)驗(yàn)。結(jié)合以上COⅠ基因序列比對(duì)結(jié)果，取相似性最大的海氏槳角蚜小蜂Er．hayati和槳角蚜小蜂新疆種Er．sp．XJ初羽化寄生蜂成蟲(chóng)，進(jìn)行種間雜交試驗(yàn)，處理包括 (1)Er．hayati♀×Er．sp．XJ♂ (n=20)，(2)Er．sp．XJ♀ × Er．hayati♂ (n=20)，為證明兩種寄生蜂是否具有孤雌產(chǎn)雌的能力，我們?cè)O(shè)置 (3)Er．hayati♀ (n=21)，(4)Er．sp．XJ♀ (n=20)作為對(duì)照處理。

將每個(gè)雜交處理組合的成對(duì)寄生蜂成蟲(chóng)分別移入裝有1缽棉花植株 (2株/缽)的正方體紗網(wǎng)(100目)養(yǎng)蟲(chóng)籠 (25 cm×25 cm×25 cm)中，棉花植株帶有300-400頭2-3齡煙粉虱若蟲(chóng)。5 d后，移除寄生蜂成蟲(chóng)，將每缽棉花苗編號(hào)并移至恒溫人工智能氣候箱 (28℃，70% ±5%RH，14∶10光周期，賽福智能人工氣候箱)。8 d后，將棉花葉從植株上剪下并移至底部帶有5%(w/v)瓊脂溶液的玻璃培養(yǎng)皿 (直徑9 cm)中，棉花葉背面朝上放置，同時(shí)依據(jù)棉花植株的編號(hào)對(duì)玻璃培養(yǎng)皿編號(hào)，便于接下來(lái)記錄各處理寄生蜂后代羽化數(shù)據(jù)。此后，利用透明塑料保鮮膜將玻璃培養(yǎng)皿上口封好，置于室溫 (26℃)下。每天10∶00調(diào)查一次寄生蜂后代的羽化情況直至所有寄生蜂羽化，記錄羽化寄生蜂數(shù)和雌雄性比。

1.6 數(shù)據(jù)分析

因?yàn)殡s交試驗(yàn)中各處理寄生蜂的后代羽化數(shù)均呈正態(tài)分布和具有方差同質(zhì)性，所以單因素方差分析 (One-way ANOVA)結(jié)合最小顯著差異t檢驗(yàn) (Least Significant Difference，LSD)直接用來(lái)分析各處理間寄生蜂的后代總體羽化數(shù)差異。各處理寄生蜂的后代雌雄性比經(jīng)反正弦轉(zhuǎn)化后同樣利用單因素方差分析和LSD來(lái)分析各處理間寄生蜂后代性比間差異。數(shù)據(jù)分析采用的SAS 9．0版。

表1 本研究中用于COⅠ基因序列分析的槳角蚜小蜂種類(lèi)Table 1 List of Eretmocerus parasitoids used for COⅠsequence analysis in this study

2 結(jié)果與分析

2.1 PCR擴(kuò)增、電泳檢測(cè)以及序列測(cè)定

每頭寄生蜂均可擴(kuò)增出長(zhǎng)度約為860 bp的靶標(biāo)片段，純化測(cè)序后將目標(biāo)基因片段修剪成長(zhǎng)度為680 bp的片段進(jìn)行分析，然后在NCBI中進(jìn)行同源性比對(duì)。結(jié)果表明，4個(gè)槳角蚜小蜂種群的COⅠ堿基序列與數(shù)據(jù)庫(kù)中已知的槳角蚜小蜂種類(lèi)相對(duì)應(yīng)的COⅠ基因片段的同源性為90%-95%，說(shuō)明NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中還沒(méi)有本研究中測(cè)定的四種寄生蜂的COⅠ序列。其中，海氏槳角蚜小蜂與槳角蚜小蜂新疆種間基因相似度達(dá)98%，古橋槳角蚜小蜂與槳角蚜小蜂廊坊種群間相似度達(dá)99%。因此，將本研究測(cè)定的四種寄生蜂COⅠ序列提交NCBI，并獲得相應(yīng)登錄號(hào) (表1)。

2.2 COⅠ序列分析及系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建

使用最大簡(jiǎn)約法和最大似然法以29條槳角蚜小蜂的COⅠ序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，聚類(lèi)分析結(jié)果如圖1和圖2所示，同時(shí)進(jìn)一步比較分析了各樣本間的遺傳距離 (表2)。結(jié)果表明:槳角蚜小蜂新疆種群與海氏槳角蚜小蜂分別聚為不同分支，但兩種群間支持率達(dá)100，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)兩者的種群內(nèi)遺傳距離分別為0．0023和0．000，種群間遺傳距離0．024;槳角蚜小蜂廊坊種群與古橋槳角蚜小蜂聚為同一支，支持率也達(dá)100，兩者的種內(nèi)遺傳距離分別為0．0029和0．0173，種間遺傳距離為 0．011。

圖1 利用最大簡(jiǎn)約法構(gòu)建8種槳角蚜小蜂系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig．1 Maximum parsimony tree based on the analysis of COⅠ gene sequences of the 8 Eretmocerus parasitoids

圖2 利用最大似然法構(gòu)建的8種槳角蚜小蜂系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig．2 Maximum likelihood tree based on the analysis of COⅠ gene sequences of the 8 Eretmocerus parasitoids

2.3 種間雜交

槳角蚜小蜂新疆種群和海氏槳角蚜小蜂的初羽化處女蜂均不能產(chǎn)生雌性后代，表明兩個(gè)寄生蜂種群均無(wú)孤雌產(chǎn)雌能力;兩種寄生蜂間能夠成功雜交，并能產(chǎn)生具有生殖能力的雌性后代，且雜交后寄生蜂雌蜂生殖力 (F3，76=1．28，P=0．2878，表3)和后代性比均沒(méi)有顯著性差異(F1，37=0．33，P=0．5686，表 3)，表明寄生蜂種群間不具有生殖隔離特點(diǎn)。

表3 海氏槳角蚜小蜂與未知槳角蚜小蜂新疆種群的雜交結(jié)果Table 3 The results of the crossing tests between Eretmocerus hayati and Eretmocerus sp.XJ

續(xù)上表

3 結(jié)論與討論

準(zhǔn)確鑒定天敵的種類(lèi)是生物防治得以成功應(yīng)用的基礎(chǔ)，對(duì)天敵種類(lèi)的選擇、適時(shí)釋放以及效果評(píng)價(jià)等具有重要意義。多數(shù)寄生性天敵昆蟲(chóng)及其寄主，個(gè)體微小，形態(tài)相似，習(xí)性相近，且分布廣泛，具有多型多態(tài)現(xiàn)象。因此借助一般的形態(tài)學(xué)方法進(jìn)行種類(lèi)鑒定往往比較困難，而結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)和生態(tài)雜交實(shí)驗(yàn)可以使上述問(wèn)題得到解決 (Pinto，1998;De Barro et al．，2000)。

隨著基因測(cè)序技術(shù)的飛速發(fā)展及成本的進(jìn)一步降低，利用基因序列比對(duì)來(lái)快速鑒定物種的技術(shù)在膜翅目昆蟲(chóng)中得到廣泛應(yīng)用。De Barro et al．(2000)通過(guò)將核糖體基因的28 s區(qū)段、ITS(internal transcribed spacer，基因轉(zhuǎn)錄間隔區(qū))區(qū)段以及線粒體COⅡ基因與外部形態(tài)相結(jié)合成功證實(shí)在澳大利亞存在3個(gè)槳角蚜小蜂種。Polaszek et al．(2004)通過(guò)將13個(gè)恩蚜小蜂近似種群的核糖體基因28 s(D2區(qū)域)序列與外部形態(tài)相結(jié)合證明:Encarsia californica和 E．dispersa為新種，而E．brasiliensis(Hempel)與E．bispida DeSantis為同種異名。Rugman-Jones et al．(2009)通過(guò)分析短背繭蜂屬Psyttalia(繭蜂科:蠅繭蜂亞科)寄生蜂的28 s D2和COⅠ基因成功鑒定并區(qū)分10個(gè)來(lái)源于不同地區(qū)的相似復(fù)合種。利用COⅠ基因序列鑒定物種技術(shù) (DNA條形碼技術(shù))的有效性必須滿足兩個(gè)條件:兩個(gè)物種具有獨(dú)特的DNA序列和種間基因差異應(yīng)遠(yuǎn)大于種內(nèi)差異 (Hebert et al．2004)。同時(shí)，Hebert et al．(2003)指出當(dāng)種間差異小于0．02時(shí)，可以判定兩者為同種。本研究表明在8個(gè)槳角蚜小蜂樣本利用最大簡(jiǎn)約法和最大似然法構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)上，所有已知種均各自聚成了一個(gè)獨(dú)立分支。其中，槳角蚜小蜂廊坊種群與古橋槳角蚜小蜂聚為一支，而且種間遺傳距離為0．011，本研究初步推測(cè)兩者為同種。槳角蚜小蜂新疆種群與海氏槳角蚜小蜂分別聚為不同分支，但是種群間支持率達(dá)100，而且種群間種間遺傳距離0．024，可定為近似種或同種。

種間雜交是鑒定相似種的重要輔助手段在膜翅目昆蟲(chóng)中廣泛的應(yīng)用 (Pinto，1998)。雜交實(shí)驗(yàn)顯示，海氏槳角蚜小蜂種群能夠與槳角蚜小蜂新疆種群成功雜交，且雜交后能產(chǎn)雌性后代。這進(jìn)一步證明相似種海氏槳角蚜小蜂與槳角蚜小蜂新疆種為同種寄生蜂。相似的，Pinto et al．(2003)通過(guò)對(duì)北美洲兩種難以從形態(tài)上鑒定和區(qū)分的赤眼蜂Trichogramma minutum Riley和Trichogramma platneri Nagarkatti間進(jìn)行了103對(duì)種內(nèi)和種間的雜交試驗(yàn)證明兩種寄生蜂具有較強(qiáng)的生殖隔離水平，可以定義為不同的物種。Hunter et al．(1996)研究發(fā)現(xiàn)來(lái)源于亞利桑那，加利福尼亞和德克薩斯的三個(gè)槳角蚜小蜂本地種群雌蜂具有相似的形態(tài)特征，區(qū)分非常困難。然而，亞利桑那和加利福尼亞種群間能成功雜交，而與德克薩斯種群間卻存在明顯的生殖隔離?；谶@個(gè)結(jié)論及對(duì)三種群寄生蜂雄峰特征的分析，Rose and Zolnerowich(1997)將三個(gè)不同種群分別鑒定命名為Eretmocerus eremicus(Arizona and California)和Eretmocerus tejanus(Texas)。然而，由于對(duì)新疆種槳角蚜小蜂的起源及傳入方式并不是很清楚，我們暫時(shí)只能稱(chēng)之為海氏槳角蚜小蜂新疆自然發(fā)生種群。

另外，由于部分寄生蜂會(huì)營(yíng)孤雌生殖(Werren，1997;Zchori-Fein et al．，2001)，有些槳角蚜小蜂屬寄生蜂也有此特性。比如:De Barro et al．(2000)在澳大利亞發(fā)現(xiàn)一種蒙氏槳角蚜小蜂Eretmocerus mundus的孤雌生殖品系。Rose and Zolnerowich(2003)在美國(guó)也發(fā)現(xiàn)了一種孤雌品系的槳角蚜小蜂，但是并沒(méi)有進(jìn)一步對(duì)其鑒定。因此，我們?cè)陔s交試驗(yàn)中設(shè)計(jì)了處女蜂處理。研究結(jié)果顯示，海氏槳角蚜小蜂兩個(gè)種群的處女蜂均不具有產(chǎn)雌能力，不營(yíng)孤雌產(chǎn)雌生殖，不會(huì)對(duì)海氏槳角蚜小蜂種群間雜交結(jié)果產(chǎn)生影響。

目前對(duì)利用COⅠ基因序列鑒定物種的技術(shù)還存在一些問(wèn)題和爭(zhēng)議。有人質(zhì)疑單個(gè)短片段的序列不能提供物種水平上的可靠信息，所以結(jié)合種間雜交試驗(yàn)來(lái)共同鑒定未知槳角蚜小蜂，不僅可以提高鑒定準(zhǔn)確度，更能一定程度上彌補(bǔ)分子鑒定手段可能存在的缺陷。利用COⅠ基因序列分析種群間遺傳距離，進(jìn)而選取遺傳距離最近 (接近判定為同種的水平，0．02)的種群進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證是否為同種。這種研究方法可以為其他個(gè)體微小，形態(tài)類(lèi)似昆蟲(chóng)的快速鑒定提供參考。盡管還不清楚這種寄生蜂從何處以何種方式傳入我國(guó)，但是他們能夠在自然條件如此惡劣和特殊的新疆(干旱，晝夜溫差大等)地區(qū)建立種群并大范圍發(fā)生，預(yù)測(cè)這種寄生蜂對(duì)極端氣候具有很強(qiáng)的適應(yīng)能力。因此，圍繞此種寄生蜂對(duì)煙粉虱的生防控制潛力的研究將成為下一步的研究重點(diǎn)。

References)

Abuduhani R，Abulimiti M，Jamali R，et al．Population dynamics and spatial distribution of Bemisia tabaci and dominant parasitic wasp Eretmocerus sp．from the field of Jujube intercropping with cotton［J］．Xinjiang Agricultural Sciences，2013，50(10):1842-1849．［熱孜萬(wàn)古麗·阿布都哈尼，買(mǎi)合甫皮古麗·阿不力米提，熱孜萬(wàn)古麗·加馬力，等．棗棉套作田煙粉虱及優(yōu)勢(shì)寄生蜂槳角蚜小蜂的種群動(dòng)態(tài)及空間分布規(guī)律［J］．新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，50(10):1842-1849］

Billah MK，Kimani-Njogu SW，Wharton RA，et al．Cross mating studies among five fruit fly parasitoid populations:potential biological control implications for tephritid pests［J］．Biocontrol，2008，53:709-724．

Brown JK，F(xiàn)rohlich DR，Rosell RC．The sweetpotato or silverleaf whiteflies:Biotypes of Bemisia tabaci or a species complex ［J］．Annual Review of Entomology，1995，40:511-534．

Chen ZX，Gu Y．Study on application of COⅠgene in the Homoptera Aphididae［J］．Journal of Qingdao Agricultural University(Natural Science)，2012，29:261-266．［陳占秀，顧耘．線粒體COⅠ基因在同翅目蚜科昆蟲(chóng)種類(lèi)鑒定中的應(yīng)用研究［J］．青島農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) (自然科學(xué)版)，2012，29:261-266］

Dai JX，Zhang DZ．Discussion on the phylogeny of partial Chrysomelidae insects based on COⅠ gene sequences［J］．Journal of Ningxia Univerisity(Natural Science Edition)，2010，31(1):78-81．［代金霞，張大治．從COⅠ基因序列探討葉甲科部分昆蟲(chóng)的系統(tǒng)關(guān)系 ［J］．寧夏大學(xué)學(xué)報(bào) (自然科學(xué)版)，2010，31(1):78-81］

De Barro PJ，Driver F，Naumann ID，et al．Descriptions of three species of Eretmocerus Haldeman(Hymenoptera:Aphelinidae)parasitising Bemisia tabaci(Gennadius)(Hemiptera:Aleyrodidae)and Trialeurodes vaporariorum(Westwood)(Hemiptera:Aleyrodidae)in Australia based on morphological and molecular data［J］．Australian Journal of Entomology，2000，39(4):259-269．

De Barro PJ，Liu SS，Boykin LM，et al．Bemisia tabaci:a statement of species status［J］．Annual Review of Entomology，2011，56:1-19．

Dozier HL．The identity of certain whitefly parasites of the genus Eretmocerus Hald．，with descriptions of new species(Hymenoptera:Aphelinidae)［J］．Proceedings of the Entomological Society of Washington，1932，34:112-122．

Gao JC，Guo GJ，Guo YM，et al．Development and reproduction of Bemisia tabaci biotype B on wild and cultivated tomato accessions［J］．Acta Ecologica Sinica，2011，31(23):7211-7217．［高建昌，郭廣君，國(guó)艷梅，等．不同番茄材料對(duì)B型煙粉虱個(gè)體發(fā)育和繁殖能力的影響［J］．生態(tài)學(xué)報(bào)，2011，31(23):7211-7217］

Kirk AA，Lacey LA，Brown JK，et al．Variation in the Bemisia tabaci s．l．species complex(Hemiptera:Aleyrodidae)and its natural enemies leading to successful biological control of Bemisia biotype B in the USA ［J］．Bulletin of Entomological Research，2000，90:317-327．

Kumar S，Tamura K，Nei M．MEGA3:Integrated software for molecular evolutionary genetics analysis and sequence alignment ［J］．Briefings in Bioinformatics，2004，5(2):150-163．

Haldeman SS．On four new species of Hemiptera of the genera Ploiaria，Chermes，Aleurodes，and two new Hymenoptera，parasitic on the last named genus［J］．American Journal of Science，1850，IX:108-111．

Hebert PDN，Penton EH，Burns JM，et al．Ten species in one:DNA barcoding reveals cryptic species in the neotroical skipper butterfly Astraptes fulgerator［J］．Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2004，101(41):14812-14817．

Hebert PDN，Ratnasingham S，De Waard JR．Barcoding animal life:cytochrome coxidase subunit I divergences among closely related species［J］．Proceedingsof the Royal Society B Biological Sciences，2003，270(1):S96-S99．

Huangfu WG，Dong S，Gao MQ，et al．Bemisia tabaci(Gennadius)and its hymenopteran parasitoids in Ningbo，China［J］．Journal of Environmental Entomology，2010，32(3):375-379．［皇甫偉國(guó)，董帥，高明清，等．寧波地區(qū)煙粉虱及其寄生蜂調(diào)查［J］．環(huán)境昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)，2010，32(3):375-379］

Hunter MS，Antolin MF，Rose M．Courtship behavior，reproductive relationships，and allozyme patterns of three North American populations of Eretmocerus nr．californicus (Hymenoptera:Aphelinidae)parasitizing the whitefly Bemisia sp．，tabaci complex(Homoptera:Aleyrodidae)［J］．Proceedings of the Entomological Society of Washington，1996，98:126-137．

Liang QY．Molecular phylogeny analysis of 9 species of Pentatoma(Hemioptera:Pentatomidae)inferred from COⅠgene sequence［J］．Entomotaxonomia，2009，31(2):105-114．［梁秋英 ．基于COⅠ基因序列的九種真蝽屬昆蟲(chóng)的分子系統(tǒng)學(xué)研究 (半翅目:蝽科)［J］．昆蟲(chóng)分類(lèi)學(xué)報(bào)，2009，31(2):105-114］

Liu SS．Bemisia tabaci:a species complex ［J］．Chinese Journal of Biological Control，2012，28(4):466．［劉樹(shù)生．煙粉虱是一個(gè)物種復(fù)合體 ［J］．中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)，2012，28(4):466］

Luo C，Guo XJ，Yue M，et al．Host plant effects on the morphological and biological characteristics of Bemisia tabaci(Gennadius)biotype B［J］．Biodiversity Science，2006，14(4):333-339．［羅晨，郭曉軍，岳梅，等．寄主植物對(duì)B型煙粉虱形態(tài)學(xué)和生物學(xué)特性的影響 ［J］．生物多樣性，2006，14(4):333-339］

Meng RX，Zhang QW，Liu XX．Progress in the application of biological control of Bemisia tabaci［J］．Chinese Journal of Biological Control，2008，24(1):80-84．［孟瑞霞，張青文，劉小俠．煙粉虱生物防治應(yīng)用現(xiàn)狀 ［J］．中國(guó)生物防治，2008，24(1):80-84］

Miller SE．DNA barcoding and the renaissance of taxonomy［J］．Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2007，104(12):4775．

Naranjo SE，Ellsworth PC，Hagler JR．Conservation of natural enemies in cotton:role of insect growth regulators in management of Bemisia tabaci［J］．Biological Control，2004，30:52-72．

Pascual S，Callejas C．Intra-and interspecific competition between biotypes B and Q of Bemisia tabaci(Hemiptera:Aleyrodidae)from Spain［J］．Bulletin of Entomological Research，2004，94:369-375．

Pinto JD．Systematics of the North American species of Trichogramma Westwood(Hymenoptera:Trichogrammatidae)［M］．Memoirs of the Entomological Society of Washington，1998，22:1-287．

Pinto JD， Platner GR， Stouthamer R． The systematic of the Trichogramma minutum species complex (Hymenoptera:Trichogrammatidae)，a group of important North American biological control agents:the evidence from reproductive compatibility and allozymes ［J］．Biological Control，2003，27:167-180．

Pinto JD，Stouthamer R．Systematics of the Trichogrammatidae with emphasis on Trichogramma．In:Wajnberg E，Hassan SA，eds．Biological Control with Egg Parasitoids［M］．Wallingford:CAB International，1994，1-36．

Polaszek A，Manzari S，Quicke DLJ．Morphological and molecular taxonomic analysis of the Encarsia meritoria species-complex(Hymenoptera， Aphelinidae)， parasitoids of whiteflies(Hemiptera，Aleyrodidae)of economic importance［J］．Zoologica Scripta，2004，33:403-421．

Qiao WN，Wan FH，Zhang AB，et al．Application of DNA barcoding technology for species identification of common thrips(Insect:Thysanoptera)in China ［J］．Acta Entomologia Sinica，2012，55(3):344-356．［喬瑋娜，萬(wàn)方浩，張愛(ài)兵，等．DNA條形碼技術(shù)在田間常用薊馬種類(lèi)識(shí)別中的應(yīng)用［J］．昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)，2012，55(3):344-356］

Rose M， Rosen D．Eretmocerus debachi n． sp． (Hymenoptera:Aphelinidae)，an effective parasite of Parabemisia myricae(Homoptera:Aleyrodidae)［J］．Israel Journal of Entomology，1991-1992，25-26:199-207．

Rose M， Zolnerowich G．Eretmocerus Haldeman (Hymenoptera:Aphelinidae)in the United States，with descriptions of new species attacking Bemisia(tabaci complex)(Homoptera:Aleyrodidae)［J］．Proceedings of the Entomological Society of Washington，1997，99:1-27．

Rose M，Zolnerowich G．Eretmocerus picketti new species(Hymenoptera:Chalcidoidea:Aphelinidae)，reared from Tetraleurodes acaciae(Quaintance)(Homoptera:Aleyrodidae:Aleyrodinae)［J］．Pan．Pacific．Entomologist，2003，79:119-127．

Rose M，Zolnerowich G，Hunter MS．Systematics，Eretmocerus，and Biological Control．In:Gerling D，ed．Bemisia:Taxonomy，Biology，Damage and Management［M］．Hants:Intercept，1995．

Ross KG，Gotzek D，Ascunce MS，et al．Species delimitation:a case study in a problematic ant taxon ［J］．Systematic Biology，2010，59(2):162-184．

Rugman-Jones PF，Wharton R，van Noort T，et al． Molecular differentiation of the Psyttalia concolor(Szepligeti)species complex(Hymenoptera:Braconidae)associated with olive fly，Bactrocera oleae(Rossi)(Diptera:Tephritidae)，in Africa［J］．Biological Control，2009，49:17-26．

Smith MA，F(xiàn)isher BL，Hebert PDN．DNA barcoding for effective biodiversity assessment of a hyperdiverse arthropod group:the ants of Madagascar［J］．Philosophical Transactions of the Royal Society of London，Series B，Biological Sciences，2005，360(1462):1825-1834．

Stouthamer R， Jochemsen P， Platner GR， et al． Crossing incompatibility between Trichogramma minutum and T．platneri(Hymenoptera:Trichogrammatidae):Implications for application in biological control［J］．Environmental Entomology，2000，29(4):832-837．

Tamura K，Dudley J，Nei M，et al．MEGA 4:Molecular evolutionary genetics analysis(MEGA)software version 4．0 ［J］．Molecular Biology and Evolution，2007，24(8):1596-1599．

Teng X，Wan FH，Chu D．Bemisia tabaci Biotype Q dominates other biotypes across China［J］．Florida Entomologist，2010，93(3):363-368．

Tian H，Li XF，Wan FH，et al．Identification of Phenacoccus solenopsis Tinsley(Heimiptera:Pseudococcidae)with species-specific COⅠ(SS-CO Ⅰ )primers［J］．Acta Entomologia Sinica，2013，56(6):689-696．［田虎，李小鳳，萬(wàn)方浩，等．利用種特異性COⅠ引物 (SS-COⅠ)鑒別扶桑綿粉蚧 ［J］．昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)，2013，56(6):689-696］

Wan FH， Zhang GF， Liu SS， et al． Invasive mechanism and management strategy of Bemisia tabaci(Gennadius)biotype B:progress report of 973 program on invasive alien species in China［J］．Science in China Series C:Life Science，2009，25:88-95．

Wang JF，Qiao GX． Application of DNA barcoding to Aphidinea(Insecta:Hemiptera)studies［J］．Acta Zootaxonomica Sinica，2007，32(1):153-159．［王劍峰，喬格俠．DNA條形編碼在蚜蟲(chóng)類(lèi)昆蟲(chóng)中的應(yīng)用［J］．動(dòng)物分類(lèi)學(xué)報(bào)，2007，32(1):153-159］

Wang JH，Zhang F，Li YX．Diversity of species and reproductive mode of Bemisia tabaci parasitoids［J］．Chinese Journal of Biological Control，2011，27(1):115-123．［王繼紅，張帆，李元喜．煙粉虱寄生蜂種類(lèi)及繁殖方式多樣性［J］．中國(guó)生物防治，2011，27(1):115-123］

Werren JH．Biology of Wolbachia［J］．Annual Review of Entomology，1997，42:587-609．

Xu HY， Yang NW， Wan FH． Competitive interactions between parasitoids provide new insight into host suppression［J］．PLoS ONE，2013，8(11):e82003．

Yang NW，Wan FH．Host suitability of different instars of Bemisia tabaci biotype B for the parasitoid Eretmocerus hayati［J］．Biological Control，2011，59(2):313-317．

Yang NW，Ji LL，L?vei GL，et al． Shifting preference between oviposition vs．host-feeding under changing host densities in two Aphelinid parasitoids［J］．PLoSONE，2012，7(7):e41189．

Yang NW，Zang LS，Wang S，et al．Biological pests management by predators and parasitoids in greenhouse vegetable in China［J］．Biological Control，2014，92-102．

Yang CH，Han HL，Chi MY，et al．Species identification of Noctuidae moths(Insecta:Lepidoptera)from Baihuashan，Beijing，China with DNA barcoding ［J］．Acta Entomologica Sinica，2012，55(9):1082-1092．［楊聰慧，韓輝林，等．DNA條形碼技術(shù)在北京百花山地區(qū)夜蛾科物種鑒定中的應(yīng)用［J］．昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)，2012，55(9):1082-1092］

Yeates DK，Seago A，Nelson L， et al． Integrative taxonomy，or iterative taxonomy［J］．Systematic Entomology，2011，36(2):209-217．

Zheng FS，Du YZ，Wang ZJ，et al．Molecular phylogeny of Galerucella spp．(Coleoptera:Chrysomelidae:Galerucinae)based on mitochondrial cytochrome oxidase I gene［J］．Acta Entomologica Sinica，2007，50(5):501-507．［鄭福山，杜予洲，王志杰，等．基于線粒體COⅠ基因序列的小螢葉甲屬部分種類(lèi)分子系統(tǒng)學(xué)研究 (鞘翅目:葉甲科:螢葉甲亞科)［J］．昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)，2007，50(5):501-507］

Zhang GF，Liu WX，Guo JY，et al．Species-specific COⅠ primers for rapid identification of Tuta absoluta(Meyrick)，a significant，potential alien species［J］．Journal of Biosafety，2013，22(2):80-85．［張桂芬，劉萬(wàn)學(xué)，郭建洋，等．重大潛在入侵害蟲(chóng)番茄潛葉蛾的SS-COⅠ快速檢測(cè)技術(shù)［J］．生物安全學(xué)報(bào)，2013，22(2):80-85］

Zhang GF，Meng XQ，Min L，et al．Rapid diagnosis of the invasive species，F(xiàn)rankliniella occidentalis(Pergande):a species-specific COⅠ marker［J］． Journal of Applied Entomology，2011，136(6):410-420．

Zchori-Fein E，Gottlieb Y，Kelley SE，et al．A newly discovered bacterium associated with parthenogenesis and a change in host selection behavior in parasitoid wasps［J］．Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2001，98:12555-12560．