霍　飛，鄭新寶，毋狀元，楠發(fā)鵬，董　紅，張國(guó)庭，羅永明，陳靜波

（1.新疆畜牧科學(xué)院畜牧科學(xué)研究所，烏魯木齊830000；2.山丹軍馬場(chǎng)；3.石河子農(nóng)業(yè)大學(xué)）

馬人工授精試驗(yàn)

霍飛1，鄭新寶1，毋狀元2，楠發(fā)鵬3，董紅1，張國(guó)庭1，羅永明1，陳靜波1

（1.新疆畜牧科學(xué)院畜牧科學(xué)研究所，烏魯木齊830000；2.山丹軍馬場(chǎng)；3.石河子農(nóng)業(yè)大學(xué)）

試驗(yàn)旨在研究馬人工授精中子宮角細(xì)管輸精效果和濃縮精液常溫保存及運(yùn)輸方式，驗(yàn)證了傳統(tǒng)膠管輸精單次追精的結(jié)果。結(jié)果表明：子宮角細(xì)管輸精所得受胎率81.08%，與膠管輸精所得情期受胎率差異顯著（0.01＜P＜0.05）；15 mL離心管常溫保存3 h獲得的情期受胎率較高（P＜0.01）；群牧馬單次追精情期受胎率53.62%，較多次輸精效果差（P＜0.01）。

馬；人工授精

近年來(lái)隨著馬產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展［1］，越來(lái)越多的人熱衷于采用國(guó)外引進(jìn)的優(yōu)良種公馬與本地母馬雜交改良地方品種。如何利用有限的種公馬資源開(kāi)展雜交改良，使其獲得更多的后代，成為馬繁殖比較熱門的研究領(lǐng)域。本試驗(yàn)在去年馬子宮角輸精取得成功的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步擴(kuò)大群體并對(duì)實(shí)施過(guò)程中細(xì)節(jié)進(jìn)行了比較試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果總結(jié)如下。

1　材料

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

4～20歲伊犁母馬，引進(jìn)英純血馬6匹，阿爾登馬2匹。

1.2儀器

離心機(jī)，水浴鍋。

1.3試劑及耗材

50 mL/15mL離心管，INRA96馬精液稀釋液，20 mL、10 mL、5 mL、2 mL注射器，馬專用輸精器，0.5 mL細(xì)管，30 mL玻璃注射器，輸精膠管。

2　方法

2.1卵泡發(fā)育監(jiān)測(cè)

對(duì)全群母馬進(jìn)行直腸檢查，依據(jù)卵巢上卵泡及黃體的大小建立卵泡發(fā)育檔案，每日早7：00、晚6：00兩次對(duì)卵泡發(fā)育至3期（?≥30 mm）［2］，或即將發(fā)育至3期的母馬進(jìn)行直腸檢查，監(jiān)測(cè)其卵泡發(fā)育情況。根據(jù)卵泡的體積、卵泡液充盈程度、卵泡壁薄厚程度及有無(wú)排卵判斷是否進(jìn)行人工授精。

2.2采精

安裝好假陰道，檢查密閉性，灌注適量溫水，使內(nèi)胎壁溫度保持在38℃，于內(nèi)胎均勻涂抹凡士林，并吹氣直至壓力合適擰緊閥門。待公馬陰莖勃起爬跨時(shí)，采精人員用手將陰莖導(dǎo)入假陰道采精。公馬射精后，迅速將假陰道拿至室內(nèi)，取下集精杯，用玻璃棒挑除副性腺，紗布過(guò)濾精液備用。

2.3精液質(zhì)量評(píng)價(jià)

精液采集完成后，取1滴，100倍下觀察精液運(yùn)動(dòng)情況，評(píng)價(jià)精液質(zhì)量?；盍Ω哂?.35，進(jìn)行后期處理和輸精。

2.4精液處理

2.4.1濃縮精液細(xì)管保存及運(yùn)輸 用INRA96稀釋液1:1稀釋原精。3 000 r/min（約818 g離心力）離心5 min。去上清，管底為濃縮精液。按1:2～1:4比例用INRA96稀釋液稀釋濃縮精液。搖勻后裝入0.5 mL細(xì)管中備用。

2.4.2常規(guī)膠皮管輸精精液準(zhǔn)備用煮沸法去除脂肪顆粒的馬奶作為精液稀釋液，于采精后用已處理預(yù)熱馬奶稀釋原精（根據(jù)活力、密度及所配母馬數(shù)量決定稀釋倍數(shù)），吸入注射器中備用。

2.5人工授精

2.5.1子宮角細(xì)管輸精保定好發(fā)情母馬，消毒陰唇外陰部，將已裝入細(xì)管精液的輸精器緩緩插入陰道內(nèi)。中指通過(guò)子宮頸口，另一只手握住輸精器向前推送，使輸精器槍頭在中指下進(jìn)入子宮內(nèi)，推不動(dòng)即停止推送并固定，將陰道內(nèi)的手臂取出五指并攏伸入直腸深處，此時(shí)手掌向下可以感覺(jué)到輸精器及馬子宮分叉處。另一只手將輸精器前端先斜向上，使輸精器進(jìn)入排卵側(cè)子宮體內(nèi)使其和輸精器成直線，然后將輸精器前端緩慢導(dǎo)入此側(cè)子宮角內(nèi)輸精。

2.5.2子宮體輸精保定好發(fā)情母馬，消毒陰唇外陰部，將連接有精液玻璃注射器的輸精膠管插入陰道內(nèi)。四指握住輸精膠管將輸精膠管推送到馬子宮頸口至子宮體分叉處，另一只手握住玻璃注射器，利用下巴或前胸向前推送，將精液推送至子宮內(nèi)。

2.6孕檢

配種后13 d直腸檢查，檢查卵巢上卵泡發(fā)育情況，并于17 d進(jìn)行B超診斷，判斷受胎情況。

3　結(jié)果與分析

3.1輸精方法對(duì)受胎率的影響

本試驗(yàn)在同一配種馬群中，由同一名技術(shù)員進(jìn)行直腸把握檢測(cè)卵泡發(fā)育并配種，采取隨機(jī)選擇，對(duì)比3種輸精方法的妊娠情況。結(jié)果顯示，以子宮角細(xì)管輸精所得受胎率最高，與膠管輸精所得情期受胎率差異顯著（P＜0.05）。詳見(jiàn)表1。

表1　不同輸精方法對(duì)受胎率的影響

3.2濃縮精液不同保存方式對(duì)受胎率的影響

濃縮精液在15 mL離心管、0.5 mL細(xì)管中保存約3 h（其中半小時(shí)為運(yùn)輸時(shí)間），然后根據(jù)馬卵泡發(fā)育情況配種。結(jié)果顯示，15 mL離心管保存獲得的情期受胎率較高（P＜0.01）。見(jiàn)表2。

表2　濃縮精液不同保存方式對(duì)受胎率的影響

3.3單次追精與多次輸精對(duì)受胎率的影響

同一配種馬群中，由同一名技術(shù)員進(jìn)行直腸把握檢測(cè)卵泡發(fā)育并配種，采取隨機(jī)選擇，驗(yàn)證在一天2次檢馬情況下排卵馬單次追精的妊娠情況，結(jié)果顯示，多次輸精受胎率顯著高于單次追精。見(jiàn)表3。

表3　不同輸精次數(shù)對(duì)受胎率的影響

4　討論

1）國(guó)外馬業(yè)發(fā)達(dá)國(guó)家目前主要采用直腸把握子宮角頂端和腹腔鏡宮管結(jié)合處輸精，其最低有效輸精量分別為5×106個(gè)和1×106個(gè)直線前進(jìn)精子［2］。子宮角細(xì)管輸精較傳統(tǒng)膠管輸精有兩大優(yōu)勢(shì)：其一，精液用量少，輸精效率高。子宮角細(xì)管輸精每次輸細(xì)管精液1～2支。精液在濃縮時(shí)依據(jù)馬不同精子密度，大概2～4 mL原精可濃縮成1支細(xì)管精液，其有效精子數(shù)在1億以上。傳統(tǒng)膠管輸精所用原精量5～20 mL，是細(xì)管精液的2～5倍。其次，降低人工授精對(duì)馬子宮的影響，子宮角細(xì)管授精每次輸入精液量0.5～1.0 mL（2/3左右為稀釋液），而膠管輸精每次輸入子宮體的精液量20～30 mL（2/3左右為馬奶），子宮對(duì)馬奶的脂肪顆粒及蛋白吸收能力有限。這點(diǎn)也很好地說(shuō)明了膠管輸精+子宮角細(xì)管輸精的結(jié)果好于膠管輸精。但子宮角細(xì)管輸精較膠管輸精時(shí)間長(zhǎng)，通常為膠管輸精所用時(shí)間的2～3倍，并且使用直檢手套多，這是因?yàn)樽訉m角輸精為了保證細(xì)管精液能夠輸送至排卵側(cè)子宮角而需要進(jìn)行的直腸把握。

2）濃縮精液由于精子密度大，在狹小空間的存活時(shí)間受到影響，可能是由于大量精子運(yùn)動(dòng)耗能、所產(chǎn)生的廢棄物對(duì)小環(huán)境內(nèi)的pH值等理化指標(biāo)影響較大。濃縮精液在0.5 mL細(xì)管常溫保存2 h后活力明顯下降，而在15 mL離心管中常溫條件下能夠保存12 h，這也直接說(shuō)明濃縮精液只能在0.5 mL細(xì)管當(dāng)中進(jìn)行短時(shí)間保存，最好做到精液裝管后就立即使用，若要進(jìn)行長(zhǎng)距離運(yùn)輸，則需要使用較大的容器。

3）馬卵巢卵泡發(fā)育及排卵是個(gè)漫長(zhǎng)的過(guò)程，由于受營(yíng)養(yǎng)、天氣、草場(chǎng)等因素的影響，部分馬匹排卵時(shí)間可持續(xù)1周［3-4］。這對(duì)直檢時(shí)卵泡發(fā)育判斷及配種次數(shù)都帶來(lái)很大的影響。單次追精情期受胎率沒(méi)有多次輸精高，但53.62%的結(jié)果尚可接受。按此結(jié)果推算，3個(gè)情期，配種群的總情期受胎率至少在80%以上，這對(duì)于由于條件受限不能開(kāi)展子宮角細(xì)管輸精，且優(yōu)秀種公馬數(shù)量有限的配種地區(qū)具有實(shí)踐意義。配種開(kāi)始時(shí)，一部分排卵延遲馬采用單次追精，可有效地減少種公馬精液的使用量，而且不影響群體受胎率。

［1］ 姚新奎，歐陽(yáng)文，譚曉海，等.新疆特色馬產(chǎn)業(yè)探析［J］.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，44（2）：199-205.

［2］ Samper J C，Gomez I，Sanchez R.Rectally guided or hysteroscopic insemination：is there a difference［J］.Equine Vet Sci，2008：28，640-644.

［3］ Samper J C，Plough T.Techniques for the insemination of lowdoses of stallion sperm［J］.Reproduction in Domestic Animals，2010，45（2）：35-39.

［4］ Davies Morel MCG.Equine artificial insemination［M］.UK：CPI Antony Rowe，Eastbourne，2006.

營(yíng)養(yǎng)與飼料

S821.3

A

2095-3887（2015）03-0022-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2015.03.007

2015-04-01

新疆維吾爾自治區(qū)馬產(chǎn)業(yè)重大專項(xiàng)（201130101-2）

霍飛（1980-），男，助理研究員，碩士。

陳靜波，研究員，博導(dǎo)，主要從事動(dòng)物胚胎工程及動(dòng)物繁殖技術(shù)的研究與推廣工作。