張 聰 尤奮強

（南京中醫(yī)藥大學·210000）

慢性低灌注是指各種原因引發(fā)的長期腦血流灌注不足，在血管性癡呆（VD）、Bins wanger病、Alzheimer's disease（AD）等多種神經系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展過程起著重要的作用，慢性低灌注引發(fā)的各種腦損傷近年來發(fā)病率呈上升趨勢。探索一種既可以最大限度地減少醫(yī)源性風險又能有效地保護大腦的藥物是當今醫(yī)療界所面臨的重要課題。中成藥通塞脈片具有活血祛瘀通絡、益氣養(yǎng)陽的功效，由金銀花、黃芪、當歸、玄參、和石斛六味藥組成，是臨床治療缺血性腦中風的特效藥，并且對閉塞性動脈硬化癥，靜脈血栓形成都有滿意的療效。研究發(fā)現，通塞脈片對大腦中動脈栓塞模型有保護作用，能促進血流恢復，增加缺血區(qū)的血流灌注量，改善腦組織缺血缺氧狀態(tài)。因此，我們推測，通塞脈片很可能參與血管性癡呆的保護作用，這有待于進一步的研究，這些問題的解決，將為臨床治療血管性癡呆提供新的策略。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級wistar大鼠,60只,雄性,體重200～240g,由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供。

1.2 大鼠慢性低灌注模型制備

慢性低灌注模型采用大鼠雙側頸總動脈結扎（2VO）。按實驗設計隨機分組，手術前先將實驗大鼠斷食12小時，斷水6小時。稱量體重，用10%水合氯醛腹腔注射（0.3ml/100g）進行麻醉。手術臺為恒溫操作臺，仰臥位固定，頸正中線切口，沿胸鎖乳突肌內緣分離肌肉和筋膜，分離出左右頸總動脈進行永久性結扎。實驗結束后，大鼠常溫分籠飼養(yǎng)。

1.3 藥物來源及給藥方案

通塞脈片由江蘇南星藥業(yè)有限責任公司提供。本方案大鼠共分為3組，分別為假手術組、模型組和治療組。模型組與治療組構建大鼠慢性低灌注2VO 模型，治療組給予通塞脈灌胃治療(12.44g/kg.d)。

1.4 Morris水迷宮的原理

Morris水迷宮是英國心理學家Morris設計并應用于腦學習記憶機制研究的一種實驗手段。測試程序主要包括定位航行試驗和空間探索試驗兩個部分。其中定位航行試驗(place navigation)將大鼠面向池壁分別從4個入水點放入水中若干次,記錄其尋找到隱藏在水面下平臺的時間(逃避潛伏時間,escape latency)?？臻g探索試驗(spatial probe)是在定位航行試驗后去除平臺,然后任選一個入水點將大鼠放入水池中,記錄其在一定時間內的游泳軌跡,考察大鼠對原平臺的記憶。

1.5 Morris水迷宮的試驗方法

將實驗大鼠頭朝池壁放入水中，放入位置隨機取東、西、南、北四個起始位置之一。記錄動物找到水下平臺的時間（s）。在前幾次訓練中，如果這個時間超過60s，則引導動物到平臺。讓動物在平臺上停留10s.將大鼠移開、擦干。每只大鼠每天訓練4次，兩次訓練之間間隔15~20min,連續(xù)訓練5d。最后一次獲得性訓練結束后的第二天，將平臺撤除，開始60s的探查訓練。將動物由原先平臺象限的對側放入水中。記錄動物在目標象限（原先放置平臺的象限）所花的時間和進入該象限的次數，以此作為空間記憶的檢測指標.測定動物的工作記憶（working memory）。探查訓練結束后的第二天，開始維持4天的對位訓練。將平臺放在原先平臺所在象限的對側象限，方法與獲得性訓練相同。每天訓練4次。每次記錄找到平臺的時間和游泳距離以及游泳速度。

2 結果

2.1 治療兩周組Morris水迷宮結果對比

分別對兩個對照組別的三個小組假手術組，模型組以及治療兩周組的實驗對象進行Morris水迷宮測試，對實驗對象的空間認知能力和記憶力做出判斷，測定結果參見圖2.1,、圖2.2和圖2.3。

圖2.1 2周組大鼠學習Morris水迷宮潛伏時間成績

圖2.2 2周組大鼠學習Morris水迷宮游泳里程成績

圖2.3 2周組大鼠學習Morris水迷宮平臺象限時間成績

2.2 治療四周組Morris水迷宮結果對比

分別對兩個對照組別的三個小組假手術組，模型組以及治療四周組的實驗對象進行Morris水迷宮測試，對實驗對象的空間認知能力和記憶力做出判斷，測定結果參見圖2.4,、圖2.5和圖2.6。

圖2.4 4周組大鼠學習Morris水迷宮潛伏時間成績

圖2.5 4周組大鼠學習Morris水迷宮游泳里程成績

圖2.6 4周組大鼠學習Morris水迷宮平臺象限時間成績

3 結論與討論

本研究考察了不同治療時間的通塞脈對大鼠慢性低灌注腦損傷的保護作用兩個對照組別的實驗對象分別進行Morris水迷宮實驗，發(fā)現慢性低灌注大鼠模型潛伏時間較長，游泳路程較長，平臺象限時間較短，通過通塞脈片治療的實驗組隨著治療時間的延長，水迷宮實驗結果有所改善，說明通塞脈片在對大鼠腦損傷治療起到了一定作用。有研究發(fā)現，當歸作為通塞脈片中的君藥，其有效成分當歸內酯能減少局灶性的腦缺血損傷。有效成分藁本內酯具有良好的改善微循環(huán)作用,可用于防治與微循環(huán)障礙有關的疾病。以上機制只是結合已有研究所做猜測，其確切的保護作用機制有待進一步研究。

[1] 胡晨.通塞脈片對大鼠缺血后肢側支循環(huán)建立的影響[J].南京中醫(yī)藥大學學報,2009, 25(6)：33-35

[2] 殷書梅,王麗英,牛金茹等. 通塞脈片治療缺血性中風的藥效學研究[J]. 新中醫(yī).2007 ,2：68-69.

[3] 陳偉明,王振書,劉國棟. 低灌注缺血性腦血管病因、發(fā)病機制及治療.[N] .第二軍醫(yī)大學學報,2012 ,11(13-14).

[4] 羅永華,王愛軍.大鼠腦慢性低灌注模型的研究進展.[N].第四軍醫(yī)大學學報,2013,9(35-36).

[5] 李偉明. 腦動靜脈周圍組織慢性低灌注損傷及出血風險研究.[J] .山西醫(yī)藥雜志,2011,3(31-32)

[6] Tsenkina Y , Ruzov A. White matter tract and glialassociated changes in 5-hydroxymethylcytosine following chronic cerebral hypoperfusion.[J]. Brain Res,2014.29(3)：27- 29.

[7] Smith JP , Sammons DL. Enhanced performance of methamphetamine lateral flow cassettes using an electronic lateral flow reader[J].Occup Environ Hyg,2012, 4(1)：34-35.