耿燕娜張文鑫王建新

（1河南大學(xué)淮河醫(yī)院藥學(xué)部，開封475000；2河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，鄭州450000；3復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院，上海200032）

紫金龍的薄層色譜鑒別方法研究※

耿燕娜1張文鑫2王建新3*

（1河南大學(xué)淮河醫(yī)院藥學(xué)部，開封475000；2河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，鄭州450000；3復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院，上海200032）

目的建立紫金龍藥材的薄層色譜鑒別方法。方法以異紫堇定、紫堇定為對照品，用三氯甲烷-甲醇-氨水（50:1:0.5）進(jìn)行薄層展開。結(jié)果建立的紫金龍藥材的薄層色譜放鑒別方法，層析圖顯示分離效果佳，斑點(diǎn)清晰。結(jié)論本法準(zhǔn)確、簡便、重現(xiàn)性好，可用于紫金龍藥材及其制劑的質(zhì)量控制。

紫金龍；薄層色譜法；異紫堇定；紫堇定

罌粟科紫金龍屬植物為一年生或多年生草質(zhì)藤本。該屬共有7種植物，分布于喜馬拉雅地區(qū)至我國西部。我國產(chǎn)4種，產(chǎn)于西南部。紫金龍Dactylicapnos scandens（D.Don）Hutch.為其中一種，生長于海拔1100～3000 m的林下、山坡、石縫或水溝邊、低凹草地、溝谷，產(chǎn)于我國四川西南部（冕寧），云南西北部（德欽）、西部、中部至東南部，廣西西部和西藏東南部等地［1］。其商品藥材紫金龍為紫金龍植物Dactylicapnos scandens（D.Don）Hutch.的干燥根，又名串枝蓮、碗豆七、川山七、茲堅(jiān)輪（白族語）等，是我國云南省白族傳統(tǒng)習(xí)用中草藥，秋末采挖，除去泥土、雜質(zhì)，曬干即得［2］。紫金龍藥材味苦、辛，性涼；有鎮(zhèn)痛止血、降血壓等功效，用于治療胃痛，神經(jīng)性頭痛，牙痛，高血壓，血崩，內(nèi)出血，跌打損傷等疾患［2-4］；在《云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)》［2］和《云南中藥資源名錄》［3］中都有記載，曾被《中國藥典》1977年版收載［4］。但原藥材標(biāo)準(zhǔn)只記載有性狀、理化鑒別等項(xiàng)，不能很好的控制藥材質(zhì)量。

除了具有顯著鎮(zhèn)痛作用外，紫金龍還具有多方面的藥理作用，云南白藥公司以紫金龍為主藥，研制出用于治療胃及十二指腸潰瘍、慢性胃炎的胃得康膠囊［5］。金業(yè)全［6］等研制了紫金龍藥酒，用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療，臨床觀察療效顯著。三九集團(tuán)以紫金龍?zhí)崛∥餅橹饕煞?，開發(fā)了治療近視的準(zhǔn)字號藥品999近視樂眼藥水。因此，有必要對紫金龍藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究提高，以擴(kuò)大其應(yīng)用范圍，造福人類。

目前控制藥材質(zhì)量的方法大多是采用控制藥材中某個或某類成分；而紫金龍化學(xué)成分的研究報(bào)道較少：吳大剛［7-10］等國內(nèi)學(xué)者對紫金龍化學(xué)成分進(jìn)行研究，分離鑒定了異紫堇定、紫堇定等生物堿類成分，同時(shí)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)生物堿是其具有鎮(zhèn)痛等藥理作用的主要活性成分［11］，說明生物堿可能為紫金龍的主要有效成分。故本文針對紫金龍的生物堿成分，以異紫堇定和紫堇定為對照品，建立紫金龍藥材的薄層色譜鑒定方法，為藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究和制定提供依據(jù)。

1 材料與儀器

紫金龍（購于上海市藥材公司）、異紫堇定（購于Sigma公司，批號：545368）、三氯甲烷、甲醇、碘化鉀、次硝酸鉍等為分析純（購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、BP211D型電子天平（德國Sartorius公司）、DRT-TW型調(diào)溫電熱套（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 紫堇定對照品的制備

2.1.1 紫堇定對照品的分離純化取紫金龍藥材9.2 kg，乙醇滲漉提取，得粗提物2.1 kg，粗提物加入1%鹽酸溶液使溶解，過濾，濾液用25%氨水調(diào)節(jié)pH至10，用氯仿提取三次，提取液回收蒸干得570 g提取物10，取其中的200 g，采用硅膠柱層析分離，三氯甲烷-甲醇梯度洗脫（100∶1→10：1），共得到1→8個組分，取組分6，進(jìn)行硅膠薄層分離，石油醚-丙酮（1∶1）洗脫分離，得到單體生物堿DS-2。以TMS為內(nèi)標(biāo)或以各種氘代溶劑峰化學(xué)位移為準(zhǔn)（CDCl3：δH7.26，δC77.0），采用核磁共振儀和質(zhì)譜儀分別1H-NMR、13C-NMR和EI-MS等圖譜，與文獻(xiàn)對照可知，具體鑒定結(jié)果見下。

圖1 d-corydine（DS-2）

d-紫堇定（d-Corydine＜DS-2＞）無色針狀結(jié)晶；mp149℃.1H-NMR（CDCl3，400 MHz），δ：8.70（1H，s，OH），7.08（1H，d，J=8.2Hz，H-8），6.87（1H，d，J=8.2Hz，H-9），6.69（1H，s，H-3），3.91（3H，s，OCH3），3.90（3H，s，OCH3），3.73（3H，s，OCH3），2.53（3H，s，NCH3）；13C-NMR，δ：151.8（C-10），149.2（C-2），143.8（C-1），142.3（C-11），130.7（C-7a），128.0（C-11a），126.4（C-3a），124.3（C-8），123.8（C-1b），119.2（C-1a），111.3（C-9），110.9（C-3），62.7（C-6a），62.0（C11-OCH3），56.0（C10-OCH3），56.0（C2-OCH3），52.7（C-5），43.8（N-CH3），35.4（C-7），28.9（C-4）；EI-MS，m/z：341［M］+，326，310.以上波譜數(shù)據(jù)基本與文獻(xiàn)［12-14］一致，故推斷DS-2為d-紫堇定。

2.1.2 紫堇定對照品的純度測定

2.1.2.1 檢測波長的選擇HPLC法對紫堇定對照品進(jìn)行分析，采用二極管陣列檢測器（DAD）進(jìn)行全波長掃描，可知在265nm和300～310nm波長下均有較大吸收。故選擇在265nm、310nm處測得紫堇定的峰面積，以面積歸一化法計(jì)算紫堇定的純度。

2.1.2.2 色譜條件色譜柱：Hypersil BDS C18（4.6mm× 250mm，5μm）柱；流動相：A相為0.2%磷酸水溶液（三乙胺調(diào)pH為7.0）-B相為甲醇＝52：48；柱溫：30℃，波長：265nm，300nm。結(jié)果見圖2，結(jié)果顯示制得的紫堇定對照品純度大于98%，可用于薄層色譜研究。

圖2 紫堇定對照品的HPLC圖譜

2.2 對照品溶液制備分別稱取異紫堇定和紫堇定對照品，配制成濃度分別為0.4 mg·ml-1和0.1 mg·ml-1的對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備取紫金龍藥材，粉碎，取過四號篩下藥粉0.3 g，置濾紙筒內(nèi)，氨水潤濕，加入20 ml三氯甲烷索氏回流提取2 h，提取液蒸干，殘?jiān)尤爰状?0 ml溶解，即得。

2.4 薄層色譜鑒別

2.4.1 色譜條件薄層板：硅膠GF254板展開劑：三氯甲烷-甲醇-氨水（50∶1∶0.5）。檢識方法：紫外光254 nm檢識；碘化鉍鉀顯色檢識。

2.4.2 薄層展開實(shí)驗(yàn)按照薄層色譜法（《中國藥典》2005版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)［15］，吸取上述三種溶液各1～2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254板上，展開，展距8 cm，晾干，于254 nm紫外光下檢識，并用碘化鉍鉀顯色檢識。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

薄層色譜鑒別結(jié)果見圖3。

圖3 紫金龍藥材薄層色譜圖

5 紫堇定對照品

在254 nm波長紫外光下檢識，可以看到供試品色譜中，在與對照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。采用碘化鉍鉀試液顯色后，可以看到供試品色譜中，在與對照品相應(yīng)的位置上，顯相同的桔紅色斑點(diǎn)。

3 結(jié)論與討論

本文首次建立了薄層色譜法鑒別紫金龍藥材，方法準(zhǔn)確、簡便、重現(xiàn)性好。異紫堇定、紫堇定作為紫金龍藥材中的主要生物堿，同時(shí)也是同分異構(gòu)體，建立同分異構(gòu)體的薄層色譜分析方法存在較大的難度。我們對常用的生物堿展開系統(tǒng)：1）三氯甲烷-甲醇-氨水；2）三氯甲烷-甲醇；3）石油醚-丙酮；4）三氯甲烷-丙酮進(jìn)行了比較研究，其中以展開劑三氯甲烷-甲醇-氨水（50∶1∶0.5）進(jìn)行展開，斑點(diǎn)Rf值適中，且異紫堇定斑點(diǎn)和紫堇定斑點(diǎn)分離情況較好，斑點(diǎn)較圓整，可作為紫金龍藥材的薄層色譜鑒別方法，異紫堇定和紫堇定為生物堿成分，在進(jìn)行薄層色譜展開時(shí)，容易出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，加入氨水后，斑點(diǎn)拖尾得到大大改善。

［1］中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志［M］.32卷.北京：科學(xué)出版社，1999:89-91.

［2］云南省衛(wèi)生局.云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)［S］，1974:323-324.

［3］云南省藥材公司.云南中藥資源名錄［M］.北京：科學(xué)出版社，1993:168.

［4］中華人民共和國藥典·一部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1977:586.

［5］陳慶黨，劉漢源.正交試驗(yàn)法優(yōu)選紫金龍?zhí)崛〉淖罴压に嚄l件［J］.中草藥，1996，27（增刊）:102-103.

［6］金業(yè)全，魏桂湘.紫金龍藥酒的研制及臨床應(yīng)用［J］.蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1996，21（1）:49.

［7］吳大剛.紫金龍的生物堿成分［J］.中草藥通訊，1977，4:153-155.

［8］錢金栿，周粵.白族草藥紫金龍成分的研究［J］.西北藥學(xué)雜志，2000，l5（2）:57-58.

［9］嚴(yán)田青，艾鐵民.紫金龍化學(xué)成分的研究［J］.中草藥，2004，35（8）:861-862.

［10］王富華，胡曉，王建新，等.紫金龍的生物堿類成分［J］.中國中藥雜志，2009，34（16）:2057-2059.

［11］吳勐，王銀葉，艾鐵民.紫金龍總生物堿的鎮(zhèn)痛作用及其機(jī)制初探［J］.中草藥，2003，34（11）:1022-1025.

［12］Shamma M，et al.Phytochemistry，1973，12:1505.

［13］Desai HK，et al.Heterocycles，1993，36（5）:1081.

［14］Galinis DL，et al.Tetrahedron，1993，49（7）:1337.

［15］中華人民共和國藥典·一部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005:附錄31-32.

Study on the TLC of the root of Dactylicapnos scandens

GENGYanna1，ZHANGWenxin2，WANGJianxin3*
（1Department of Pharmacy，Huaihe Hospital of Henan University，Henan Province，Kaifeng475000，China；2Department of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Henan University of TCM，Zhengzhou450000，China；3School of Pharmacy，F(xiàn)udan University，Shanghai200032，China）

Objective To establish the TLC of the root of Dactylicapnos scandens.Methods Thin layer expand by CHCl3-CH3OH-NH3· H2O（50:1:0.5）and compare to isocorydine and corydine.Results The TLC of the root of Dactylicapnos scandens showed clear spots and complete separation.Conclusion The method is accurate，reliable and convenient.It can be used to control the quality of Dactylicapnos scandens and its products.

Dactylicapnos scandens；TLC；isocorydine；corydine

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.10.071

1672-2779（2015）-10-0138-03

：張文娟本文校對：張瑜

2015-02-27）

上海市中西部科技合作基金（No：64358028）

*通訊作者：jxwang@shmu.edu.cn