陳升平（四川省自貢市大安區(qū)三多寨鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站 643000）

兔大腸桿菌耐藥性觀察

陳升平（四川省自貢市大安區(qū)三多寨鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站 643000）

兔大腸桿菌病又叫黏液性腸炎，是由致病性埃希氏大腸桿菌及其毒素引起的一種暴發(fā)性、死亡率很高的仔幼兔腸道傳染病。大腸桿菌是引起斷奶前后家兔腹瀉的主要病原之一，主要侵害20～70日齡的仔兔和幼兔，成年兔很少發(fā)病。其致病機(jī)理是大腸桿菌在腸道內(nèi)容物中大量增殖，并附著在腸黏膜上，導(dǎo)致腸壁滲透性增強(qiáng)，患兔腹瀉脫水。當(dāng)大腸桿菌侵入血液時(shí)，即可分布于全身各個(gè)器官，出現(xiàn)敗血癥。近年來(lái)，隨著抗菌素的廣泛應(yīng)用，耐藥性大腸桿菌菌株日益增多，給預(yù)防和治療大腸桿菌病帶來(lái)了諸多困難。目前，在防治大腸桿菌病上主要采取的措施是應(yīng)用大腸桿菌滅活菌苗免疫，通過藥敏試驗(yàn)篩選大腸桿菌敏感的抗菌素進(jìn)行治療。因各個(gè)兔場(chǎng)大腸桿菌的血清型都不一致，用藥情況也千差萬(wàn)別，筆者僅大安區(qū)的6個(gè)兔場(chǎng)（養(yǎng)殖戶）進(jìn)行了大腸桿菌的耐藥性調(diào)查，以期對(duì)這些兔場(chǎng)更好地控制大腸桿菌病起到一定的指導(dǎo)作用。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 病料來(lái)源

病料采大安區(qū)的6個(gè)兔（養(yǎng)殖戶）場(chǎng)疑似大腸桿菌病的病死兔，無(wú)菌采集腸道膠凍樣糞便。

1.1.2 培養(yǎng)基

營(yíng)養(yǎng)瓊脂；麥康凱；普通肉湯。

1.1.3 微量生化發(fā)酵管

硫化氫、苯丙氨酸、尿素、側(cè)金盞花醇、山梨醇、丙二酸鹽、賴氨酸、鳥氨酸、靛基質(zhì)（蛋白胨水）、V-P、枸櫞酸鹽、葡萄糖（產(chǎn)氣）、蔗糖、乳糖、甘露醇。

1.1.4 藥敏紙片

丁胺卡那霉素、先鋒Ⅴ、先鋒Ⅵ、氟苯尼考、四環(huán)素、卡那霉素均為30ug/片，氨芐青霉素、慶大霉素均為10ug/片，復(fù)方磺胺為300ug/片，阿奇霉素為15ug/片。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)

無(wú)菌采集死亡兔腸道膠凍樣糞便，接種營(yíng)養(yǎng)肉湯，37℃培養(yǎng)24h；將培養(yǎng)物接種麥康凱培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h；選擇表面光滑、中等大小的單個(gè)紅色菌落，接種營(yíng)養(yǎng)肉湯，37℃培養(yǎng)24h，備用。

1.2.2 染色鏡檢

將純化的肉湯培養(yǎng)物涂片，革蘭氏染色，鏡檢。

1.2.3 生化試驗(yàn)

按文獻(xiàn)的方法進(jìn)行，將對(duì)小白鼠有致病性的菌株肉湯純培養(yǎng)物分別接種于微量生化管，37℃培養(yǎng)24h，觀察記錄結(jié)果。

1.2.4 藥敏試驗(yàn)

將分離到的致病菌株肉湯純培養(yǎng)物分別接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，貼上所選擇的藥敏紙片，37℃培養(yǎng)24h，測(cè)量抑菌圈直徑。

2 結(jié)果

2.1 分離培養(yǎng)

病料編號(hào)為：DC1、 DC2、 DC3、 DC4、 DC5、 DC6。在肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h后，肉湯呈均勻渾濁；在麥康凱瓊脂平板上形成紅色、中等大小、表面光滑、濕潤(rùn)的單個(gè)菌落。

2.2 染色鏡檢

分離菌均為革蘭氏陰性、兩端鈍圓的短小桿菌，呈單個(gè)或多個(gè)、散在排列。

2.3 生化試驗(yàn)

結(jié)果見表1。從表1可以看出，6株菌均能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、甘露醇并產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不能產(chǎn)生硫化氫，不分解尿素和苯丙氨酸，能利用賴氨酸；VP和枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)均為陰性。DC5菌株能利用側(cè)金盞花醇，其它菌株不能；DC2和DC5菌株不能利用山梨醇，其它菌株都能；DC1菌株丙二酸鹽試驗(yàn)為陽(yáng)性，其它菌株試驗(yàn)為陰性；DC4和DC5菌株均能利用鳥氨酸，靛基質(zhì)試驗(yàn)為陰性，其它菌株不能利用鳥氨酸，靛基質(zhì)試驗(yàn)為陽(yáng)性；DC1和DC6菌株能分解蔗糖，其它菌株不能。

表1 生化試驗(yàn)結(jié)果

2.4 藥敏試驗(yàn)

由表2可見，多數(shù)菌株對(duì)丁胺卡那霉素、阿奇霉素敏感，對(duì)先鋒Ⅳ、先鋒Ⅴ、慶大霉素、氟苯尼考部分敏感，對(duì)氨芐青霉素、四環(huán)素、復(fù)方磺胺、卡那霉素低敏或不敏感。

表2 分離菌株藥敏試驗(yàn)結(jié)果（抑菌圈直徑mm）

3 討論與分析

（1）本試驗(yàn)確診6個(gè)兔場(chǎng)的發(fā)病兔均為致病性大腸桿菌引起。分離的6株菌均能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、甘露醇并產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不能產(chǎn)生硫化氫，不分解尿素和苯丙氨酸，能利用賴氨酸，VP和枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)均為陰性，符合大腸桿菌的特征。但這些菌株對(duì)蔗糖、側(cè)金盞花醇、山梨醇、丙二酸鹽、鳥氨酸和靛基質(zhì)試驗(yàn)結(jié)果不完全一致，這可能是不同血清型菌株的生化特性不完全相同。由于我們沒有預(yù)購(gòu)大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)血清，因此本試驗(yàn)尚未對(duì)分離的6株大腸桿菌進(jìn)行血清型鑒定，將在后續(xù)試驗(yàn)中進(jìn)行。

（2）從藥敏試驗(yàn)結(jié)果可以看出，分離菌株均對(duì)丁胺卡那霉素、阿奇霉素高度敏感，對(duì)氨芐青霉素、先鋒Ⅳ、先鋒Ⅴ、氟苯尼考、慶大霉素、復(fù)方磺胺、四環(huán)素、卡那霉素都有不同程度的耐藥性?？梢?，不同兔場(chǎng)的分離菌株對(duì)各種藥物的敏感性不同，耐藥性極強(qiáng)，極難治療。我們建議對(duì)兔大腸桿菌病選用藥物治療時(shí)，最好先進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，選取敏感的藥物及時(shí)治療，快速控制病情，減少損失。