李玉杰 孔祥華 張 月 孫圣福 王士榮 劉麗萍 陳 靜（山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 山東 濟(jì)南 250022）

2014年下半年山東省部分規(guī)模豬場(chǎng)疫病監(jiān)測(cè)與剖析

李玉杰 孔祥華 張 月 孫圣福 王士榮 劉麗萍 陳 靜*（山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 山東 濟(jì)南 250022）

為了查清山東省下半年幾種豬病的流行情況，山東省動(dòng)物疫控中心采用RT-PCR和PCR的方法對(duì)2014年7～12月期間部分豬場(chǎng)送檢的100份病料進(jìn)行豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV）、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)、豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬偽狂犬病毒(PRV)病原檢測(cè)和分析。結(jié)果表明，病原多重感染的危害越來(lái)越突出，以PRRSV+PCV2(48%)的組合最為常見。從豬腹瀉的病例中檢出PCV-2和PRRSV感染是主要原因，再次證明PRRSV和PCV-2是危害我省養(yǎng)豬業(yè)的頭號(hào)疫病病原。實(shí)驗(yàn)還顯示不同規(guī)模豬場(chǎng)存在的主要病原沒有很大差別。

近幾年來(lái)，本省養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展較為平穩(wěn)，但仍然會(huì)受到疫病的困擾，使得豬群的發(fā)病率和死亡率居高，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。豬病毒性疾病危害尤為嚴(yán)重，臨床表現(xiàn)越來(lái)越復(fù)雜，典型病例明顯減少，而且混合感染和繼發(fā)感染增多，必須依靠實(shí)驗(yàn)室診斷才能確診(楊漢春，2011；呂超超，2011等；孫志華，2012；張志，2012)。據(jù)報(bào)道，豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)和豬偽狂犬病毒(PRV)病是當(dāng)前危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的4種重要疫病(楊漢春，2014)。為了查清此4種疫病在下半年本省豬場(chǎng)的流行情況，本中心采用RT-PCR和PCR的方法對(duì)部分豬場(chǎng)送檢的病料進(jìn)行病原檢測(cè)和分析，了解感染情況和流行現(xiàn)狀，從而為防控該病提供可靠依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 于2014年7～12月期間，采自山東省濟(jì)南、德州、煙臺(tái)、臨沂、濱州、淄博和濟(jì)寧7個(gè)地市的10個(gè)發(fā)病豬場(chǎng)豬的肺臟、脾臟、腎臟、淋巴結(jié)和扁桃體等100份組織樣品。

1.2 主要試劑 Prime Script One Step RT-PCR kit Ver. 2、RNA抽提試劑TRIzol、Gel Extraction Mini Kit、DL2000 DNA Maker 均購(gòu)自TaKaRa公司。

1.3 樣品處理 取凍存(短期-20℃、長(zhǎng)期-70℃)的疑似發(fā)病豬病變實(shí)質(zhì)臟器(肺臟、脾臟、腎臟、淋巴結(jié)和扁桃體等)解凍至軟凍狀態(tài)，取5～10g置于研缽中充分研磨，加入pH7.2的PBS制成組織勻漿，8000r/min離心5min，取上清置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 檢測(cè)方法 PRRSV、PEDV、PCV2和PRV的檢測(cè)分別按照實(shí)驗(yàn)室建立的RT-PCR和PCR方法進(jìn)行，4種病毒的引物分別來(lái)自O(shè)RF7編碼區(qū)、M蛋白編碼區(qū)、ORF2編碼區(qū)和gD蛋白編碼區(qū)。

2 結(jié)果

2.1 4種病毒的陽(yáng)性率 100份病料中PRRSV、PEDV、PCV2和PRV的陽(yáng)性率分別為72%、4%、80%和8%，全部樣品被檢出至少攜帶一種病毒。同時(shí)檢出2種及2種以上病毒樣品有56份，占檢測(cè)樣品總數(shù)的56%。以PRRSV和PCV2共存的現(xiàn)象最多，占被檢樣品總數(shù)的48%，也有個(gè)別樣品被檢出PRRSV和PEDV共存，PRRSV、PRV和PCV2共存(表1)。

表1 同時(shí)檢出2種及以上病毒的組合形式及比率 (%)

2.2 無(wú)腹瀉癥狀豬的病原檢測(cè)分析 100頭疑似病豬中不存在腹瀉癥狀，但伴有喘、呼吸困難、體溫升高等有36頭，PRRSV的檢測(cè)為全陽(yáng)性，36頭病豬均攜帶藍(lán)耳病毒，其次是PCV-2，占89%，PEDV與PRV檢測(cè)為全陰性(表2)。

表2 不同臨床癥狀豬的各種病毒陽(yáng)性率 (%)

2.3 有腹瀉癥狀豬的病原檢測(cè)分析 100頭疑似病豬中存在腹瀉癥狀有64頭，PCV2的陽(yáng)性率最高，占75%，其次是PRRSV，占56%，PEDV與PRV檢出率較低，分別是6%和12%(表2)。

2.4 不同規(guī)模豬場(chǎng)病原檢測(cè)分析 10個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)母豬現(xiàn)存欄量100以內(nèi)有2個(gè)，PRRSV的陽(yáng)性率為100%，PCV2的陽(yáng)性檢出率為40%，PRV的陽(yáng)性檢出率為20%，沒有檢測(cè)出PEDV病原。母豬現(xiàn)存欄量100～200的有6個(gè)，PRRSV的陽(yáng)性率為53%，PCV2的陽(yáng)性檢出率為87%，PEDV與PRV檢測(cè)顯示病原陽(yáng)性率均為7%。母豬存欄量200以上的大型豬場(chǎng)有2個(gè)，檢測(cè)結(jié)果顯示均為PRRSV和PCV2混合感染(表3)。

表3 不同規(guī)模豬場(chǎng)各種病毒陽(yáng)性率 (%)

3 討論

近幾年農(nóng)業(yè)部發(fā)布的全國(guó)疫情通報(bào)可知在多重感染的疾病中，80%是病毒病，藍(lán)耳病、圓環(huán)病毒病、偽狂犬病、豬瘟等仍為常見多發(fā)病。目前病毒性疾病的治療仍缺乏有效藥物，且一些危害嚴(yán)重的病毒變異加劇，使得傳統(tǒng)疫苗失去了有效保護(hù)作用，養(yǎng)豬業(yè)面臨著疫病威脅將更加嚴(yán)峻。（1）本研究發(fā)現(xiàn)病原多重感染的危害越來(lái)越突出，檢測(cè)結(jié)果顯示病料中檢出2種或2種以上病原的樣品為60%，其中以PRRSV+PCV2(48%)的組合最為常見。多種病原的混合感染和繼發(fā)感染不但造成誤診，給防治帶來(lái)困難，而且造成高發(fā)病率和死亡率。本研究通過(guò)病原檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，無(wú)論有無(wú)腹瀉癥狀PRRSV與PCV-2的陽(yáng)性率都很高，這表明PRRSV和PCV-2是危害我省養(yǎng)豬業(yè)的頭號(hào)疫病病原。我國(guó)PRRSV毒株呈多樣化趨勢(shì)，不同病毒株之間的重組不斷加劇，而且現(xiàn)用的活疫苗毒株與流行毒株之間也會(huì)發(fā)生重組。加上藍(lán)耳病活疫苗的濫用，創(chuàng)造了更廣闊的重組空間，使得毒株的變異趨勢(shì)不可預(yù)測(cè)，加重了該病的復(fù)雜性和控制難度。無(wú)論是小型及散養(yǎng)豬場(chǎng)，還是大型豬場(chǎng)，藍(lán)耳病病毒居高不下，這表明藍(lán)耳病成為嚴(yán)重影響本省養(yǎng)豬生產(chǎn)的第一大疫病，因此豬場(chǎng)應(yīng)以控制病毒感染為首要任務(wù)。圓環(huán)病毒2型感染率較高，不少豬場(chǎng)出現(xiàn)典型的斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)和皮炎與腎病綜合征(PDNS)，在豬病中的地位日益凸顯。PRRSV和PCV2均可造成細(xì)胞免疫和體液免疫抑制，破壞機(jī)體的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致豬群抗病能力大大減弱，給養(yǎng)殖業(yè)造成重大損失。建議豬場(chǎng)在切實(shí)做好生物安全措施、衛(wèi)生消毒的基礎(chǔ)上，對(duì)豬群加強(qiáng)監(jiān)測(cè)，摸清感染底數(shù)和免疫效果，實(shí)施科學(xué)、有效的免疫接種，必要時(shí)適當(dāng)增加疫苗的免疫劑量(衛(wèi)秀余，2012；穆永攀，2014；楊漢春，2015)。（2）豬腹瀉是導(dǎo)致仔豬成活率不高并對(duì)養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展造成嚴(yán)重危害的重要因素之一。100頭疑似病豬中存在腹瀉癥狀占64%，，其它臨床癥狀伴有喘、呼吸困難、體溫升高等。結(jié)果顯示，有腹瀉癥狀病豬中PCV-2與PRRSV的陽(yáng)性率很高，分別達(dá)到75%、56%，無(wú)腹瀉癥狀的病豬中也檢出了PEDV與PRV病原，但檢出率都較低。這表明PCV-2和PRRSV感染是引發(fā)豬腹瀉的主要原因。

本研究通過(guò)對(duì)10個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)100疑似豬病樣品進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)PRRSV和PCV-2是主要的感染源，且混合感染嚴(yán)重，個(gè)別存在PEDV和PRV病原感染，且不同發(fā)病狀況的主要病原差異不明顯，不同規(guī)模豬場(chǎng)存在的主要病原也沒有很大差別。綜上結(jié)果為當(dāng)前本省豬病流行狀況提供了參考資料，從而為防控提供可靠依據(jù)。

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1007-1733(2015)12-0044-02

2015–10–21）

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