林佳華中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)，陜西西安　710032

肝癌患者血清中腫瘤標(biāo)志物含量檢測(cè)及其與肝癌組織中凋亡分子、免疫分子的關(guān)系研究

林佳華
中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)，陜西西安710032

[摘要]肝癌是一種常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，有著致死率高，惡化程度快的特征。早期對(duì)疑似肝癌患者血清中的腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)，有著一定的現(xiàn)實(shí)意義存在。腫瘤標(biāo)記物對(duì)于肝癌組織中的凋亡分子與免疫分子有一定的關(guān)系存在。結(jié)合實(shí)際情況，該綜述首先研究了肝癌患者血清中腫瘤標(biāo)志物含量檢測(cè)方法，后對(duì)腫瘤標(biāo)志物和肝癌組織中免疫分子和凋亡分子之間的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行深入性探討。

[關(guān)鍵詞]肝癌；腫瘤標(biāo)志物；凋亡；Toll樣受體；髓樣分化因子88

肝癌是一種常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，和其他消化道腫瘤相比，肝癌有著生存率低、惡化程度高的特征。在現(xiàn)如今的臨床治療中，治療方案的確定與對(duì)患者腫瘤嚴(yán)重程度的評(píng)估有著非常密切的聯(lián)系。當(dāng)前一般適應(yīng)血清學(xué)檢測(cè)的方法，來(lái)判斷患者病情的嚴(yán)重程度，該方式有著無(wú)創(chuàng)，可重復(fù)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，能夠較為公允的檢測(cè)出患者病情。最近幾年，為了能夠找到更為準(zhǔn)確的診斷方法，血清學(xué)指標(biāo)也成為了一項(xiàng)研究重點(diǎn)。其中包含了胸苷激酶，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，缺氧誘導(dǎo)因子，高遷移率族蛋白1等等。鑒于此，該綜述對(duì)肝癌患者血清中腫瘤標(biāo)志物含量檢測(cè)及其與肝癌組織中凋亡分子、免疫分子的關(guān)系進(jìn)行深入性研究，現(xiàn)綜述如下。

1　腫瘤標(biāo)志物診斷早期肝癌研究意義

腫瘤標(biāo)志物指的是在癌細(xì)胞內(nèi)部或者癌細(xì)胞表達(dá)過(guò)程中，亦或者是存在于宿主內(nèi)部，作用在腫瘤反應(yīng)中所產(chǎn)生的物質(zhì)，腫瘤標(biāo)志物廣泛存在于細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中，部分腫瘤標(biāo)志物存在于細(xì)胞表面。有時(shí)也能夠在患者血液或者體液中檢測(cè)出來(lái)。一些腫瘤標(biāo)志物僅在腫瘤患者體內(nèi)出現(xiàn)，而部分腫瘤標(biāo)志物在患者體內(nèi)的總含量如果超過(guò)了正常水平，可以通過(guò)免疫學(xué)，化學(xué)等等一些基因?qū)W檢測(cè)方法，將其含量測(cè)定出來(lái)，這對(duì)于鑒定腫瘤是否存在，判斷腫瘤發(fā)生發(fā)展進(jìn)程，判斷治療效果與復(fù)發(fā)情況，預(yù)后情況提供了可靠依據(jù)。在肝癌的早期診斷中，肝癌組織中的凋亡分子，免疫分子開(kāi)創(chuàng)了診斷的先例，令亞臨床對(duì)于肝癌的診斷成為了可能，同時(shí)也掀起了對(duì)腫瘤標(biāo)志物研究的熱潮。

血清指標(biāo)與腫瘤組織穿刺活檢是在臨床上用于肝癌惡化程度檢測(cè)的兩種方式。和腫瘤組織初穿刺活檢相比，血清學(xué)指標(biāo)檢查法有著無(wú)創(chuàng)，操作簡(jiǎn)單，可重復(fù)性強(qiáng)的特點(diǎn)，這對(duì)于判定患者病情，有著十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。

2　腫瘤標(biāo)志物與肝癌組織中凋亡分子之間的關(guān)系

2.1 HMGB1

專家學(xué)者們對(duì)血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)進(jìn)行了深入性研究，并已經(jīng)獲知，在以往研究中[1]，能夠發(fā)現(xiàn)血清指標(biāo)諸如DKK、VEGF、HIF-1、HMGB1、GP73等等指標(biāo)和以往相比均存在不同程度升高現(xiàn)象。最新研究[1]表明，HMGB1為一種氨基酸序列保守度較高的蛋白。在細(xì)胞核中，其地位相當(dāng)重要，歸屬于結(jié)構(gòu)蛋白范疇中。HMGB1不但能將細(xì)胞核與核小體加以全面穩(wěn)定，與此同時(shí)也參加到了DNA的復(fù)制，與轉(zhuǎn)錄等過(guò)程。當(dāng)細(xì)胞壞死以后，HMGB1會(huì)從細(xì)胞核中釋放，該物質(zhì)也能夠由已經(jīng)被激活的單核巨噬細(xì)胞分泌。有國(guó)內(nèi)一項(xiàng)研究表明[2]。對(duì)肝癌患者的血清進(jìn)行檢測(cè)，其結(jié)果表明，樣本血清中HMGB1含量的上升與患者病情惡化程度有著非常密切的關(guān)系。

2.2 GP73

GP73屬于高爾基體順面蛋白的一種，一般情況下，GP73應(yīng)該在肝細(xì)胞的內(nèi)部，分泌到細(xì)胞外的情況是非常少見(jiàn)的[3]。當(dāng)人體肝細(xì)胞發(fā)生病變的時(shí)候，GP73就會(huì)從細(xì)胞中的高爾基體順面循環(huán)到細(xì)胞胞漿內(nèi)部，并在分泌小體中，完成了整個(gè)出細(xì)胞的過(guò)程，并最終進(jìn)入到血液循環(huán)之中。GP73在上皮細(xì)胞上表達(dá)，因此這種蛋白和其他的上皮性細(xì)胞腫瘤有著非常密切的關(guān)系。在正常情況下，GP73主要在膽管上皮細(xì)胞中表達(dá)，在肝臟細(xì)胞中并不會(huì)表現(xiàn)出表達(dá)現(xiàn)象，或者極少出現(xiàn)表達(dá)現(xiàn)象。但肝臟細(xì)胞一旦發(fā)生了癌變，在膽管上皮細(xì)胞中GP73的表達(dá)數(shù)量會(huì)比以往少，在肝臟中會(huì)呈現(xiàn)出高表達(dá)狀態(tài)。該物質(zhì)的表達(dá)異常和肝癌的產(chǎn)生關(guān)系密切。GP73信使RNA和蛋白在受到感染以后，其會(huì)在內(nèi)部HEPG2細(xì)胞中表達(dá)，沒(méi)有發(fā)生癌變的細(xì)胞中該物質(zhì)則不表達(dá)。

2.3 TK1

TK1和細(xì)胞的分化與增殖有著非常密切的聯(lián)系，在通常情況下，該物質(zhì)存在于細(xì)胞質(zhì)當(dāng)中，可以對(duì)胸腺胞嘧啶DNA和磷酸DNA之間的轉(zhuǎn)化。TK1是一種較為特殊的激酶，同時(shí)也是癌變肝臟細(xì)胞在進(jìn)行脫氧核苷酸合成時(shí)必有的前提物質(zhì)，當(dāng)人體肝臟內(nèi)癌細(xì)胞大量繁殖的時(shí)候，該物質(zhì)的含量較以前相比明顯增高。如發(fā)生癌變現(xiàn)象，那么腫瘤細(xì)胞會(huì)快速的增殖。和其他激酶相比，TK1的含量與活性均與之較高，在這種環(huán)境下，該物質(zhì)超過(guò)正常水平25~100倍左右。

檢測(cè)患者血清中TK1的水平，有著非常重要的臨床意義存在，這樣能夠?qū)⒒颊唧w內(nèi)癌細(xì)胞增殖的活動(dòng)信息加以全面了解，并對(duì)治療腫瘤的效果進(jìn)行全面評(píng)測(cè)。對(duì)于預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)上，有著非常重要的現(xiàn)實(shí)意義。

2.4 DDK1

分泌蛋白DDK1在多種癌變細(xì)胞中呈現(xiàn)高度表達(dá)，在對(duì)肝癌患者的血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)過(guò)程中，分泌蛋白DDK1呈現(xiàn)高表達(dá)[4]，能夠最為檢測(cè)癌癥腫瘤的主要標(biāo)志物，最近幾年，相關(guān)學(xué)者[5]對(duì)分泌蛋白DDK1進(jìn)行了深入性研究，結(jié)果表明，在肝癌細(xì)胞中，DDK1的敏感性高達(dá)70%，特異性約為91%。在肝癌早期檢測(cè)中，其敏感性為約為71%，特異性約為92%。另外，對(duì)DKK1蛋白的檢測(cè)能夠在根本上彌補(bǔ)使用甲胎蛋白檢測(cè)造成的不足，實(shí)驗(yàn)中表明，對(duì)于AFP陰性患者，其診斷肝癌細(xì)胞的敏感性約為71%，特異性約為90%。AFP陽(yáng)性者主要是由慢性HBV與肝硬化患者組成，它們是罹患肝癌的危險(xiǎn)人群，使用分泌蛋白DKK1，能夠從陽(yáng)性樣本中檢測(cè)肝細(xì)胞癌，其敏感性為70%，特異性約為84%。將AFP和DKK1合并使用，能夠提升肝癌的檢出率。值得一提的是，對(duì)術(shù)后患者的DKK1指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，其血清中分泌蛋白DKK1濃度和以往相比有所下降，由此能夠看出，分泌蛋白DKK1能作為診斷肝癌的重要指標(biāo)。

有研究對(duì)上述三種物質(zhì)進(jìn)行了分析[6]，其結(jié)果表明，在肝癌患者血清中，TK1，DDK1、HMGB1三者的信使RNA與蛋白的含量明顯高于健康組，這種現(xiàn)象在一定程度上說(shuō)明，肝癌患者血清中TK1，DDK1、HMGB1含量明顯高于正常水平。

血清樣本中腫瘤標(biāo)志物信使RNA和蛋白含量升高，主要和癌細(xì)胞增殖有關(guān)，有特異性的血清指標(biāo)不但能夠根據(jù)肝癌特征，為醫(yī)生提供診斷依據(jù)，還要能夠辨別出肝癌病情的嚴(yán)重程度。肝癌細(xì)胞最為明顯的特點(diǎn)就是遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和無(wú)限繁殖。在以往，一般使用腫瘤細(xì)胞穿刺的方式，檢驗(yàn)?zāi)[瘤的惡性程度。

3　腫瘤標(biāo)志物與肝癌組織中免疫分子之間的關(guān)系

肝臟細(xì)胞在增殖的過(guò)程當(dāng)中，會(huì)受到凋亡多個(gè)凋亡抑制和促進(jìn)基因的調(diào)節(jié)和控制，細(xì)胞凋亡是一種受多細(xì)胞有機(jī)體內(nèi)相對(duì)復(fù)雜遺傳機(jī)制調(diào)控的，是一種位數(shù)身體機(jī)能正常運(yùn)轉(zhuǎn)和保證內(nèi)部環(huán)境穩(wěn)定的重要過(guò)程。是一個(gè)由細(xì)胞基因決定的自行或者程序化終結(jié)生命的過(guò)程。促凋亡基因的缺少和抗凋亡基因的高度表達(dá)，會(huì)提升細(xì)胞發(fā)生癌變的風(fēng)險(xiǎn)，P1K1屬于絲分裂中蘇氨酸/絲氨酸激酶家族的一份子。P1K1的序列非常保守，同時(shí)也是調(diào)整細(xì)胞周期的重要分子，對(duì)細(xì)胞分裂有著很強(qiáng)的促進(jìn)作用。該物質(zhì)在G0、G1和S期中低度表達(dá)，在G2期內(nèi)，該物質(zhì)開(kāi)始高度表達(dá)，并在M形成頂峰。有專家[7]的離體實(shí)驗(yàn)表明，受到干擾的P1K1的表達(dá)，能夠?qū)┘?xì)胞增殖的過(guò)程加以抑制。

LIVIN是近年來(lái)最新發(fā)現(xiàn)的一種凋亡抑制蛋白。該蛋白會(huì)利用自身的BIR結(jié)構(gòu)和CASPSE7與CASPSE3相互結(jié)合，進(jìn)而對(duì)CASPSE介導(dǎo)和凋亡所產(chǎn)生的線粒體受損為重要依據(jù)細(xì)胞自我凋亡過(guò)程。

XAIP屬于X染色體中凋亡抑制蛋白的一種，XAIP能夠和CASPSE7、CASPSE3、CASPSE9進(jìn)行全面結(jié)合，并對(duì)細(xì)胞凋亡過(guò)程產(chǎn)生一定的抑制作用。

XAIP基因在肝部腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起到了相當(dāng)重要的作用，是一種具有研究?jī)r(jià)值的肝部腫瘤標(biāo)記物。在對(duì)肝癌患者的早期診斷中[8]，檢測(cè)XAIP含量有著非常重要的臨床意義存在。XIAP基因如果被高度表達(dá)，那么腫瘤對(duì)于化療藥物的敏感性就會(huì)有所降低，這也是腫瘤產(chǎn)生耐藥性的關(guān)鍵原因，該腫瘤標(biāo)記物的表達(dá)，能夠令細(xì)胞中的凋亡和增殖達(dá)到一個(gè)相對(duì)平衡的狀態(tài)，并能夠令異常的細(xì)胞消失，通過(guò)這項(xiàng)原理，可以將腫瘤惡化的情況加以全面抑制。對(duì)于此，將XIAP在肝部腫瘤中的表達(dá)情況進(jìn)行全面研究，能夠?yàn)橹委煾伟┨峁┬碌姆较?。有文獻(xiàn)表明[6]，在肝部惡性腫瘤細(xì)胞系中，均能夠發(fā)現(xiàn)XIAP的過(guò)度表達(dá)，這種過(guò)度表達(dá)的現(xiàn)象和腫瘤本身的耐藥性有一定的關(guān)系存在，有研究表明，該物質(zhì)在肝癌組織中加以表達(dá)的時(shí)候，顯現(xiàn)出XIAP和肝部腫瘤細(xì)胞和癌組織中的表達(dá)和以往相比有所增加[7]，在正常的肝臟細(xì)胞中，XIAP呈現(xiàn)出了低表達(dá)的現(xiàn)象，這在根本上說(shuō)明了XIAP的高度表達(dá)與腫瘤細(xì)胞凋亡指數(shù)降低有直接的關(guān)系，和癌細(xì)胞增殖無(wú)關(guān)?，F(xiàn)如今[8]，通過(guò)小分子技術(shù)，能夠?qū)IAP蛋白的表達(dá)降低，進(jìn)而增加腫瘤凋亡細(xì)胞數(shù)量。也有研究證明，在腺毒介導(dǎo)的條件下的XAIP靶向的反義核酸可以將XIAP蛋白表達(dá)數(shù)量降低，進(jìn)而減少癌細(xì)胞對(duì)于γ射線的敏感性，使用相對(duì)應(yīng)的載體，將反義XIAP進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)，除了能夠?qū)┘?xì)胞對(duì)于化療的敏感程度增加之外，也能夠?qū)ASPASE-3的活化程度全面提升。

相關(guān)研究表明，在肝癌組織中XAIP、LIVIN、P1K1中信使RNA中蛋白平均含量比正常人要低[9]，和上文提到的TK1，DDK1、HMGB1呈負(fù)相關(guān)，該項(xiàng)理論在根本上說(shuō)明了，肝癌組織中的凋亡分子X(jué)AIP、LIVIN、P1K1如果表達(dá)程度過(guò)低，會(huì)增加患者罹患惡性腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)，增加了腫瘤標(biāo)志物的分泌量[9]。

肝癌患者肝部細(xì)胞在凋亡的調(diào)節(jié)過(guò)程中發(fā)生異常意外，其免疫功能也會(huì)發(fā)生異常現(xiàn)象。在這種環(huán)境下，為癌細(xì)胞的增殖提供了有利條件。免疫是人體的生理功能，機(jī)體依靠免疫來(lái)辨別“自己”與“異己”[10]。并將進(jìn)入到人體中的抗原物質(zhì)進(jìn)行破壞和排斥，保證機(jī)體的正常運(yùn)轉(zhuǎn)，維護(hù)身體健康[10]。免疫能夠抵抗和預(yù)防微生物的感染。免疫設(shè)計(jì)到非特異和特意成分，在非特異成分并不需要實(shí)現(xiàn)的暴露，在第一時(shí)間就可以對(duì)其進(jìn)行相應(yīng)。免疫系統(tǒng)能夠有效的預(yù)防病原體入侵到人體。在人體的免疫功能發(fā)生異常的情況下，肝臟細(xì)胞更加容易出現(xiàn)免疫逃逸現(xiàn)象，并向遠(yuǎn)方轉(zhuǎn)移。最近幾年，人們發(fā)現(xiàn)了一種天然免疫受體家族———TO ll樣受體。該物質(zhì)能夠?qū)εc病原相關(guān)的分子模式和損傷相關(guān)分子模式加以準(zhǔn)確識(shí)別，同時(shí)發(fā)揮出免疫應(yīng)答反應(yīng)。

在以往，有專家認(rèn)為炎癥反應(yīng)的相關(guān)調(diào)節(jié)和TLRs的關(guān)系非常密切，現(xiàn)有報(bào)告表明[10]，TLRs參與到了肝癌細(xì)胞的發(fā)生和發(fā)展中，在癌癥發(fā)生的整個(gè)過(guò)程之中，已經(jīng)發(fā)生癌變的細(xì)胞能夠釋放出數(shù)倍的DAMPS和PAMPS。之后和細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)和下游的接頭蛋白相連，最終將信號(hào)的通路全面激活，最終實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因表達(dá)的調(diào)節(jié)。LTR2和LTR4的下游主要接頭蛋白是myD88.該物質(zhì)在接頭之后，能夠在JUK－STAT的通路中完成免疫應(yīng)答，進(jìn)而在最大程度上，阻礙了癌細(xì)胞發(fā)生逃逸的危險(xiǎn)。myD88是一種在肝臟癌變細(xì)胞發(fā)生過(guò)程中的必須分子，在myD88被去除以后，肝臟的整個(gè)癌變過(guò)程也會(huì)被停止。有關(guān)文獻(xiàn)指出[11]，TLRs-myd88通路中有關(guān)的免疫分子含量檢測(cè)能夠表明，在肝臟癌變組織中，TLR4、TLR2和-myd88中的信使RNA和蛋白的含量均比正常肝臟組織要高，和TK1，DDK1、HMGB1呈正相關(guān)。這也證明了在發(fā)生癌變的免疫分子中，TLR4、TLR2和-myd88的過(guò)度表達(dá)增加人類罹患肝癌的風(fēng)險(xiǎn)，增加腫瘤標(biāo)志物的分泌。

4　結(jié)語(yǔ)

綜上所述，在肝癌患者的血清中，DDK1，TK1和HMGB1量比健康人要高，上述三種物質(zhì)和發(fā)生病變肝癌組織的免疫分子呈現(xiàn)高表達(dá)，抗凋亡分子呈現(xiàn)低表達(dá)。由此能夠看出，對(duì)疑似肝癌患者進(jìn)行血清中TK1，DKK1和HMGB1的含量進(jìn)行全面監(jiān)測(cè)，對(duì)于檢測(cè)肝癌患者病情程度，肝癌患者的診斷，有著非常重要的臨床意義。

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Serum Levels of Tumor Markers and its Relationship with Apoptosis and Immune Molecules in Hepatocellular Carcinoma

LIN Jia-hua
Department of Surgery, Fourth Military Medical University of PLA, Xi’an, Shaanxi Province, 710032 China

[Abstract]Liver cancer is a common malignant tumor of digestive tract, with the characteristics of high mortality and deterioration degree. Early detection of tumor markers in serum of patients with suspected liver cancer has a certain practical significance. The tumor markers have a certain relationship to the apoptosis molecules and immune molecules in HCC tissues. Combined with the actual situation, this paper firstly studies the detection method of serum tumors markers in patients with liver canner, and then investigates deeply its relationship with apoptosis and immune molecules in HCC tissues.

[Key words]Hepatocellular carcinoma; Tumor markers; Apoptosis; Toll-like receptor; Myeloid differentiation factor 88

收稿日期：（2015-06-26）

[作者簡(jiǎn)介]林佳華(1992-)，男，福建莆田人，本科，研究方向：外科。

[文章編號(hào)]1674-0742（2015）09（c）－0185-03

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[中圖分類號(hào)]R7