劉超 李英

（樂(lè)山市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，四川樂(lè)山 614000）

茶葉中甲基對(duì)硫磷的檢測(cè)

劉超 李英

（樂(lè)山市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，四川樂(lè)山 614000）

本文采用高效液相色譜串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜法對(duì)綠茶、紅茶、普洱茶、烏龍茶中甲基對(duì)硫磷進(jìn)行檢測(cè)。建立了以Inertsil ODS-3為液相色譜柱，以甲醇、0.1%乙酸水為流動(dòng)相，質(zhì)譜使用電噴霧離子源，正離子掃描，以264.0/125.0為定量離子對(duì)的LC-MS/ MS檢測(cè)方法。該方法所測(cè)得的甲基對(duì)硫磷在0～2.0ng/mL內(nèi)具有良好的線性，檢出限為0.47ng/kg，加標(biāo)回收率在83.5%～106.3%之間。該方法適合綠茶、紅茶、普洱茶、烏龍茶中甲基對(duì)硫磷殘留量的分析。

茶葉；甲基對(duì)硫磷；液相色譜串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜

茶，屬雙子葉植物，約30個(gè)屬，500個(gè)種，分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)。中國(guó)有14個(gè)屬，397種，主要生長(zhǎng)于長(zhǎng)江以南各地。茶葉含兒茶素、膽甾烯酮、咖啡堿、肌醇、葉酸、泛酸等成分，可以增進(jìn)人體健康。茶葉是我國(guó)傳統(tǒng)的經(jīng)濟(jì)作物，同時(shí)也是我國(guó)主要的出口商品之一。近年來(lái)，茶葉的農(nóng)藥殘留問(wèn)題日益引起人們的關(guān)注，也成了國(guó)際貿(mào)易中的壁壘。茶葉中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留一般用氣相色譜法、高效液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法進(jìn)行檢測(cè)[1-3]。氣相色譜法檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥具有回收率低、穩(wěn)定性不高等缺點(diǎn)；高效液相色譜法經(jīng)常遇到靈敏度低、選擇性差等問(wèn)題[4]。而高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀則具有靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，因此在茶葉農(nóng)殘檢測(cè)中較為常見(jiàn)[5,6]，但用其檢測(cè)茶葉中的甲基對(duì)硫磷在國(guó)內(nèi)鮮有報(bào)道。為此，研究高效液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜法檢測(cè)茶葉中甲基對(duì)硫磷具有非常重要的意義。

本試驗(yàn)用乙腈提取，用Cleanert TPT小柱凈化，以高效液相色譜串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀測(cè)定茶葉中甲基對(duì)硫磷殘留，具有前處理簡(jiǎn)單、選擇性好、穩(wěn)定性好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)；適用于茶葉中甲基對(duì)硫磷的實(shí)際檢測(cè)工作。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

綠茶：碧螺春，犍為縣興順精制花茶廠，生產(chǎn)日期為2015年07月02日，20℃下保存，保質(zhì)期為18個(gè)月；

紅茶：碧潭飄雪，馬邊蕎壩茶葉專(zhuān)業(yè)合作社，購(gòu)買(mǎi)日期為2015年4月24；

普洱：云南普洱茶，云南普洱茶有限公司，購(gòu)買(mǎi)日期為2015年4月19日；

烏龍茶：鐵觀音，森秋茶葉有限公司，購(gòu)買(mǎi)日期為2015年4月27日。

乙腈、甲苯、正己烷、丙酮，均為色譜純；

無(wú)水硫酸鈉，用前650℃灼燒4h，儲(chǔ)于干燥器中，冷卻后備用；

甲基對(duì)硫磷，100μg/mL，1mL，GSB05-1870-2008，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測(cè)所；

水，GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

1.2 儀器與設(shè)備

儀器液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源，美國(guó)AB公司API3200；

分析天平（精確度0.01mg），德國(guó)賽多利斯集團(tuán)CP225D；

高速組織搗碎機(jī)，九陽(yáng)股份有限公司JYL-C012；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，萊博泰克科技有限公司EV331；

氮吹儀，北京普立泰儀器有限公司EVA50A；

低速離心機(jī)，四川蜀科儀器有限公司TD420；

均質(zhì)器，艾卡儀器設(shè)備有限公司T25；

微孔濾膜（尼龍），13mm×0.22μm；

Cleanert TPT固相萃取柱，規(guī)格為2.0g/10mL。

1.3 樣品的提取

準(zhǔn)確稱(chēng)取5.00g經(jīng)粉碎的綠茶于50mL離心管中，加入10mL乙腈，均質(zhì)提取1min，4200r/min離心5min，取上清液于50mL比色管中。殘?jiān)?0mL乙腈重復(fù)提取2次，合并上清液，于40℃氮吹至1mL左右，待凈化。

1.4 凈化

用10mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）預(yù)洗Cleanert TPT固相萃取柱，棄去流出液，下接雞心瓶，放入固定架上，將樣品提取液轉(zhuǎn)移至Cleanert TPT固相萃取柱中，用4mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）分兩次洗滌樣液瓶，并將洗滌液移入柱中，用25mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）洗滌小柱，收集所有流出液于雞心瓶中。流出液于40℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約0.5mL，乙腈定容至1mL，供LCMS/MS用。

1.5 色譜條件

1.5.1 液相色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-3（150mm×2.1mm，5μm）；

進(jìn)樣體積：10μL；

流速：0.2mL/min；

柱溫：40℃；

流動(dòng)相：A：甲醇，B：0.1%乙酸，梯度洗脫見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫條件Table 1Mobile phase condition

1.5.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源；掃描方式：正離子掃描；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；電噴霧電壓：4500V；氣簾氣：30psi；霧化氣壓力：30psi；碰撞氣：5psi；輔助氣：30psi；離子源溫度為450℃。

表2 質(zhì)譜條件Table 2Condition list of rod mass spectrometry

2 結(jié)果與分析

2.1 檢出限

由自動(dòng)進(jìn)樣器吸取0.2ng/mL的甲基對(duì)硫磷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液10μL，注入色譜儀中，平行進(jìn)樣3次，求出儀器檢出限的平均值，而后求出方法檢出限，結(jié)果見(jiàn)表3。

由表3可知，儀器的平均檢出限為0.00932ng/mL，方法檢出限為1.88ng/kg，可見(jiàn)該儀器和方法靈敏度很高。

表3 甲基對(duì)硫磷的檢出限Table 3Detection limit of methyl parathion

2.2 線性范圍

根據(jù)甲基對(duì)硫磷的靈敏度，用空白樣品提取液分別配成濃度為0ng/mL、0.2ng/mL、0.4ng/mL、0.6ng/mL、0.8ng/ mL、1ng/mL和2ng/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。4℃保存，現(xiàn)用現(xiàn)配。此標(biāo)準(zhǔn)系列供LC-MS/MS用，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，見(jiàn)圖1。

圖1 甲基對(duì)硫磷標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：Fig.1Standard curve regression equation of methyl parathion

圖1顯示，甲基對(duì)硫磷標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=77978x+386.96，R2值為0.9991，由此可見(jiàn)，甲基對(duì)硫磷在0～2.0ng/mL范圍內(nèi)，具有良好的線性。

2.3 回收率

準(zhǔn)確稱(chēng)取9份研磨均勻的5.00g空白試樣于50mL具塞比色管中，分別準(zhǔn)確移取0.02mL、0.03mL、0.04mL濃度為100ng/mL的甲基對(duì)硫磷準(zhǔn)液標(biāo)準(zhǔn)液各3份至9份試樣中，加入10mL乙腈溶液在高度組織搗碎機(jī)上以15000r/min勻漿提取1min。4200r/min離心5min，取上清液于50mL比色管中。殘?jiān)?0mL乙腈重復(fù)提取2次，合并上清液，于40℃氮吹至1mL左右，用10mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）預(yù)洗Cleanert TPT固相萃取柱，棄去流出液，下接雞心瓶，放入固定架上，將樣品提取液轉(zhuǎn)移至Cleanert TPT固相萃取柱中，用4mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）分兩次洗滌樣液瓶，并將洗滌液移入柱中，用25mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）洗滌小柱，收集所有流出液于雞心瓶中。流出液于40℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約0.5mL，乙腈定容至1mL，供LC-MS/MS用。

式中：C1—標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的加標(biāo)樣品的濃度，ng/mL；

C2—標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的樣品的濃度，ng/mL；

M—加標(biāo)質(zhì)量，ng；

表4 甲基對(duì)硫磷加標(biāo)回收率Table 4Adding standard recovery of methyl parathion

甲基對(duì)硫磷方法回收率為83.5%～106.3%，符合GB/T27404-2008實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)中的規(guī)定（70%～120%）。

2.4 重復(fù)性

準(zhǔn)確稱(chēng)取6份研磨均勻的10.00g空白試樣于50mL具塞比色管中，分別準(zhǔn)確移取0.80mL濃度為10ng/mL的甲基對(duì)硫磷標(biāo)準(zhǔn)液，加入30mL乙腈溶液在高度組織搗碎機(jī)上以15000r/min勻漿提取1min。以下步驟同1.3、1.4的步驟，得到凈化的樣品提取液。

由自動(dòng)進(jìn)樣器吸取凈化后的樣品溶液10μL，注入色譜儀中，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積。計(jì)算出RSD值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，RSD為2.82%，說(shuō)明該方法重復(fù)性良好。

3 實(shí)際樣品檢測(cè)

用建立的方法對(duì)試驗(yàn)中準(zhǔn)備的綠茶、紅茶、普洱、烏龍茶進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明：甲基對(duì)硫磷在這4種樣品中均未檢出。原因可能是所測(cè)樣品是市面上抽檢的，為明前茶，由于溫度較低，明前茶的農(nóng)藥施用量較少，農(nóng)殘較低，因此未檢測(cè)出甲基對(duì)硫磷。

4 結(jié)論

建立了高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)茶葉中的甲基對(duì)硫磷殘留，此方法檢出限為0.47ng/kg，線性范圍為0～2.0ng/mL，方法回收率為83.5%～106.3%，方法精密度為2.82%。因此，所建方法能夠滿(mǎn)足實(shí)際檢測(cè)的需要。

[1]羅逢健,劉光明,陳宗燮.茶葉中23種農(nóng)藥殘留的多檢出分析技術(shù)[J].現(xiàn)代科學(xué)儀器,2003,(1):13-16.

[2]汪慶華,魯成銀.茶葉中多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法[J].農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),2003,(6):20-23.

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[5]白吉洪,張文圣,等.高分子多孔微球富集-HPLC法測(cè)定水體中有機(jī)磷[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào),1995,14(3):50-53.

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Detection of Methyl Parathion in Tea

LIU Chao LI Ying
(Leshan Food and Drug Inspection and Testing Center,Leshan 614000,China)

In this paper,we tested methyl parathion in green tea,black tea,Puer tea,oolong tea with LC-MS/MS method. The method was developed based on novel HPLC column Inertsil ODS-3 with methanol and 0.1%acetic acid as mobile phase,combined with MS,which used positive ion scanning,and quantification ion pair was 264.0/125.0.A good linear in 0～2.0ng/mL was obtained.And the detection limit was 0.47ng/kg.The adding standard recovery was 83.5%～106.3%.This method is suitable for methyl parathion residues analysis in green tea,black tea,Puer tea,oolong tea.

Tea;methyl parathion;LC-MS/MS

O657

A

1008-1038(2015)08-0024-04

2015-04-20

劉超（1984—），男，助理工程師，研究方向?yàn)槭称钒踩?/p>