王漢萍 張力

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院呼吸內(nèi)科，北京100730

非小細(xì)胞肺癌患者中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的預(yù)測(cè)作用

王漢萍 張力#

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院呼吸內(nèi)科，北京100730

惡性腫瘤患者的血液中可檢測(cè)到循環(huán)腫瘤細(xì)胞（circulating tumor cells，CTC）。轉(zhuǎn)移性乳腺癌、結(jié)直腸癌和前列腺癌中外周血CTC與疾病的復(fù)發(fā)及治療反應(yīng)的臨床相關(guān)性已經(jīng)被確立。研究晚期肺癌患者中CTC與臨床的相關(guān)性對(duì)指導(dǎo)臨床治療的非常重要。CTC可能成為臨床上提示肺癌預(yù)后；預(yù)測(cè)疾病進(jìn)展；指導(dǎo)治療的重要因素，將CTC檢測(cè)轉(zhuǎn)化到臨床實(shí)踐中并進(jìn)一步改善標(biāo)準(zhǔn)化的CTC檢測(cè)技術(shù)有重要意義。

循環(huán)腫瘤細(xì)胞；非小細(xì)胞肺癌；診斷；預(yù)測(cè)療效

CTC是從腫瘤的原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶脫落下來(lái)進(jìn)入外周血液循環(huán)中的腫瘤細(xì)胞。在惡性腫瘤的病程中，上皮組織來(lái)源的實(shí)體腫瘤可以各種不同的狀態(tài)存在于人體中，包括初始時(shí)的惰性狀態(tài)、較強(qiáng)侵襲性的狀態(tài)，以及腫瘤從局部迅速播散到血液或淋巴循環(huán)中的強(qiáng)侵襲狀態(tài)等[1]。CTC最早發(fā)現(xiàn)于1869年，一個(gè)轉(zhuǎn)移性癌癥患者的尸檢報(bào)告中首次對(duì)此類(lèi)細(xì)胞進(jìn)行了描述[2]。約108個(gè)血細(xì)胞中可以檢測(cè)到一個(gè)CTC即可提示腫瘤轉(zhuǎn)移。具有強(qiáng)轉(zhuǎn)移性和侵襲性的表型往往丟失了部分上皮細(xì)胞的特征而獲得了更多類(lèi)間質(zhì)細(xì)胞特有的轉(zhuǎn)移潛能，這也是CTC具有不同于一般腫瘤細(xì)胞的獨(dú)特特征的相關(guān)機(jī)制[3]。以上過(guò)程被稱(chēng)為上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)換（epithelialmesenchymal transitions，EMT），這種轉(zhuǎn)換在疾病進(jìn)展和腫瘤轉(zhuǎn)移時(shí)均有發(fā)生，包括上皮細(xì)胞變成類(lèi)成纖維細(xì)胞的外觀改變、上皮細(xì)胞分化標(biāo)記物（如細(xì)胞角蛋白和E-鈣黏素）的下調(diào)，以及間質(zhì)標(biāo)記物（波形蛋白、纖連蛋白和N-鈣黏素）的表達(dá)等改變[4-5]。

1 CTC和肺癌

在轉(zhuǎn)移性乳腺癌[6-7]、結(jié)直腸癌[8]和前列腺癌[9]中，CTC與腫瘤的臨床相關(guān)性已被確認(rèn)。關(guān)于非小 細(xì) 胞 肺 癌（non-small cell lung carcinoma，NSCLC）和CTC的相關(guān)性也已有諸多報(bào)道[10-11]。肺部惡性腫瘤中有75%～80%為NSCLC，絕大部分NSCLC患者在診斷時(shí)都已處于疾病晚期，患者缺乏有效的系統(tǒng)治療，疾病經(jīng)治療后也容易復(fù)發(fā)，這導(dǎo)致了晚期NSCLC的總生存期（overall survival，OS）較短。臨床分期是NSCLC患者最重要的預(yù)后因素，在早期NSCLC患者中年齡和性別也是重要預(yù)后因素[12]。目前晚期NSCLC患者的標(biāo)準(zhǔn)治療方案為含鉑雙藥化療方案[13-14]，加或不加貝伐珠單抗[15]。部分確定存在表皮生長(zhǎng)因子受體（epithelial grow th factor receptor，EGFR）基因活性突變或存在間變淋巴細(xì)胞激酶（anaplasticlymphomakinase，ALK）重排的NSCLC患者可以使用特異性的酪氨酸激酶抑制劑（吉非替尼、厄洛替尼和阿法替尼）或ALK抑制劑（克唑替尼）治療，臨床療效明顯優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)化療方案[16-18]。研究發(fā)現(xiàn)來(lái)源于原發(fā)腫瘤或轉(zhuǎn)移部位的CTC中也可以檢測(cè)到以上基因異常，因臨床實(shí)踐中獲取新鮮的腫瘤組織經(jīng)常比較困難，而利用血液樣本分析CTC卻可以常規(guī)進(jìn)行，這就為肺癌患者的診斷和治療提供了便利[1，19-20]。

2 CTC的富集和檢測(cè)方法

可靠的CTC檢測(cè)方法重復(fù)性好，并可以對(duì)CTC進(jìn)行計(jì)數(shù)和特征分析。根據(jù)CTC的生物學(xué)或物理學(xué)特征，很多實(shí)驗(yàn)室都分別研究出了多種富集CTC的技術(shù)和方法[21]。但目前臨床中尤其是肺癌研究中最常使用的方法主要有兩種：①Cell-Search?系統(tǒng)（Veridex公司），是一種以上皮細(xì)胞黏附分子（epithelial celladhesionmolecule，EpCAM）為基礎(chǔ)的免疫吸附富集系統(tǒng)；②ISET技術(shù)（Rarecells Diagnostics公司），是一種以過(guò)濾器為基礎(chǔ)的通過(guò)上皮性腫瘤細(xì)胞的大小來(lái)分離的體積排除技術(shù)。

2.1 CellSearch?系統(tǒng)

CellSearch?系統(tǒng)是一個(gè)半自動(dòng)化的技術(shù)，通過(guò)一種包被了抗EpCAM抗體的磁性納米顆粒富集血液中表達(dá)EpCAM的細(xì)胞。富集的樣本隨后進(jìn)行熒光標(biāo)記，標(biāo)記的抗體為白細(xì)胞標(biāo)志物CD45和一組細(xì)胞角蛋白抗體，將EpCAM（+）CK（+）DAPI（+）CD45（-）的細(xì)胞界定為CTC。Cell-Search?系統(tǒng)的主要局限性是其不能檢測(cè)EpCAM陰性的腫瘤細(xì)胞。但最近有研究發(fā)現(xiàn)在EpCAM陰性的CTC中有EMT表型相關(guān)的標(biāo)記物（如CD146）的表達(dá)，可望改善這個(gè)系統(tǒng)的敏感性[22-24]。CellSearch?系統(tǒng)是目前唯一被FDA批準(zhǔn)用于幫助提示乳腺癌、結(jié)直腸癌和前列腺癌的預(yù)后和檢測(cè)治療反應(yīng)的程序[6，9，25-28]。

2.2 ISET技術(shù)

該技術(shù)是一種以過(guò)濾為基礎(chǔ)的方法，根據(jù)細(xì)胞大小來(lái)分離CTC。用一個(gè)過(guò)濾裝置過(guò)濾外周血，該裝置含10個(gè)小格，可以同時(shí)加多個(gè)樣本。和凈化后的血細(xì)胞相比，CTC的直徑較濾孔大（＞8mm）。從血樣中捕獲的CTC在細(xì)胞染色后可直接顯示在濾器上，細(xì)胞的形態(tài)特征可得到很好的保留。過(guò)濾后，覆蓋的濾膜進(jìn)行自然干燥后，就可進(jìn)一步進(jìn)行染色和分析。通過(guò)這種方法可簡(jiǎn)化血樣的處理，不需要利用上皮標(biāo)記物來(lái)富集細(xì)胞。

2.3 CellSearch?和ISET的比較

根據(jù)表1，檢驗(yàn)值（貴州民族學(xué)生F1均值）和標(biāo)準(zhǔn)值（美式英語(yǔ)母語(yǔ)使用者F1均值）的均值不同，其中F1檢驗(yàn)值在緊元音和松元音中均略高于標(biāo)準(zhǔn)值，說(shuō)明男性貴州學(xué)生總體較母語(yǔ)男性使用者開(kāi)口度更大，因而舌位也較低，但兩者不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的顯著性差異。

由Farace等進(jìn)行的一項(xiàng)比較CellSearch?和ISET的研究[29]共入組了60例不同組織來(lái)源的轉(zhuǎn)移癌患者，結(jié)果顯示這兩項(xiàng)技術(shù)在富集CTC細(xì)胞方面存在一些差別，其原因可能為CellSearch?只能捕獲EpCAM陽(yáng)性的細(xì)胞而漏掉了間質(zhì)表型的細(xì)胞。Farace等[29]還認(rèn)為，ISET除了能對(duì)CTC進(jìn)行計(jì)數(shù)外，還能更精確地提示預(yù)后及為轉(zhuǎn)移性肺癌患者的個(gè)體化治療決策提供進(jìn)一步的分子檢測(cè)結(jié)果。

Krebs等[30]比較了使用兩種方法分離未經(jīng)化療的Ⅲa～Ⅳ期NSCLC患者CTC的區(qū)別，并觀察到了具有特異性上皮標(biāo)記物表達(dá)的腫瘤細(xì)胞簇及其增殖狀態(tài)。但是利用ISET方法能在80%的患者中檢測(cè)到CTC，而通過(guò)CellSearch?方法只能檢測(cè)到23%的陽(yáng)性率。43%的患者通過(guò)ISET方法檢測(cè)到了非增殖的腫瘤細(xì)胞簇而這些非增殖的細(xì)胞簇卻不能通過(guò)CellSearch?方法檢測(cè)到。該研究提示兩種技術(shù)都能檢測(cè)到晚期NSCLC患者的血樣中存在CTC，但晚期腫瘤中EpCAM的低表達(dá)可能導(dǎo)致CellSearch?的敏感性降低。

Chinen等[31]報(bào)道了1例轉(zhuǎn)移性NSCLC患者接受卡鉑和紫杉醇治療并在不同隨訪時(shí)間點(diǎn)監(jiān)測(cè)CTC的結(jié)果。Chinen等在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)平行使用以細(xì)胞角蛋白依賴(lài)性的免疫磁珠分離（上皮抗原依賴(lài)性）方法和ISET方法，結(jié)果顯示免疫磁珠分離技術(shù)在反映患者的臨床情況和療效時(shí)不如ISET可靠。實(shí)際上，雖然免疫磁珠分離方法通過(guò)CTC數(shù)量的減少提示了治療的療效，但I(xiàn)SET（上皮性抗原非依賴(lài)性）反而顯示了CTC數(shù)量有所增加，且后者的結(jié)果與臨床情況惡化、治療無(wú)效相一致。

2.4 其他富集和檢測(cè)方法

為進(jìn)一步提高CTC檢測(cè)的敏感性和特異性，研究者們也對(duì)其他免疫標(biāo)記抗體技術(shù)和新的分子鑒定技術(shù)進(jìn)行了研究。非小細(xì)胞肺癌與其他腫瘤相比存在一些特異性的分子，如NSCLC細(xì)胞表面葉酸受體存在高表達(dá)。于躍等[32]通過(guò)免疫磁珠陰性富集方法捕獲外周血中的CTC，再用腫瘤特異性葉酸配體-寡核苷酸耦合物標(biāo)記捕獲CTC，洗去沒(méi)有結(jié)合的富余耦合物后，洗脫下特異性結(jié)合的耦合物的寡核苷酸用于定量PCR擴(kuò)增分析，捕獲的CTC通過(guò)免疫熒光染色鑒定為腫瘤細(xì)胞。結(jié)果顯示，這一技術(shù)應(yīng)用在153例NSCLC患者中檢測(cè)靈敏度為73.2%，特異度為84.1%。

3 CTC對(duì)肺癌診斷的作用

有研究檢測(cè)了CTC的可行性，并分析了其與肺癌的臨床相關(guān)性。該研究入選了9例接受手術(shù)治療的NSCLC患者，用CellSearch?系統(tǒng)分別檢測(cè)了術(shù)前和術(shù)后患者血液中的CTC，結(jié)果發(fā)現(xiàn)術(shù)前有1例患者CTC為陽(yáng)性，術(shù)后即刻有3例患者CTC為陽(yáng)性，但10天后均變?yōu)殛幮?。且患者中位隨訪14個(gè)月無(wú)腫瘤復(fù)發(fā)，這也和患者CTC的變化相符合[33]。

Hoffman等[35]報(bào)道使用ISET技術(shù)能檢測(cè)到NSCLC術(shù)后患者血液中的CTC。250例患者的血液樣本分別由10名細(xì)胞病理學(xué)家隨機(jī)加樣到濾器上。其中惡性疾病患者、不確定惡性疾病患者及良性疾病患者分別有83%、12%和5%檢測(cè)到了CTC；而作為陰性對(duì)照組的59例健康患者中則沒(méi)有檢測(cè)到CTC。

Hoffman等[36]將利用ISET方法得到的CTC的數(shù)量和患者的術(shù)前評(píng)估指標(biāo)、病理分期及預(yù)后進(jìn)行了相關(guān)性分析。208例血液樣本來(lái)自于手術(shù)的NSCLC患者，39例陰性對(duì)照血樣來(lái)自于健康人。有49%的NSCLC患者檢測(cè)到了CTC，而健康人均未檢測(cè)到CTC。中位隨訪24個(gè)月后發(fā)現(xiàn)，CTC≥50個(gè)/10 m l的NSCLC患者的術(shù)后無(wú)疾病進(jìn)展生存期（progression-free survival，PFS）和OS都相對(duì)較短，且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性意義（P=0.001和P=0.002），以上結(jié)果顯示CTC能提示早期Ⅰ～Ⅱ期患者的高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)[36]。

4 CTC對(duì)肺癌預(yù)后的提示作用

一項(xiàng)研究聯(lián)合CellSearch?和ISET富集并檢測(cè)了210例手術(shù)切除的早期NSCLC患者的CTC。結(jié)果顯示，與CellSearch?相比，ISET具有更好的提示預(yù)后敏感性的特點(diǎn)；而單變量分析和多變量分析的結(jié)果均顯示，可檢測(cè)到CTC（≥2個(gè)/7m l）的患者的PFS顯著短于無(wú)CTC的患者（P＜0.0001）[37]。

Krebs等[38]通過(guò)一項(xiàng)單中心前瞻性研究對(duì)CTC在NSCLC患者中的預(yù)后作用及化療對(duì)CTC的影響進(jìn)行了探討。101例未接受過(guò)化療的Ⅲ～Ⅳ期NSCLC患者通過(guò)CellSearch?檢測(cè)了CTC經(jīng)過(guò)一個(gè)周期標(biāo)準(zhǔn)化療前后的變化。21%的患者在基線狀態(tài)時(shí)CTC＞2個(gè)/7.5 m l。單變量分析結(jié)果顯示，Ⅳ期患者的CTC數(shù)量高于Ⅲ期患者，化療前CTC＜5個(gè)/7.5m l的患者其PFS和OS顯著優(yōu)于CTC≥5個(gè)/7.5 m l者（P＜0.001）。且對(duì)70例患者CTC的一個(gè)周期化療前后變化進(jìn)行多變量分析后發(fā)現(xiàn)，CTC數(shù)量仍然是PFS的獨(dú)立預(yù)后因素（P＜0.001），也是 OS的最重要的預(yù)后因素（P＜0.001）。

有兩項(xiàng)薈萃分析結(jié)果[39-40]都闡述了CTC對(duì)肺癌患者預(yù)后的前瞻性。其中一項(xiàng)薈萃分析的結(jié)果提示，在基線狀態(tài)時(shí)及治療后外周血中存在CTC的患者預(yù)后較差。而且，晚期腫瘤患者更易檢測(cè)到CTC；且CTC的檢出率和治療前患者的T（腫瘤大?。（淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）、M（遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移）分期相關(guān)，也和治療后患者的T分期相關(guān)[39]。

另一項(xiàng)薈萃分析同樣發(fā)現(xiàn)，存在CTC的NSCLC患者的預(yù)后差。該薈萃分析入選了分別使用了多種不同檢測(cè)技術(shù)（RT-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)和CellSearch?等）的20項(xiàng)研究。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示CTC和腫瘤大小、淋巴結(jié)受累情況及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況相關(guān)，但和組織學(xué)類(lèi)型無(wú)關(guān)。而且，CTC陽(yáng)性的NSCLC患者的PFS（P＜0.0001）和OS（P＜0.0001）均較CTC陰性的患者差[40]。

上述研究的結(jié)果提示，盡管CTC在分離方面尚存在一些問(wèn)題，但隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷進(jìn)步，使得CTC可能成為判斷NSCLC預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)。

5 CTC分子學(xué)檢測(cè)對(duì)于肺癌靶向治療的指導(dǎo)意義

目前，NSCLC患者的初始治療方案主要根據(jù)EGFR突變和ALK重排的檢測(cè)結(jié)果來(lái)制定。這些突變結(jié)果可以預(yù)測(cè)患者對(duì)EGFR酪氨酸激酶抑制劑和ALK抑制劑的敏感性。但是，在晚期NSCLC中，通過(guò)活檢取得的少量腫瘤組織有時(shí)并不夠用于進(jìn)行分子學(xué)檢測(cè)。而通過(guò)檢測(cè)CTC上存在的一些特殊蛋白并確定相關(guān)基因突變類(lèi)型和分子特征，可有助于制定NSCLC的治療策略和檢測(cè)治療療效。

Maheswaran等[41]對(duì)比分析了分別利用轉(zhuǎn)移性NSCLC患者CTC上的DNA和相應(yīng)的血漿中循環(huán)腫瘤DNA（circulating tumor DNA，ctDNA）進(jìn)行分子檢測(cè)的可行性，并采用以過(guò)濾為基礎(chǔ)的使用Ep-CAM包被抗體的CTC芯片（CTC-chip）技術(shù)。試驗(yàn)共分離了27例患者的CTC，并對(duì)其中12例患者的CTC進(jìn)行了分子學(xué)分析。EGFR突變檢測(cè)使用蝎形探針擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)法，或標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序法或兩種方法聯(lián)合檢測(cè)。除1例外，其他所有預(yù)測(cè)是陽(yáng)性結(jié)果的患者（92%）的血液中都檢測(cè)到了EGFR活性突變，包括那些接受了EGFR酪氨酸激酶抑制劑治療的和含有T790M突變的患者。但是，使用以上方法學(xué)來(lái)評(píng)估EGFR突變狀態(tài)尚需進(jìn)一步的確認(rèn)，而分析ctDNA中的基因組學(xué)改變則有望成為將來(lái)檢測(cè)EGFR突變的新途徑。

Punnoose等[42]在34例轉(zhuǎn)移性NSCLC患者中研究了使用游離CTC進(jìn)行生物標(biāo)記物檢測(cè)的可行性，發(fā)現(xiàn)通過(guò)免疫熒光法可以準(zhǔn)確地測(cè)定24份CTC＞3個(gè)/7.5m l全血樣本中的EGFR表達(dá)。Punnoose等[43]還發(fā)現(xiàn)用免疫熒光法分析EGFR突變表達(dá)及用定量的RT-PCR（qPCR）法對(duì)最常見(jiàn)的基因（AKT1、BRAF、EGFR、KRAS、NRAS、PIK3CA）改變進(jìn)行突變分析有助于CTC和ctDNA的檢測(cè)。根據(jù)CTC和ctDNA檢測(cè)到的EGFR突變結(jié)果和相應(yīng)的腫瘤組織的檢測(cè)結(jié)果相吻合，也進(jìn)一步確認(rèn)了利用CTC進(jìn)行突變檢測(cè)的可行性；但是，該研究也顯示，ctDNA的敏感性要高于CTC。

Ran等[44]報(bào)道了一項(xiàng)使用單個(gè)CTC來(lái)檢測(cè)EGFR突變的新技術(shù)。為優(yōu)化這種方法，來(lái)自NSCLC NCI-H1975細(xì)胞系（包含EGFR雙突變：L858R和T790M）的10個(gè)細(xì)胞被加入到7.5 m l的全血中，使用標(biāo)記有抗白細(xì)胞表面抗原抗體的磁珠陰性富集細(xì)胞，隨后評(píng)估EGFR突變狀態(tài)。CTC的富集和其上皮標(biāo)記物表達(dá)水平無(wú)關(guān)，腫瘤細(xì)胞在切片上鋪開(kāi)后通過(guò)激光細(xì)胞顯微解剖技術(shù)進(jìn)行分離。將切片上的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，拍照，并用337 nm的激光束進(jìn)行單獨(dú)的顯微解剖，然后將腫瘤細(xì)胞放入細(xì)胞溶解液中，隨后進(jìn)行DNA基因擴(kuò)增和PCR測(cè)序。95%的CTC產(chǎn)生PCR擴(kuò)增子，85%可以確認(rèn)有L858的突變，45%可以確認(rèn)有T790M突變。來(lái)自5個(gè)病例的數(shù)據(jù)初步確認(rèn)了在NSCLC患者中使用這種方法的可行性，但是還需要行進(jìn)一步的研究來(lái)確認(rèn)這些結(jié)果的可重復(fù)性，并需進(jìn)一步的深入探討。

Pailler等也研究了利用CTC檢測(cè)ALK重排狀態(tài)的最佳敏感性和特異性[45]。結(jié)果提示，在18例ALK陽(yáng)性的NSCLC患者中篩查EML4-ALK融合基因是確實(shí)可行的。研究使用ISET方法富集CTC后在濾器上直接進(jìn)行原位熒光雜交。所有組織標(biāo)本中ALK陽(yáng)性患者通過(guò)在CTC上均檢測(cè)到了ALK重排，而在14例ALK陰性患者中僅1例在CTC上檢測(cè)到ALK重排。

為進(jìn)一步改善所富集的CTC的分子特征，增加CTC對(duì)診斷的幫助，并以此為根據(jù)來(lái)選擇治療手段，可能需要對(duì)擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物應(yīng)用下一代測(cè)序（NGS）技術(shù)。NGS技術(shù)結(jié)合傳統(tǒng)的一代測(cè)序技術(shù)（如Sanger），可望實(shí)現(xiàn)利用單個(gè)細(xì)胞和ctDNA來(lái)檢測(cè)單個(gè)核苷酸突變或同時(shí)檢測(cè)更多的基因改變的想法[46-47]。

6 CTC對(duì)于療效的預(yù)測(cè)作用

很多研究都提示CTC計(jì)數(shù)可預(yù)測(cè)NSCLC治療的療效。但是，它和治療反應(yīng)的相關(guān)性是否可靠，首先取決于CTC檢測(cè)方法的可靠性。在治療的不同時(shí)間點(diǎn)，CTC數(shù)量會(huì)出現(xiàn)和療效相關(guān)的動(dòng)態(tài)變化，且這種變化所提示的療效應(yīng)該和治療的臨床療效、實(shí)驗(yàn)室判定的客觀療效相符合。以此為終點(diǎn)，很多研究都顯示了接受化療的患者隨訪期間的CTC變化可能比標(biāo)準(zhǔn)的影像學(xué)技術(shù)（如CT和PET等）能提供更多相關(guān)療效的信息。

Hirose等[48]的前瞻性研究評(píng)估了33例接受吉西他濱和卡鉑化療的轉(zhuǎn)移性NSCLC患者的CTC計(jì)數(shù)變化和化療療效之間的相關(guān)性。CTC的檢測(cè)采用CellSearch?方法，臨界值為≥1個(gè)/7.5 m l。研究顯示36.4%的患者CTC陽(yáng)性，15.2%的患者基線時(shí)CTC數(shù)量≥5個(gè)/7.5m l。結(jié)果提示，CTC陽(yáng)性患者和CTC陰性患者之間的化療療效無(wú)顯著差別，但是CTC陽(yáng)性患者中出現(xiàn)腫瘤進(jìn)展的比例（66.7%）顯著高于CTC陰性者（23.8%），且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.02）。

一項(xiàng)多中心Ⅱ期臨床研究觀察了41例接受厄洛替尼和帕妥珠單抗治療的晚期NSCLC患者在治療期間CTC變化對(duì)影像學(xué)療效及臨床療效的預(yù)測(cè)意義，使用CellSearch?檢測(cè)CTC[43]。結(jié)果顯示，大部分患者（78%）都存在CTC，在基線時(shí)幾乎有一半患者（42%）的CTC≥5個(gè)/7.5m l。其中高基線CTC和治療療效之間存在相關(guān)性（P=0.019）。而且，治療后CTC的下降和更長(zhǎng)的PFS相關(guān)（P= 0.05）。

另一項(xiàng)關(guān)于37例接受多西他賽和吉西他濱治療的晚期NSCLC患者的CTC改變和臨床療效之間的相關(guān)性的研究也使用CellSearch?檢測(cè)CTC，臨界值為≥2個(gè)/7.5 m l，結(jié)果顯示：24%的患者基線時(shí)CTC≥2個(gè)/7.5 m l。治療2個(gè)月后（第3個(gè)周期化療前）CTC陽(yáng)性者具有更長(zhǎng)的PFS（中位9.4個(gè)月）和OS（中位4.3個(gè)月），但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[49]。

Muinelo-Romay等[50]報(bào)道了CTC在43例晚期NSCLC患者中的預(yù)后價(jià)值及其在監(jiān)測(cè)化療療效時(shí)的作用?；颊叻謩e在基線狀態(tài)、第2個(gè)周期及第5個(gè)周期進(jìn)行含鉑聯(lián)合化療前連續(xù)采血，用CellSearch?檢測(cè)CTC，并主要計(jì)數(shù)形態(tài)上完整的CTC。其中CTC≥5個(gè)/7.5 m l的患者具有較低的中位PFS（4.1個(gè)月）和中位OS（4.6個(gè)月），而CTC＜5個(gè)/7.5m l的患者的中位PFS和中位OS分別為7.6個(gè)月和10.7個(gè)月，大部分患者在第2個(gè)周期化療時(shí)CTC水平有明顯下降，這提示CTC可預(yù)測(cè)患者接受治療后的總體療效，也提示CTC在治療過(guò)程中有提示治療是否起效的作用。

7 小結(jié)

大量研究已經(jīng)顯示CTC在提示NSCLC的腫瘤分期和轉(zhuǎn)移發(fā)生中有顯著作用，因此，將CTC檢測(cè)轉(zhuǎn)化到臨床實(shí)踐中并進(jìn)一步改善標(biāo)準(zhǔn)化的CTC檢測(cè)技術(shù)有重要意義。CTC可能成為臨床上提示肺癌預(yù)后的重要因素，并可以在NSCLC患者的治療期間通過(guò)反復(fù)取樣來(lái)監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展。利用CTC檢測(cè)腫瘤的分子標(biāo)志物，也可為靶向治療提供依據(jù)。

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R734.2

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2015.13.04.05

#通信作者（corresponding author），e-mail：zhanglipum ch@aliyun.com

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