宋曙輝，趙 霖，曾海玲，鄒海明，李 珍，王文琪(.國家蔬菜工程技術(shù)研究中心，北京00097;.解放軍總醫(yī)院營養(yǎng)科微量元素研究室，北京0085;.云南普洱玉龍茶葉有限公司，云南普洱665000)

普洱茶是云南特色茶種。普洱熟茶是經(jīng)大葉曬青茶渥堆后發(fā)酵獲得，含有茶褐素、茶多酚、茶多糖等多種功能成分。目前，對普洱茶功能的研究日益增多，多集中在普洱茶的降脂、減肥、控制體重等功能方面［1－6］;其他對普洱茶功能的研究還包括抗氧化、預(yù)防非酒精性脂肪肝、預(yù)防腫瘤等方面［7－11］。近年，為了推廣普洱茶，許多企業(yè)不斷對普洱茶產(chǎn)品進(jìn)行深度開發(fā)，目前市場上銷售的易攜帶、飲用方便的茶濃縮提取物或速溶茶粉就是其中之一［12］。普洱茶濃縮提取物是經(jīng)特殊工藝發(fā)酵提取的普洱茶萃取物，其中含有豐富的茶褐素、茶多酚，不僅具有普洱茶本身的風(fēng)味特色，而且將茶葉中有效成分加以富集，是一種具有發(fā)展?jié)摿Φ钠斩栊滦彤a(chǎn)品。筆者以普洱茶濃縮提取物為材料，按一定劑量給生長期大鼠灌胃，觀察其對生長期大鼠的營養(yǎng)生理作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 供試普洱茶為熟茶。供試普洱茶濃縮提取物(PCE)由云南普洱玉龍茶葉有限公司提供。將普洱茶濃縮提取物按比例溶于常溫蒸餾水中，配成不同比例的普洱茶溶液，置4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物分組及飼養(yǎng) 供試雄性SD大鼠由軍事科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證編號(hào)SCXK(軍)2012-004。40只大鼠平均體重(70.0±2.4)g，隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為對照組(蒸餾水)、低劑量組(270 mg/kg)、中劑量組(540 mg/kg)和高劑量組(1 080 mg/kg)。在空調(diào)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，在全塑代謝籠內(nèi)單獨(dú)喂養(yǎng)，采用對喂法(保證試驗(yàn)周期內(nèi)每只大鼠食物平均攝入量相等)，自由飲用蒸餾水。環(huán)境參數(shù)為:溫度(23±1)℃，相對濕度60% ±5%，12 h晝夜交替。在大鼠飼養(yǎng)6周后禁食12 h，麻醉后剪股動(dòng)脈取血，分別取肝素抗凝血、非抗凝血，非抗凝血3 000 r/min離心分離血清，凍存?zhèn)溆?。同時(shí)，對肝、腎、腦、脾、脂肪組織稱重。

1.3 檢測指標(biāo)與方法

1.3.1 血清生化指標(biāo)測定。將未抗凝血3 000 r/min離心20 min，分離出血清，24 h內(nèi)用Hitachi7600全自動(dòng)生化分析儀檢測。檢測項(xiàng)目包括總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、葡萄糖(GLU)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、總膽固醇(TC)、和甘油三酯(TG)、瘦素(Leptin)等。

1.3.2 血常規(guī)測定。取肝素抗凝全血，用MEK-6318K全自動(dòng)血球分析儀測定。檢測項(xiàng)目包括紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)、血小板(PLT)、紅細(xì)胞體積(HCT)、血紅蛋白(HGB)、平均紅細(xì)胞容積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)等。

1.3.3 Lee’s指數(shù)、脂肪指數(shù)。計(jì)算公式為:

Lee’s指數(shù) =1/3(體重 ×1 000)/體長

脂肪指數(shù)=腹腔脂肪質(zhì)量/體重×100

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。用CHISS高智統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行方差分析。各組分別進(jìn)行正態(tài)性和方差齊性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布和方差齊性的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，否則進(jìn)行Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 普洱茶濃縮提取物對大鼠體重、攝食量及各主要臟器重量的影響 由表1、表2可知，在試驗(yàn)期間，各組大鼠攝食量相等，精神狀態(tài)良好，行動(dòng)敏捷，體毛光亮順滑，毛色正常。隨著生長發(fā)育，大鼠攝食量增加，體重增加。在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，試驗(yàn)組大鼠與對照組大鼠體重有顯著差異(P＜0.05)，而且大鼠體重隨普洱茶的攝入量的增加而減輕。各試驗(yàn)組與對照組間脂肪指數(shù)均有明顯差異，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理存在顯著性差異(P＜0.05)。大鼠腦指數(shù)隨茶濃縮物攝入增加而增加，也有顯著性差異(P＜0.05)。各組間肝、腎、脾等臟器指數(shù)未見顯著差異(P＞0.05)。大鼠的食物轉(zhuǎn)化率與體重呈正比。

另外，在灌胃剛開始6 d，各組大鼠體重已開始出現(xiàn)較大的變化;到飼喂第16天，試驗(yàn)組與對照組間出現(xiàn)顯著差異;到試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對照組大鼠體重比試驗(yàn)組平均增加7～19 g。試驗(yàn)組大鼠腹部脂肪量大幅度下降，表明普洱茶在控制大鼠的體重增長、體內(nèi)脂肪蓄積以及控制肥胖指數(shù)的增加方面都發(fā)揮顯著的作用。

表1 各組大鼠生長期間體重變化及食物轉(zhuǎn)化率g

表2 普洱茶濃縮提取物對大鼠臟器指數(shù)的影響

2.2 血常規(guī)測定結(jié)果 由表3可知，不同劑量普洱茶濃縮提取物的攝入對大鼠血液學(xué)指標(biāo)沒有明顯的影響;低劑量組大鼠白細(xì)胞、血小板稍有降低，中劑量組大鼠的紅細(xì)胞和血紅蛋白稍有降低。

表3 大鼠血常規(guī)檢測結(jié)果

2.3 血清生化檢測結(jié)果 由表4、5可知，試驗(yàn)組大鼠血清中總蛋白、白蛋白和球蛋白均比對照組顯著增加(P＜0.05)。試驗(yàn)組大鼠血糖比對照組降低，雖然統(tǒng)計(jì)學(xué)處理未見顯著差異(P＞0.05)，但是顯示普洱茶濃縮提取物攝入后對血糖產(chǎn)生生理性的控制。這說明普洱茶提取物有非常安全的營養(yǎng)生理效果。經(jīng)測定，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組大鼠血清中尿素含量略有升高，高劑量組大鼠尿酸水平與對照組之間存在顯著性差異(P＜0.05)。

在臨床營養(yǎng)學(xué)評價(jià)中，常用血清中總蛋白、白蛋白等基礎(chǔ)蛋白水平來判斷機(jī)體營養(yǎng)狀況。白蛋白不僅是脂肪酸、激素、氨基酸和微量元素鋅的載體蛋白，具有轉(zhuǎn)運(yùn)功能、營養(yǎng)功能，而且能清除體內(nèi)新陳代謝產(chǎn)生的有害物質(zhì)——過氧化脂質(zhì)等。由此可知，攝入普洱茶沒有影響大鼠體內(nèi)蛋白質(zhì)的營養(yǎng)狀況，而且還有促進(jìn)作用。

在反應(yīng)血脂水平的參數(shù)中，試驗(yàn)組大鼠的甘油三酯與低密度脂蛋白含量均呈現(xiàn)降低趨勢，而高密度脂蛋白水平顯著增加(P＜0.05)，高密度脂蛋白與低密度脂蛋白的比值也呈增大的趨勢。這些變化都是有利于健康的。試驗(yàn)組大鼠血清中瘦素含量顯著增加(P＜0.05)，而且反映抗動(dòng)脈硬化效果的抗動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)(AAI)增加，而致動(dòng)脈硬化的致動(dòng)脈粥樣硬化(AI)指標(biāo)降低，都表明普洱茶對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)脂肪代謝發(fā)揮積極的作用。但是，在膽固醇調(diào)節(jié)方面，普洱茶沒有表現(xiàn)出明顯的作用。

瘦素作為脂肪組織分泌的一種蛋白質(zhì)激素，由肥胖基因(ob)編碼，作用于下丘腦的體重調(diào)節(jié)中樞，可抑制食欲，增加能量消耗，調(diào)節(jié)脂肪代謝，在脂肪存儲(chǔ)過程中發(fā)揮著很重要的作用［13］。試驗(yàn)中，普洱茶的攝入增加了血清瘦素含量，由此推測普洱茶可能有促進(jìn)瘦素分泌的作用。普洱茶控制體重、體脂的作用可能與此機(jī)理有關(guān)。

表4 大鼠血生化指標(biāo)檢測結(jié)果

表5 大鼠血脂測定結(jié)果

2.4 氮代謝試驗(yàn)結(jié)果 由表6可知，試驗(yàn)組大鼠糞便的濕重、含水量與對照組之間都未見差異(P＞0.05)，但是試驗(yàn)組糞便的干重卻顯著高于對照組(P＜0.05)，而且糞便的干重隨普洱茶攝入量增加而增加。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組大鼠糞氮的排出量顯著高于對照組(P＜0.05)。眾所周知，糞便的干重與糞便中生態(tài)菌群的數(shù)量有關(guān)。研究證明，動(dòng)物糞氮的80%是來自腸道的細(xì)菌。在所有普洱茶試驗(yàn)組動(dòng)物糞便中，氮含量的增加無疑有細(xì)菌來源的氮的貢獻(xiàn)。普洱茶試驗(yàn)組大鼠糞便中的脂肪排泄量均顯著高于對照組(P＜0.05)。這有力地證明攝入普洱茶后對試驗(yàn)動(dòng)物機(jī)體脂肪代謝產(chǎn)生不可忽視的影響，大大促進(jìn)了體內(nèi)脂肪的排出。各試驗(yàn)組大鼠腹部脂肪均大幅度減少的試驗(yàn)結(jié)果也證明了這一點(diǎn)。

機(jī)體氮平衡反映的是機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝的狀況。在大鼠生長發(fā)育期，由于蛋白質(zhì)的合成代謝超過分解代謝，一般表現(xiàn)為正氮平衡。在生長期內(nèi)，各組大鼠氮代謝均處于正氮平衡狀態(tài)，尿氮含量各組間無顯著差異(P＞0.05)。試驗(yàn)中，各組飼料均能夠滿足生長期大鼠機(jī)體發(fā)育過程中對蛋白質(zhì)的需求。

表6 5 d代謝試驗(yàn)中氮平衡情況

3 討論

體重超重、肥胖、血脂異?？梢砸鸲喾N慢性非傳染性疾病的發(fā)生，如心腦血管疾病等。因而，控制體重、減肥、保持血脂正常，可以有效預(yù)防相關(guān)疾病的發(fā)生。已開展的關(guān)于普洱茶的研究多集中于其減肥降脂功能，分別從分子、蛋白質(zhì)、細(xì)胞等水平上闡述其可能的減肥機(jī)理。郭少晨等［6］研究發(fā)現(xiàn)，普洱茶具有抑制高脂血癥大鼠肝臟中鯊烯合成酶活性的作用，可以上調(diào)肝臟中LDLR mRNA的表達(dá)和HepG2細(xì)胞中LDLR蛋白的表達(dá)，從而降低血漿中膽固醇和LDL的含量。叢濤等［14］曾對普洱生茶和熟茶進(jìn)行了營養(yǎng)生理研究。研究結(jié)果表明，普洱茶能夠生理性控制正常大鼠的體重增長，顯著降低體內(nèi)甘油三酯水平，降低腹部脂肪積累，有明顯的減肥降脂功效。普洱茶熟茶的減肥降脂效果優(yōu)于普洱茶生茶，但是對正常大鼠的膽固醇代謝沒有明顯影響。這與該次實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果相符合。

有研究表明，HDL-C水平降低與冠心病發(fā)病率、死亡率相關(guān)。低水平的HDL可增加甘油三酯和脂蛋白殘粒，促使小顆粒LDL的生成，引起血栓和高血壓。HDL可直接參與拮抗動(dòng)脈粥樣硬化形成［15－16］。在該項(xiàng)試驗(yàn)中，試驗(yàn)組大鼠的HDL-C均顯著高于對照組，而試驗(yàn)組的甘油三酯降低。這表明普洱茶在預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病等方面具有的潛在作用。

研究中，普洱茶的降脂減肥作用表現(xiàn)為體重的下降，腹部脂肪減少，肥胖指數(shù)降低，糞便脂肪排出量增加。血清瘦素增加，表明普洱茶濃縮提取物顯著影響大鼠體內(nèi)脂肪的代謝。糞便干重的增加，表明腸道菌群數(shù)量及代謝產(chǎn)物的增加。但是，通過普洱茶的攝入是否可以改善腸道菌群的結(jié)構(gòu)，有待今后的試驗(yàn)中加以驗(yàn)證。研究還發(fā)現(xiàn)，普洱茶濃縮提取物可以在生理水平上調(diào)節(jié)生長中大鼠血糖水平，降低血糖的含量。

綜上所述，普洱茶熟茶的濃縮提取物可以控制生長期大鼠的體重，并且控制肥胖指數(shù)的增加，有效降低生長期大鼠腹部脂肪的積累，增加血清中瘦素含量，有效降低生長期大鼠血液中甘油三酯水平，特別是增加高密度脂蛋白的水平，從而有效地提高試驗(yàn)組大鼠的抗動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)，降低致動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)。因而，適時(shí)、適量地?cái)z入普洱茶，可以達(dá)到降低血脂、控制體重，并且延緩動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展進(jìn)程的功效。

［1］陳沛，王雪青，宋文軍.普洱茶色素減肥作用的研究［J］.食品研究與開發(fā)，2011，32(7):169 －171.

［2］郭韋韋，徐湘婷，羅紹忠，等.普洱茶預(yù)防SD大鼠肥胖功效評價(jià)與研究［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2011，29(9):1994 －1996.

［3］王秋萍，龔加順."紫鵑"普洱茶茶褐素對高脂飲食大鼠生長發(fā)育的影響［J］.茶葉科學(xué)，2012，32(1):87 －94.

［4］董業(yè)偉，邵宛芳，李智，等.普洱茶對小鼠體重的控制作用研究［J］.食品研究與開發(fā)，2012，33(12):187 －190.

［5］葉小燕.黑茶減肥作用及其機(jī)理研究［D］.長沙:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

［6］郭少晨，劉洪娟，朱迪娜，等.普洱茶對高脂血癥大鼠膽固醇代謝的影響及作用機(jī)制［J］.中國科學(xué):生命科學(xué)，2012，42(11):883 －892.

［7］WAY T D，LIN HY，KUO D H，et al.Pu-erh tea attenuates hyperlipogenesis and induces hepatoma cells growth arrest through activating AMP－activated protein Kinase(AMPK)in human HepG2 cells［J］.Agric Food Chem，2009，57(12):5257 －5264.

［8］CHU S L，F(xiàn)U H，YANG J X，et al.A Randomized double-blind placebocontrolled study of Pu’er tea extract on the regulation of metabolic syndrome［J］.Chin J Integr Med，2011，17(7):492-498.

［9］李春磊，王宣軍，宋爽，等.普洱茶水提物對巨噬細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子 α-的影響［J］.中國生物制品學(xué)雜志，2011，24(11):1293 －1302.

［10］肖凱，朱晟易，童鈺玲，等.普洱茶水提取物對大鼠非酒精性脂肪肝病的干預(yù)作用［J］.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，35(18):1992 －1995.

［11］劉家奇，邵宛芳，董業(yè)偉，等.普洱茶(熟茶)茶粉、黑茶茶粉、六堡茶對非酒精性脂肪肝大鼠細(xì)胞CYPZE1表達(dá)的影響［J］.胃腸病學(xué)，2013，18(7):411－415.

［12］伍崗，蒲紹柳，張艷梅.云南速溶茶發(fā)展?jié)摿Τ跆剑跩］.云南科技管理，2010(3):15－16.

［13］WEIGLE D S，CUMMINGS D E，PATRICIA D，et al.Roles of leptin and ghrelin in the loss of body weight caused by a low fat，high carbohydrate diet［J］.J Clin Endocrinol Metab，2003，88(4):1577 －1586.

［14］叢濤，趙霖，鮑善芬，等.普洱茶生茶與熟茶對大鼠營養(yǎng)生理功能的影響［J］.食品科技，2010，35(4):66 －70.

［15］KARPPI J，NURMI T，KURL S，et al.Lycopene，lutein and beta-carotene as determinants of LDL conjugated dienes in serum［J］.Atherosclerosis，2010，209:565 －572.

［16］KOH W P，YUAN J M，WANG R，et al.Plasma carotenoids and risk of acute myocardial infarction in the singapore chinese health study［J］.Nutr Metab Cardiovasc Dis，2011，21:685－690.