徐云飛,王贈超,鄒玲,李文立,任慧英(青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院,山東青島266109)
山東省地處沿海地區(qū),其得天獨厚的地理和氣候條件,加上發(fā)達(dá)的畜禽養(yǎng)殖業(yè)和豐富的海洋漁業(yè)資源,為水貂養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展提供了堅實的基礎(chǔ),使山東省成為全國水貂養(yǎng)殖的大省。據(jù)海關(guān)貿(mào)易總署統(tǒng)計,全國平均年產(chǎn)水貂皮1 200萬張,其中山東省占2/3。目前,在山東省沿海地區(qū)和家禽養(yǎng)殖大縣,水貂養(yǎng)殖業(yè)已經(jīng)成為農(nóng)民增收的主要手段,成為當(dāng)?shù)亟?jīng)濟(jì)發(fā)展和農(nóng)民致富的支柱產(chǎn)業(yè)[1-2]。然而,由于養(yǎng)殖密度過大、疾病防疫意識淡薄等原因,水貂傳染病不斷發(fā)生,給水貂養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。筆者對某水貂場的病死水貂進(jìn)行病原的分離、鑒定及藥敏試驗,以期避免抗菌藥的濫用,減少耐藥菌株的產(chǎn)生,為臨床治療提供理論依據(jù)。
1.1 病料 病料來自山東威海某水貂養(yǎng)殖場病死水貂。
1.2 試劑與儀器 普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基,均購自北京路橋技術(shù)有限責(zé)任公司;微量糖發(fā)酵管和藥敏紙片,均購自杭州天和微生物試劑有限公司。
1.3 細(xì)菌的分離培養(yǎng) 無菌條件下,取病死水貂心臟、肝臟、肺臟等病料劃線接種于普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基上,37℃下培養(yǎng)24 h。挑取單個菌落進(jìn)行革蘭氏染色后,置于顯微鏡下進(jìn)行鏡檢。
1.4 細(xì)菌的生化鑒定 挑取單菌落分別接種于微量糖發(fā)酵管、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基,對疑似腸桿菌科的細(xì)菌,按照常規(guī)方法進(jìn)行吲哚、MR、VP及檸檬酸鹽利用試驗(簡稱IMViC試驗)[3]。
1.5 藥敏試驗 將純化的菌落接種于普通肉湯,37℃搖床培養(yǎng)12 h。將新鮮菌液用滅菌生理鹽水稀釋至濃度108CFU/ml,用滅菌的棉棒涂布于普通瓊脂平板。然后,將18種藥敏紙片貼在培養(yǎng)基的表面,37℃培養(yǎng)18 h后觀察結(jié)果[4],按照 CLSL 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行藥物敏感性評價[5]。
表1 各分離菌株的生化試驗結(jié)果及檢出率
2.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)及鑒定結(jié)果 由表1可知,在病死水貂中共分離到7種細(xì)菌,共17株,菌落形態(tài)、染色特性及生化試驗表明全部為革蘭氏陰性菌,隸屬腸桿菌科。其中,分離率最高的細(xì)菌為大腸桿菌(59%),其次為哈夫尼菌(12%);另外,還分離到耶爾森菌、成團(tuán)泛菌、志賀氏菌、沙門氏菌和克雷伯菌,占分離菌株的29%。在麥康凱培養(yǎng)基上,大腸桿菌和克雷伯菌形成紅色菌落,但克雷伯菌的菌落粘稠,用接種環(huán)可挑起絲狀物,另外也不能利用蔗糖。哈夫尼菌、耶爾森、成團(tuán)泛菌、志賀氏菌和沙門氏菌均不能利用乳糖,所以在麥康凱培養(yǎng)基上均形成無色菌落,在三糖鐵培養(yǎng)基上的表現(xiàn)及IMViC試驗結(jié)果均存在差異。
2.2 藥敏試驗結(jié)果 從表2可以看出,70%以上的菌株對頭孢派酮、頭孢西叮、頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢吡肟、左氧沙星和磷霉素敏感,23%以上的菌株對頭孢哌酮、阿米卡星的敏感性處于中介,30%以上的菌株對頭孢噻吩、頭孢呋辛、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、鏈霉素、氯霉素、四環(huán)素和氨芐西林耐藥。所有分離菌株對頭孢西叮、頭孢他啶和頭孢吡肟均敏感。
表2 藥敏試驗結(jié)果
目前臨床上治療水貂細(xì)菌性疾病的藥物有很多,但由于養(yǎng)殖戶長期濫用抗生素,使細(xì)菌的耐藥性不斷增加,造成水貂患病后缺乏有效藥物,甚至無藥可用。該試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)從病死水貂體內(nèi)分離出的7種細(xì)菌對15種抗生素均產(chǎn)生了一定程度的耐藥性。同時試驗結(jié)果也表明,同一種細(xì)菌不同菌株的耐藥性也不相同。這與細(xì)菌表達(dá)的多樣性有關(guān)[6]。因此,同一種細(xì)菌引發(fā)的感染用相同的藥物治療,治療效果可能會差別很大,一旦出現(xiàn)治療無效的情況應(yīng)立即進(jìn)行藥敏試驗,篩選敏感藥物,加以治療。但是,由于細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生與抗生素的長期大劑量使用有關(guān),在臨床治療中應(yīng)選擇比較敏感的藥物聯(lián)合或交替使用,以減少單個藥物的使用劑量和使用時間,從而減緩耐藥菌株的產(chǎn)生[7]。
水貂細(xì)菌病的發(fā)生是由多種病原引起的。對某水貂養(yǎng)殖場進(jìn)行了連續(xù)檢測,共分離到7種細(xì)菌,均為腸桿菌科細(xì)菌,說明腸桿菌科的細(xì)菌是目前水貂細(xì)菌病發(fā)生的主要病原。腸桿菌科細(xì)菌中,沙門氏菌、志賀氏菌、克雷伯菌、大腸桿菌和耶爾森菌對人和動物具有廣泛的致病性[8],具有重要的公共衛(wèi)生意義,應(yīng)引起足夠重視。哈夫尼菌和成團(tuán)泛菌大多為條件致病菌,水貂患此類細(xì)菌病與水貂的抵抗力降低有直接關(guān)系[9-10]。在氣候突變、管理不當(dāng)時,水貂抵抗力下降,環(huán)境中和體內(nèi)的條件性致病菌容易入侵機(jī)體,引起疾病的發(fā)生,但一般不會造成大面積流行。
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