張榮軒陳文星陸大杰張 怡

（1 河南九福來科技股份有限公司，河南 鄭州 450002；2 常州大學制藥與生命科學學院，江蘇 常州 213161；3 南京中醫(yī)藥大學，江蘇 南京 210023）

純酰素激活免疫作用的研究

張榮軒1，2陳文星3陸大杰1張 怡1

（1 河南九福來科技股份有限公司，河南 鄭州 450002；2 常州大學制藥與生命科學學院，江蘇 常州 213161；3 南京中醫(yī)藥大學，江蘇 南京 210023）

目的研究蘆薈多糖成分純酰素對免疫功能的影響。方法利用單核巨噬細胞實驗考察純酰素對巨噬細胞吞噬功能的影響；應用環(huán)磷酰胺造成小鼠免疫低下考察純酰素對白細胞水平的影響；應用小鼠溶血素抗體生成實驗考察純酰素對抗體生成的影響。結(jié)果純酰素100 mg/kg和200 mg/kg可明顯促進單核巨噬細胞的吞噬能力，同時可增強由環(huán)磷酰胺引起的免疫低下，升高免疫低下小鼠的白細胞水平。純酰素50、100、200 mg/kg可促進小鼠的溶血素抗體生成。結(jié)論純酰素可明顯增強單核巨噬細胞的吞噬能力，升高免疫低下小鼠的白細胞水平，促進小鼠的抗體生成，增強機體的體液免疫作用。

純酰素；單核巨噬細胞；白細胞；溶血素抗體

蘆薈，原產(chǎn)于地中海、非洲，為百合科多年生草本植物。具有殺菌，抗炎，免疫，解毒，消腫之功效。蘆薈中的主要物質(zhì)成分有蒽醌類、多糖類、維生素類、礦物質(zhì)類、活性酶類、纖維類。其中蘆薈多糖類物質(zhì)被公認為是蘆薈中活性最好的一類。蘆薈多糖經(jīng)過進一步分離純化后，發(fā)現(xiàn)其組成主要為乙酰化甘露聚糖[1-3]。乙?；事毒厶且呀?jīng)被世界公認在植物中最好的多糖類物質(zhì)，它是蘆薈中獨有的活性物質(zhì)。乙酰化甘露聚糖并不是都能為人體吸收，科學家在對比不同分子量的吸收率后，將最容易被吸收部分再次分離濃縮，所得即稱之為純酰素。純酰素大約只占到乙?；事毒厶强偭康?5%～80%。研究中發(fā)現(xiàn)，純酰素也有很強的免疫促進作用。本文即對純酰素展開免疫功能研究，考察其對特異性和非特異性免疫的影響。

1 材料與方法

1.1 動物：雌性ICR小鼠，體質(zhì)量18～22 g，由南通大學實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（蘇）2008～0010。

1.2 試劑：純酰素，注射粉針形式，呈淡棕色，規(guī)格：每瓶含可溶性純酰素成分0.75 g。給藥時直接用注射用無菌生理鹽水溶解，并稀釋成所用濃度。環(huán)磷酰胺（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司），臺盼藍，無水乙醇（A.R），EDTA-2Na鹽（北京鼎國生物技術(shù)發(fā)展中心），RPMI-1640（GibcoBRL），小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司），Trypsin（Amresco 2430B18）。

1.3 小鼠單核巨噬細胞吞噬功能：取ICR小鼠80只，雄性，隨機分為8組，分別為對照組（ip等體積生理鹽水）、純酰素低劑量組（50 mg/kg）、純酰素中劑量組（100 mg/kg）、純酰素高劑量組（200 mg/kg）、靈芝多糖組，給藥10 d后，小鼠每10 g體質(zhì)量尾靜脈注射（1/3）稀釋的印度墨汁0.1 mL，立即計時，并分別于2、10 min眼眶取血25 μL，加入2 mL 0.1%碳酸鈉，于核酸蛋白分析儀600 nm處測定OD值，并稱取肝，脾重量，按公式計算吞噬指數(shù)（A）。

A=K1/3×體質(zhì)量/（肝重+脾重）

K=（logOD1-logOD2）/（T2-T1）

小鼠免疫低下模型：取ICR小鼠60只，雌雄各半，隨機分為6組，①正常組（ip生理鹽水）；②模型組（ip生理鹽水）；③④⑤純酰素（50、100、200 mg/kg）；⑥靈芝多糖組，各組連續(xù)給藥。第7天后，除正常組外，其余各組均腹腔注射環(huán)磷酰胺（10 mg/kg），連續(xù)3 d。給藥第10天后，小鼠眼眶后靜脈叢取血，EDTA抗凝，測定其RBC、WBC、HB、PLT等血液指標，分析結(jié)果并統(tǒng)計。

1.4 小鼠溶血素抗體生成

1.4.1 試劑配制：Alsever’s溶液：葡萄糖2.05 g，檸檬酸鈉0.80 g，氯化鈉0.42 g，蒸餾水100 mL，無菌過濾。都氏試劑：NaHCO3 1.0 g，KCN 0.05 g，K3Fe（CN）6 0.2 g，蒸餾水1000 mL。補體的制備：取300 g左右的豚鼠4只，頸動脈插管采血，3000 rpm/10 min離心分離血清，置-20 ℃保存，臨用時以生理鹽水稀釋10倍。綿羊紅細胞（SRBC）懸液的制備：2倍體積的Alsever溶液和1倍體積的綿羊紅細胞混勻，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。臨用時取上述保存的綿羊紅細胞，用生理鹽水洗滌3次，每次1000 rpm離心5 min，棄上清液，再用生理鹽水以1∶10（V/V）稀釋。

1.4.2 方法：取ICR小鼠60只，雌雄各半，隨機分為6組，每組10只，分別為受試物純酰素低、中、高劑量組（50、100、200 mg/kg）、靈芝多糖組（800 mg/kg）、模型組（NS）與對照組（NS），給藥1次/天，共10 d。各組于給藥4次后腹腔注射綿羊紅細胞懸液0.2 mL/只進行免疫，繼續(xù)給藥3次后，除正常組外各組均腹腔注射環(huán)磷酰胺（10 mg/kg），每天1次，連續(xù)3 d。于給藥10 d后，小鼠進行眼眶取血進行溶血素測定。

凝固血液3000 rpm/10 min離心取血清，生理鹽水稀釋100倍后進行實驗，然后于37 ℃水浴中保溫10 min，冰浴終止反應后，2000 rpm離心10 min，取上清液1 mL，都氏試劑3 mL于試管內(nèi)，同時取綿羊紅細胞稀釋液0.25 mL，都氏試劑4 mL，于另一支試管內(nèi)，充分搖勻，放置10 min后，于540 nm處以對照管作空白，分別測定各管吸收度值。按下列公式計算每只小鼠樣品的半數(shù)溶血值HC50∶樣品的HC50=（樣品吸收度值/羊紅血球半數(shù)溶血時吸收度值）×稀釋倍數(shù)。

2 實驗結(jié)果

2.1 純酰素對小鼠單核巨噬細胞吞噬功能的影響：見表1。結(jié)果顯示純酰素中劑量（100 mg/kg）、高劑量（200 mg/kg）給藥組小鼠的單核巨噬細胞的吞噬指數(shù)與對照組小鼠比較有顯著提高，P值分別＜0.05和＜0.01，說明純酰素中高劑量具有明顯的增強單核巨噬細胞的吞噬能力作用。

表1 純酰素對小鼠單核巨噬細胞吞噬功能的影響（M±SD，n＝10）

2.2 純酰素對免疫低下小鼠白細胞水平的影響：見表2、3。小鼠腹腔注射給予環(huán)磷酰胺后導致其造血系統(tǒng)的造血干細胞增殖分化受到明顯抑制，從而導致白細胞水平明顯下降。純酰素低、中、高劑量給藥10 d后的免疫低下小鼠的白細胞（WBC）水平均高于模型組，經(jīng)比較檢驗均有顯著性差異（P＜0.05），說明純酰素能升高免疫低下小鼠的白細胞水平，從而增強小鼠的抵抗能力。純酰素對血紅蛋白及血小板參數(shù)未見明顯影響。

表2 純酰素對免疫低下小鼠白細胞和紅細胞水平的影響（M±SD，n=10）

2.3 純酰素對小鼠溶血素抗體生成的影響：見表4。實驗結(jié)果顯示純酰素各劑量對對小鼠的半數(shù)溶血值均有明顯的提升，各組HC50值均明顯高于模型組（P＜0.05和P＜0.01）。純酰素表現(xiàn)出明顯的對小鼠特異性免疫抗體的促生成作用。

表3 純酰素對免疫低下小鼠血紅蛋白和血小板水平的影響（M±SD，n=10）

表4 純酰素對綿羊紅細胞所致小鼠溶血素抗體生成的影響（M±SD，n=10）

3 討 論

植物多糖的活性顯著性已經(jīng)引起了研究者的關(guān)注，其在臨床的表現(xiàn)也充分證實多糖活性的特殊性?，F(xiàn)在來源于植物的多糖眾多，尤其是來源于傳統(tǒng)中藥的多糖更是廣泛，如靈芝多糖、茯苓多糖等等，對其研究也是非常的深入[4]。蘆薈多糖也是眾多多糖中的一種，已有研究顯示蘆薈多糖具有多種活性，如調(diào)節(jié)免疫、保肝、降糖、抗腫瘤、抗氧化等作用[3，7]。而調(diào)節(jié)免疫被認為是蘆薈多糖的最主要作用。蘆薈多糖在體外可增強單核巨噬細胞的吞噬作用[5]，并對正常小鼠的免疫功能有全面的增強作用[8]，刺激小鼠脾淋巴細胞增殖，并促進IL-1的分泌[6]。那么蘆薈多糖進一步純化后所得純酰素對免疫的作用是怎樣的呢？實驗結(jié)果顯示，純酰素表現(xiàn)出促進單核巨噬細胞的吞噬能力的作用，并升高免疫低下小鼠的白細胞水平，表明純酰素在促進非特異性免疫功能方面作用明顯。溶血素抗體實驗也進一步確認了純酰素對B淋巴細胞參與的抗體生成有顯著的增強作用。從以上結(jié)果看，蘆薈多糖進一步純化后所得純酰素在免疫方面的作用并沒有因為純化而消失，而是得到了保留，這就為純酰素的實際應用提供了良好的保證。

[1]林雪,賈敬芬,黃琳娟,等.RP-HPLC用于蘆薈多糖的單糖組成研究[J].食品科學,2006,27(4):192-195.

[2]閆吉昌,崔春月,張奕,等.蘆薈多糖的分離純化及結(jié)構(gòu)分析[J].高等學?；瘜W學報,2003,24(7):1189-1192.

[3]李天東,羅英,李俊剛.蘆薈多糖生物活性研究進展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學,2009,37(5):2033-2035.

[4]丁保金,金麗琴,呂建新.多糖的生物活性研究進展[J].中國藥學雜志,2004,39(8):561-564.

[5]陳偉,林新華,陳俊,等.庫拉索蘆薈多糖對小鼠腹腔巨噬細胞的體外激活作用[J].中國藥學雜志,2005,40(1):34-37.

[6]賈敏,周玲玲,郭勝偉,等.蘆薈多糖對小鼠脾淋巴細胞增殖及產(chǎn)生IL-1的影響[J].南京中醫(yī)藥大學學報,2006,22(2):89-90.

[7]王勇,王宗偉,黃兆勝,等.蘆薈多糖對腫瘤化療的增效和減毒作用研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2002,13(2):89-91.

[8]苗明三,常章富.蘆薈多糖對正常小鼠免疫作用影響的研究[J].中醫(yī)藥學刊,2003,21(8):1242-1243.

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1671-8194（2015）04-0058-02