文/祖農(nóng)江?阿布拉 劉賢俠 王漢魁 王海濱 王建梅 王樹杰 姜志濤 吳妍妍谷新利 李 明

（1 新疆維吾爾自治區(qū)奶業(yè)辦公室；2 新疆石河子大學(xué)動物科技學(xué)院；3 新疆西部牧業(yè)股份有限公司；4 新疆兵團乳業(yè)集團天澳牧業(yè)有限公司）

目前，奶牛不孕癥已經(jīng)成為制約奶牛場發(fā)展的“瓶頸”因素之一，給規(guī)?；膛鲈斐闪藰O大的經(jīng)濟損失，其中奶牛排卵延遲導(dǎo)致的排卵障礙是引起奶牛不孕癥的主要原因之一。據(jù)國外文獻報道，排卵延遲主要會導(dǎo)致奶牛受精失敗，多次配種不孕，以致奶牛產(chǎn)犢間隔延長和配種次數(shù)增加，最終影響奶牛正常的繁殖力。

對奶牛的排卵延遲，奶牛場應(yīng)采取“早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療”的策略，以降低該病的發(fā)病率，降低奶牛場的經(jīng)濟損失。臨床上診斷奶牛排卵延遲的常用方法是臨床癥狀觀察結(jié)合直腸檢查，但直腸檢查容易造成奶牛排卵延遲與不排卵的誤診，尤其是難以鑒別診斷。B超掃查最基礎(chǔ)聲像圖是二維斷面圖像，應(yīng)用B超掃查能夠提高排卵延遲診斷的準(zhǔn)確性。另外，測定患病牛血清中的激素濃度也是鑒別奶牛排卵延遲與不排卵的一種有效手段。本試驗通過查閱相關(guān)資料、觀察臨床癥狀、應(yīng)用直腸檢查結(jié)合B超掃查以及激素檢測的方法對排卵延遲進行綜合診斷，以供同行在診治奶牛排卵延遲時作為參考。

1 材料與方法

1.1 試驗地點和試驗動物

在新疆西部牧業(yè)股份有限公司牛場、奎屯澳利亞牧業(yè)有限公司牧場、克拉瑪依綠成農(nóng)業(yè)開發(fā)有限責(zé)任公司牛場的母牛中，選取無傳染病（結(jié)核、布?。?，寄生蟲病以及其它疾?。ㄗ訉m炎、蹄病、乳房炎等）的未孕荷斯坦奶牛，統(tǒng)計試驗?zāi)膛５亩枴⑻ゴ?、產(chǎn)犢日期、發(fā)情日期與配種日期、產(chǎn)奶量、體況評分。試驗?zāi)膛０匆?guī)范飼養(yǎng)，飼養(yǎng)方式為散欄飼養(yǎng)，全混合日糧（Total Mixed Ration，TMR）飼喂。

1.2 試驗儀器與試劑

1.2.1 試驗儀器

50s型Tringa Vet便攜式獸用B超儀，配備5.0-7.5 MHz變頻線陣探頭、配備Ni-MH 12 V充電電池各1 個、2215型NiCd/NiMH charger各1 個，以及配套的50s Tringa communication software version 1.0圖像處理軟件ODTCOMM和雙向紅外傳輸接口，荷蘭Piemed ICAL公司生產(chǎn)；Power Wave X32 BioTekB酶標(biāo)儀，美國BioTek公司生產(chǎn)。

1.2.2 試驗試劑

耦合劑，天津市南開區(qū)華科醫(yī)療器械廠生產(chǎn)的AB-1型醫(yī)用超聲耦合劑，規(guī)格250 g；牛雌激素ELISA試劑盒，靈敏度1 pg/mL，產(chǎn)品編號E11E0023，購自于上海藍基生物技術(shù)有限公司；牛孕酮ELISA試劑盒，靈敏度0.1 ng/mL，產(chǎn)品編號E11P0200，購自于上海藍基生物技術(shù)有限公司。

1.3 奶牛超聲掃查方法

1.3.1 準(zhǔn)備工作

奶牛頭頸部在頸枷內(nèi)保定，奶牛后肢用軟繩捆綁保定。向人用避孕套內(nèi)擠入適量耦合劑，把探頭放入其內(nèi)，以減少探頭摩擦造成的損傷，保證圖像的清晰。戴上一次性塑料手套，在手套外面涂抹部分石蠟油潤滑，先用手掏出直腸內(nèi)宿糞，然后用直腸檢查法初步判定兩側(cè)卵巢的位置。

1.3.2 B超掃查方法

用手拿B超探頭伸入直腸，用拇指、食指和中指觸摸到卵巢，將卵巢進行固定，然后協(xié)調(diào)配合用手把卵巢固定在線陣探頭之下，調(diào)整探頭和卵巢，探頭緊貼直腸壁對卵巢進行掃描，觀察實時圖像，當(dāng)顯示出卵巢上卵泡或黃體的最大切面圖像后，按下凍結(jié)鍵，保存典型聲像圖。

任何一種理論或?qū)W說的誕生都不是憑空創(chuàng)造出來的，都是在一定的理論支撐和現(xiàn)實土壤中萌發(fā)并不斷成長。毋庸置疑，哈貝馬斯以其獨特的視角和敏銳的批判分析能力，第一次系統(tǒng)的闡釋了科學(xué)技術(shù)意識形態(tài)論，但這一理論，同樣是在一定的理論源脈與現(xiàn)實背景即“兩種學(xué)說爭論”與“兩股現(xiàn)實潮流”的影響下產(chǎn)生的。

1.4 奶牛血清中雌激素和孕酮的測定方法

1.4.1 血樣采集與保存

試驗?zāi)膛Ｔ贐超診斷后，每頭頸靜脈或尾靜脈用一次性塑料采血器采集2 管血液，每管3～4 mL，并對應(yīng)牛號進行標(biāo)注。靜置數(shù)小時后，吸取析出的血清，移血清于1.5 mLEP管中，于-20 ℃冰箱保存待測。同時選取10 頭正常發(fā)情奶牛作為對照組，頸靜脈采血10 mL，處理同上。

1.4.2 血清中雌激素和孕酮測定方法

雌激素和孕酮測定按照試劑盒說明書步驟進行操作。

1.5 奶牛排卵延遲的診斷方法

1.5.1 查閱繁殖記錄

1.5.2 臨床癥狀

發(fā)情癥狀和正常發(fā)情一樣，但發(fā)情的持續(xù)期延長。

1.5.3 直腸檢查

發(fā)情期檢查卵巢和子宮無明顯疾患，卵巢上有卵泡存在，大小正常，人工授精后次日檢查成熟卵泡未排卵。

1.5.4 B超檢查

人工授精后次日在同一卵巢部位成熟卵泡大小和位置基本未發(fā)生變化，聲像圖顯示低回聲液性暗區(qū)。

2 結(jié)果與分析

2.1 排卵延遲奶牛的診斷結(jié)果

通過運用常規(guī)方法結(jié)合B超在排除子宮疾病和其它疾病的基礎(chǔ)上共診斷出排卵延遲奶牛38 例。詳見表1。

表1 卵巢囊腫和排卵延遲奶牛的診斷結(jié)果 單位：頭

2.2 排卵延遲奶牛的典型B超聲像圖

圖1中的E～H為澳利亞公司第九牧場6002號、1003號奶牛和西部牧業(yè)大豐牛場080024號、03207號奶牛排卵延遲的B超聲像圖，聲像圖特征顯示卵泡壁呈強回聲，邊界清晰、光滑，卵泡呈低回聲液性暗區(qū)，圖中E、F、G、H的卵泡直徑分別為：18.9、20、20.8、22.7 mm。

圖1 排卵延遲奶牛的B 超聲像圖

2.3 激素測定結(jié)果

促卵泡素（Follicle Stimulating Hormone，F(xiàn)SH）的功能是促進卵泡發(fā)育和成熟，協(xié)同促黃體生成激素（Luteinizing Hormone，LH）促使發(fā)育成熟的卵泡分泌雌激素和排卵；LH的功能是刺激卵泡發(fā)育成熟，誘發(fā)排卵，此外雌二醇（E2）、孕激素（P4）也對排卵有一定的影響。本文對38 頭排卵延遲奶牛中的10 頭奶牛進行了以上激素含量的測定（表2）。

表2 正常組與排卵延遲奶牛4 種激素濃度測定結(jié)果

從表2的統(tǒng)計分析結(jié)果可以看出，P4濃度正常組與排卵延遲組差異顯著（P<0.05），F(xiàn)SH濃度正常組與排卵延遲組差異極顯著（P<0.01），E2和LH濃度正常組與排卵延遲組差異均不顯著（P＞0.05）。以上結(jié)果表明，激素的變化對奶牛排卵延遲有一定影響，但LH不是主要影響因素，與其他人的報告結(jié)果不是很一致，可能與本試驗研究的樣本量、采樣時間、檢測方法等有一定的關(guān)系。

3 討論

3.1 直腸檢查和B超掃查診斷結(jié)果表明，排卵延遲奶牛外部發(fā)情癥狀正常，直腸檢查卵巢和子宮無異常，但發(fā)情持續(xù)的時間比正常奶牛要長。通過查閱繁殖記錄，對發(fā)情配種正常但未受孕的奶牛在下次實施人工授精后10～12 h進行直腸檢查和B超掃查，如果卵泡仍然存在并且B超聲像圖上顯示為低回聲液性暗區(qū)，卵泡直徑大小和位置也基本未變，連續(xù)跟蹤檢查最終卵泡會發(fā)生排卵，由此可診斷為排卵延遲。

3.2 排卵延遲屬于卵巢機能不全或排卵障礙，指在發(fā)情時有發(fā)情的外表癥狀，但不出現(xiàn)排卵，在奶牛身上時有發(fā)生。動物的正常排卵是在下丘腦-垂體-卵巢軸的相互調(diào)節(jié)下進行的，排卵前成熟卵泡分泌大量的雌激素通過正反饋誘發(fā)排卵前的LH峰的出現(xiàn)。所以排卵延遲往往與LH脈沖釋放減少或不及時有關(guān)，也可能與雌激素合成受阻及某些排卵活性降低有關(guān)。

3.3 該病在診斷時要注意與不排卵進行鑒別診斷，雖然二者都屬于排卵障礙范疇，并且臨床癥狀比較相似，但不排卵是指在奶牛出現(xiàn)發(fā)情后，發(fā)情期內(nèi)卵泡存在的時間超過4 天以上，但在下一發(fā)情周期的中期無成熟的黃體生成。因此在臨床診斷方面要詳細跟蹤檢查區(qū)別不排卵和排卵延遲，以免在臨床診斷中誤診。因此，B超跟蹤檢查，結(jié)合病史調(diào)查、直腸檢查等方法，對初步制定規(guī)模化奶牛場奶牛排卵延遲診斷的方法是有益的補充。

3.4 飼養(yǎng)管理不當(dāng)，應(yīng)激（過度擠奶、氣溫突變、溫度過低或過高）和遺傳也是導(dǎo)致奶牛排卵延遲的重要原因之一，需要繼續(xù)深入的研究。

[1]Lopezgatius F，Santolaria P，Yaniz J，et al.Risk factors for postpartum ovarian cysts and their spontaneous recovery or persistence in lactating dairy cows.Theriogenology，2002，58（8）：1623-1632.

[2]Nakada K.How to improve reproductive efficacy from now in Japan? Find out the factors of late lactation to predict postpartum reproductive diseases.Reprod and Dev，2006，52（1）：177-183.

[3]谷新利，羅瑞卿，楊光，等.奶牛卵泡囊腫與持久黃體發(fā)病規(guī)律調(diào)查.新疆農(nóng)墾科技，2009（5）：26-27.

[4]Kinsel M L，Etherington W G.Factors affecting reproductive performance in Ontario dairy herds.Theriogenology，1998，50（8）：1221-1238.

[5]Farin P W，Youngquist R S，Parfet J R，et al.Diagnosis of luteal and follicular ovarian cysts by palpation perrectum and linear-array ultrasonography in dairy cows.Am Vet Med Assoc，1992（200）：1085-1089.

[6]Douthwaite R，Dobson H.Comparison of different methods of diagnosis of cystic ovarian disease in cattle and an assessment of its treatment with a progesterone releasing intravaginal device.Vet Rec，2000（147）：355-359.

[7]趙興緒.獸醫(yī)產(chǎn)科學(xué).北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2009：382.

[8]Brunton P J，Arunachalam S，Russel J A.Control of neurohypophysial hormone secretion，blood osmolality and volume in pregnancy.Physiol Pharmacol，2008，59（8）：27-45.

[9]Aris J，Scott T N.Use of a GnRH agonist to delay the ovulation and injection of hCG to induce ovulation in goats superstimulated with FSH.Sain Vet，2003，21（1）：1-5.

[10]Bhat F A，Bhattacharyya H K.Oestrus duration and status of reproductive organs in repeat breeding cows.Animal Science Applied of Iranian Journal，2012，2（3）：295-299.