李 麗 孟令鍇 張朝立 韓婼伊 李 潔

黑龍江省3種地榆屬藥用植物總皂苷的含量測定※

李 麗1孟令鍇2張朝立2韓婼伊2李 潔1

目的 測定黑龍江省3種地榆屬植物總皂苷的含量。方法 以地榆皂苷Ⅰ為對照品，紫外分光光度法在323 nm處測定總皂苷含量。結(jié)果 地榆、小白花地榆、垂穗粉花地榆中總皂苷含量分別為6.57%、6.44%、5.38%。結(jié)論 該方法速度快、準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好，結(jié)果可靠，為系統(tǒng)開發(fā)、利用該屬藥用資源提供了堅實(shí)基礎(chǔ)。

地榆；小白花地榆；垂穗粉花地榆；總皂苷；含量測定

中藥地榆作為藥用已有2 000多年的歷史，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有涼血止血、解毒斂瘡的功效[1-2]。黑龍江省地榆屬資源主要有地榆（Sanguisorba officinalis L.）、小白花地榆[Sanguisorba parviflora（Maxim.）Takeda]、垂穗粉花地榆（Sanguisorba tenuifolia Fish.ex Link）等物種[3]。地榆主要含有鞣質(zhì)及皂苷類成分，其所含皂苷類成分能明顯促進(jìn)細(xì)胞因子刺激的骨髓細(xì)胞體外增殖[4]。黑龍江省地榆屬資源豐富，本實(shí)驗(yàn)旨對該地區(qū)地榆屬植物總皂苷成分含量進(jìn)行測定，為進(jìn)一步開發(fā)利用黑龍江省地榆屬植物提供基礎(chǔ)。

1 儀器與試劑

地榆皂苷Ⅰ對照品（成都瑞芬思生物科技有限公司生產(chǎn)，批號 101209）；地榆、小白花地榆、垂穗粉花地榆（采于牡丹江市牡丹峰、橫道河子及北山風(fēng)景區(qū)，經(jīng)鑒定分別為薔薇科地榆屬地榆、小白花地榆、垂穗粉花地榆）；紫外可見分光光度計（美國瓦里安公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 測量波長的選擇 精密稱取2 mg已干燥恒重的地榆皂苷Ⅰ對照品，以濃硫酸定容至50 ml，70 ℃水浴40 min，用紫外分光光度計，190～400 nm范圍內(nèi)掃描，該體系在紫外323 nm處有特征吸收峰。

2.2 總皂苷含量測定

2.2.1 對照品溶液配制 精密稱取5.02 mg地榆皂苷Ⅰ于25 ml容量瓶中，加濃硫酸定容，超聲溶解，置70 ℃水浴加熱40 min，冷卻至室溫，即得。

2.2.2 供試品溶液的配制 精密稱取3種地榆藥材粉末各250 mg，分別置于50 L燒杯中，各加入25 ml甲醇，超聲提取30 min，將濾液濃縮至干后，30%的氨試液15 ml溶解，加入水飽和正丁醇，充分振搖，靜置，分層，重復(fù)正丁醇萃取操作，合并萃取液，減壓濃縮。殘渣用適量濃硫酸超聲溶解，并轉(zhuǎn)移至100 ml容量瓶中，加濃硫酸定容至刻度，70 ℃水浴40 min，冰水浴中冷卻至室溫，得3種供試品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

2.2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密吸取地榆皂苷Ⅰ對照品儲備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 ml分別置于5 ml容量瓶中，加入濃硫酸稀釋定容至刻度，備用。分別精密吸取上述各濃度對照品溶液2 ml，按紫外分光光度法，測定OD323nm（波長323 nm處吸光度值），得線性回歸方程：Y=0.048X+0.2977，r=0.9980。線性范圍為20.08～160.64 μg/ml。

2.2.3.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品儲備液（0.0201 mg/ml）2 ml，重復(fù)測定6次，測定OD323nm，RSD=0.68%（n=6）。表明儀器精密度良好。

2.2.3.3 對照品穩(wěn)定性試驗(yàn) 取對照品溶液（0.0201 mg/ml）2 ml，放置0、1、2、4、8 h，測定OD323nm， RSD=0.89%。表明對照品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.3.4 樣品重復(fù)性試驗(yàn) 取 250 mg小白花地榆藥材樣品平行5份，照制備供試品溶液方法，測定OD323nm，RSD=1.43%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.3.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已測知含量的小白花地榆藥材樣品6份，分別精密加入一定量對照品溶液，按照樣品制備與測定方法測定，計算回收率，見表1。

表1 回收率測定結(jié)果

結(jié)果如表1所示，地榆皂苷Ⅰ的加樣回收率為99.13%，RSD值為1.42%，表明該方法的準(zhǔn)確度良好。

2.2.3.6 樣品測定 精密稱取250 mg 3種地榆屬藥材樣品，各測定平行3份，照制備供試品溶液方法制備藥材樣品溶液，測定OD323nm值，計算各樣品平均含量，見表2。

表2 3種地榆屬植物總皂苷含量結(jié)果

3 討論

通過對反應(yīng)溫度與反應(yīng)時間進(jìn)行優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)反應(yīng)溫度為70 ℃、反應(yīng)時間為40 min時，吸光度不再升高，可得到完全反應(yīng)。采用紫外分光光度法測定地榆屬植物中總皂苷含量，以濃硫酸為顯色試劑，反應(yīng)條件為反應(yīng)溫度70 ℃，反應(yīng)時間40 min，該方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好。測定結(jié)果顯示，3種野生地榆屬植物總皂苷含量中，地榆最高，小白花地榆次之，垂穗粉花地榆最低，此結(jié)果可為下一步開發(fā)利用地榆屬植物提供了理論依據(jù)，為黑龍江省野生地榆屬資源的開發(fā)打下基礎(chǔ)。

[1]孫星衍,孫星翼.神農(nóng)本草經(jīng)[M].北京∶商務(wù)印書館,2005∶94-94.

[2]沈保安.中國常用中草藥[M].合肥∶安徽科學(xué)技術(shù)出版社,2005∶481-481.

[3]國家中醫(yī)藥管理局.中華本草[M].上海∶上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 2009∶2896-2897.

[4]高小平,吳建明,鄒文俊,等.地榆促造血作用的有效部位篩選[J].中國天然藥物,2006,4(2)∶137-140.

Determination of Total Saponins in Three Medicinal Plants Sanguisorba in Heilongjiang Province

Li Li Meng Lingka Zhang Chaoli Han Ruoyi Li Jie

Objective To determine 3 Sanguisorba saponins content of plants in the Heilongjiang province.Methods Using ziyuglycoside I as standard sample,UV spectrophotometry was applied to the determination of total saponins content in 323 nm.Results The total saponins containing of S. officinalis was 7.57%,The total saponins containing of S.parviflora was 6.44%,The total saponins containing of S.tenuifolia tenuifolia was 5.38%.Conclusion This method is fast,reproducible and reliable results,it lay solid foundation for developing and utilizing medical resource of Sanguisorba.

Sanguisorba officinalis L.;Sanguisorba parviflora(Maxim.)Takeda;Sanguisorba tenuifolia Fish.ex Link; Total saponins;Quantitative Determination

R927.2

A

1673-5846(2015)01-0023-02

1牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院，黑龍江牡丹江 157011

2牡丹江醫(yī)學(xué)院，黑龍江牡丹江 157011

黑龍江省衛(wèi)生廳科研項目（2013201）；牡丹江醫(yī)學(xué)院科研項目（ZS201307）；黑龍江省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目（201410229025）

李麗（1963-），碩士研究生，主任，主治醫(yī)師。研究方向：年輕急性淋巴細(xì)胞白血病治療臨床研究。E-mail：13836309723@163.com

李潔（1982-），碩士研究生，主治醫(yī)師。研究方向：年輕急性淋巴細(xì)胞白血病治療臨床研究。E-mail：mdlbaby@163.com