（浙江博信藥業(yè)有限公司浙江湖州313307）

規(guī)?；i場(chǎng)豬偽狂犬病毒野毒感染的血清學(xué)調(diào)查

占永祥，姜禮輝

（浙江博信藥業(yè)有限公司浙江湖州313307）

本次實(shí)驗(yàn)主要是為了更好地了解浙江周邊規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬野毒感染的情況。本實(shí)驗(yàn)采用豬偽狂犬病毒野毒抗體ELISA診斷方法，對(duì)浙江周邊5個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)不同日齡段商品豬和公母豬的292份豬血清進(jìn)行檢測(cè)分析。從檢測(cè)結(jié)果可知：現(xiàn)階段豬偽狂犬野毒感染情況比較嚴(yán)重，檢測(cè)結(jié)果是平均野毒陽(yáng)性率為34.2%，其中5個(gè)場(chǎng)的野毒抗體最低為17.4%，最高為66.7%。

豬；偽狂犬；血清學(xué)；感染情況

豬偽狂犬?。≒seudorabies，PR）是由豬偽狂犬病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病。豬是該病的主要宿主和傳染源，健康豬與患豬、帶毒豬直接接觸可感染該病。母豬出現(xiàn)返情、屢配不孕，妊娠母豬流產(chǎn)，產(chǎn)木乃伊胎、死胎和產(chǎn)弱仔；初生仔豬帶毒感染率和死亡率可達(dá)100%；0～4周齡仔豬出現(xiàn)腹瀉及神經(jīng)癥狀，4～12周齡豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀或呼吸道疾病，12周齡至出欄育肥豬感染后多耐過(guò)，不發(fā)病呈隱性感染，呈現(xiàn)呼吸道疾病，對(duì)抗生素不敏感。造成長(zhǎng)期帶毒、排毒，成為最危險(xiǎn)的傳染源，表現(xiàn)為生長(zhǎng)緩慢、飼料報(bào)酬降低，嚴(yán)重影響?zhàn)B豬生產(chǎn)。許多國(guó)家和地區(qū)都報(bào)道過(guò)該病的流行，隨著養(yǎng)豬業(yè)集約化規(guī)?；陌l(fā)展，全國(guó)大部分省市已經(jīng)呈現(xiàn)大面積的發(fā)病，并在許多豬場(chǎng)呈暴發(fā)流行趨勢(shì)，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。2014年12月-2015年3月筆者對(duì)浙江衢州、湖州5個(gè)規(guī)模場(chǎng)的豬血樣進(jìn)行偽狂犬野毒調(diào)查，并提出相應(yīng)的防控措施，現(xiàn)報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1 調(diào)查對(duì)象

浙江衢州、湖州5個(gè)規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)的不同日齡段商品豬和公母豬的292份豬血清進(jìn)行檢測(cè)分析。

1.2 血液采集

2人1組，1人保定，1人采血。酒精棉球消毒，用5 mL一次性注射器從被檢豬前腔靜脈采集豬全血2～3 mL,采集后成斜面置保溫箱中，帶回分離血清，立即檢測(cè)。

1.3 診斷試劑盒

中美合資某品牌公司生產(chǎn)的豬偽狂犬病病毒gpI抗體檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：281440），包括已包被好抗原的96孔酶聯(lián)反應(yīng)板，標(biāo)準(zhǔn)陰、陽(yáng)性血清對(duì)照，辣根過(guò)氧化物酶（HRPO），酶標(biāo)抗體，TMB底物溶液、終止液、稀釋液、洗滌液等。

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器

酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀、移液器（20～200 μL、200～1 000 μL）與移液器匹配的吸頭、恒溫箱、離心管、記號(hào)筆等。

1.5 實(shí)驗(yàn)采用ELISA法

1）所有試劑盒在使用前一律恢復(fù)至18～26℃并使沉淀的鹽溶解。使用前濃縮液應(yīng)用蒸餾水進(jìn)行10倍稀釋。

2）在2個(gè)適當(dāng)孔內(nèi)分別加入100 μL 2倍稀釋（1∶2）的陰性對(duì)照。

3）在2個(gè)適當(dāng)孔內(nèi)分別加入100 μL 2倍稀釋（1∶2）的陽(yáng)性對(duì)照。

4）在其余的孔內(nèi)分別加入100 μL已稀釋好的被檢樣品。

5）用封板膜將反應(yīng)板封閉，在18～26℃條件下孵育60 min。

6）時(shí)間到后，甩掉孔中的溶液，用洗滌液洗板3～5次，300 μL/孔，最后一次拍干。

7）每孔加酶標(biāo)抗體-辣根過(guò)氧化物酶100 μL，置18～26℃孵育20 min。

8）時(shí)間到后，甩掉孔中溶液，洗滌3～5次，最后一次拍干。

9）每孔加TMB底物100 μL，置18～26℃孵育15 min。

10）每孔加終止液50 μL，使反應(yīng)終止。

11）結(jié)果判定，在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔OD650值。通過(guò)計(jì)算樣品與陰性對(duì)照的比例（S/N）來(lái)確定偽狂犬野毒抗體的有無(wú)。陰性對(duì)照的平均值減去陽(yáng)性平均值必須＞0.300，實(shí)驗(yàn)方能有效。如果實(shí)驗(yàn)無(wú)效操作可能有誤，試驗(yàn)應(yīng)重做。

S/N=樣品OD650值/陰性對(duì)照平均OD650值，注：①S/N小于或等于0.60，樣品確定為陽(yáng)性；②S/N＞0.7，樣品確定為陰性；③0.6＜S/N≤0.7，樣品應(yīng)重測(cè)。

2 檢測(cè)結(jié)果

各豬場(chǎng)不同日齡段商品豬和公母豬偽狂犬病毒野毒感染的檢測(cè)結(jié)果。

表1～3是衢州地區(qū)豬場(chǎng)，表4～5是湖州地區(qū)豬場(chǎng)，表6是整個(gè)結(jié)果陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)。

表1 1場(chǎng)豬偽狂犬野毒感染的檢測(cè)結(jié)果（2014年12月11日）

表2 2場(chǎng)豬偽狂犬野毒感染的檢測(cè)結(jié)果（2014年12月18日）

表3 3場(chǎng)豬偽狂犬野毒感染的檢測(cè)結(jié)果（2015年1月21日）

表4 4場(chǎng)豬偽狂犬野毒感染的檢測(cè)結(jié)果（2015年2月10日）

表5 5場(chǎng)豬偽狂犬野毒感染的檢測(cè)結(jié)果（2015年3月24日）

表6 5個(gè)場(chǎng)豬偽狂犬病毒野毒感染的檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

3 實(shí)驗(yàn)分析

本次實(shí)驗(yàn)從表1～5可以看出偽狂犬帶毒發(fā)病現(xiàn)象還是比較嚴(yán)重。豬場(chǎng)野毒感染最高66.7%，最低17.4%。說(shuō)明豬偽狂犬病野毒感染仍普遍存在，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

4 防控措施

4.1 制定合理的免疫程序

初生仔豬在0～3日齡首次滴鼻免疫，越早越好，讓疫苗占位三叉神經(jīng)，起到保護(hù)作用，不受母源抗體干擾。每頭乳豬滴鼻1頭份，每鼻孔0.5頭份。然后在10周齡和14周齡進(jìn)行第2次、第3次免疫、每頭肌注1頭份，后備種豬配種前免疫2次，間隔4周每頭肌注1頭份/次；經(jīng)產(chǎn)母豬、公豬每年免疫3～4次，每頭肌注1頭份/次。對(duì)表5檢測(cè)出1頭公豬野毒陽(yáng)性，建議淘汰。對(duì)母豬胎齡較大并且?guī)в幸岸矩i只及時(shí)淘汰，并且對(duì)發(fā)病保育豬緊急接種偽狂犬疫苗。

4.2 定期免疫監(jiān)測(cè)

一是加強(qiáng)種豬和商品豬的偽狂犬病野毒抗體檢測(cè)，及時(shí)了解本場(chǎng)野毒感染情況，通過(guò)淘汰野毒抗體陽(yáng)性種豬，為豬場(chǎng)凈化做準(zhǔn)備條件。二是外引種豬和本場(chǎng)后備豬要適時(shí)檢測(cè)，保證是偽狂犬病野毒陰性豬才能進(jìn)入種豬群。防止帶毒傳染。同時(shí)由于疫苗抗原含量、母源抗體高低、豬群健康狀況、生產(chǎn)管理情況。飼養(yǎng)管理?xiàng)l件不同，產(chǎn)生的免疫效果也不一樣，因此，要應(yīng)用gB-ELISA抗體檢測(cè)法對(duì)免疫抗體進(jìn)行檢測(cè)，隨時(shí)檢測(cè)疫苗的免疫應(yīng)答反應(yīng)，確保豬群有足夠免疫力，并且要檢測(cè)其他病毒性疾病在該場(chǎng)的穩(wěn)定性（PRRSV），防止對(duì)偽狂犬疫苗的干擾。4.3建立嚴(yán)格的生物安全措施

①豬場(chǎng)實(shí)施嚴(yán)格管理，外來(lái)車(chē)輛不得進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)。對(duì)豬群實(shí)行全進(jìn)全出的方案，為了更好的防控。各棟豬舍和各個(gè)生產(chǎn)區(qū)員工和用具相對(duì)獨(dú)立；②堅(jiān)持開(kāi)展滅鼠工作。鼠是偽狂犬病病毒的攜帶者，因此，消滅豬場(chǎng)的鼠類(lèi)對(duì)控制該病具有重要意義；③嚴(yán)格執(zhí)行消毒制度，2次/d豬欄的打掃，每周定期對(duì)豬體、豬舍、用具、周?chē)h(huán)境等進(jìn)行2次消毒和清理；豬場(chǎng)門(mén)口要設(shè)立消毒池，進(jìn)出豬場(chǎng)的員工必須洗澡、更衣、換鞋、洗手和紫外線消毒，對(duì)裝飼料進(jìn)生產(chǎn)區(qū)的車(chē)輛也要嚴(yán)格消毒；④禁止員工從外帶豬肉進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)；豬場(chǎng)內(nèi)不能飼養(yǎng)其他動(dòng)物；⑤安排專門(mén)的員工對(duì)病死豬尸體及胎衣等進(jìn)行無(wú)害化處理，糞尿進(jìn)入沼氣池發(fā)酵處理，減少病原傳播。

4.4 飼養(yǎng)管理措施

①提高豬群飼養(yǎng)管理和保健預(yù)防，把好原料關(guān)，防止霉菌毒素侵入豬只，造成豬只抵抗力下降和霉菌毒素中毒引起的免疫抑制；②對(duì)豬舍“三度”（溫度、濕度、空氣新鮮度）加強(qiáng)控制，提高豬群自身抵抗力；③加強(qiáng)其他病毒性疾病的防控，防止其他疾病對(duì)豬偽狂犬病疫苗的免疫干擾作用，避免引起免疫失敗?！觯ň庉嫞黑w曉松）

10.3969/j.issn.1008-4754.2015.05.028