史曉梅 陳士恒 章 晴 楊永壇

分散固相萃?。瓪庀嗌V法快速測(cè)定食用植物油中66種農(nóng)藥殘留

史曉梅 陳士恒 章 晴 楊永壇

（中糧營(yíng)養(yǎng)健康研究院營(yíng)養(yǎng)健康與食品安全北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 102209）

建立分散固相萃取法結(jié)合氣相色譜技術(shù)同時(shí)快速測(cè)定食用植物油中有機(jī)磷、有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯66種農(nóng)藥殘留的方法。樣品經(jīng)乙腈溶劑3次提取后，使用PSA（Primary Secondary Amine，N－丙基乙二胺）和C18分散固相萃取凈化，提取溶液經(jīng)氮吹濃縮過(guò)濾后一部分注入氣相色譜－電子捕獲檢測(cè)器檢測(cè)，另一部分經(jīng)氣相色譜－火焰光度檢測(cè)器檢測(cè)。樣品在0.08、0.16和0.40 mg／kg添加水平的回收率試驗(yàn)中，平均回收率為62.3%～112.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于8.6%，檢出限在0.001～0.018 mg／kg之間，基本滿足國(guó)內(nèi)外對(duì)食用植物油中農(nóng)藥最低殘留限量的標(biāo)準(zhǔn)要求。

有機(jī)磷農(nóng)藥 有機(jī)氯農(nóng)藥 擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥 分散固相萃取 植物油

食用植物油是人類生活的必需消費(fèi)品，其安全問(wèn)題直接關(guān)系到消費(fèi)者的身體健康。油料作物在生長(zhǎng)過(guò)程中頻繁使用有機(jī)磷、有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥，其殘留危害也可能影響到植物油的安全性，近年來(lái)越來(lái)越受到廣泛關(guān)注［1］。植物油中農(nóng)藥殘留量的確證檢測(cè)十分重要，我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2763—2014規(guī)定了植物油中多種農(nóng)藥的最大殘留量（MRL）［2］，許多發(fā)達(dá)國(guó)家及國(guó)際組織對(duì)油料中農(nóng)藥殘留限量制定了嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)，例如歐盟對(duì)大多數(shù)農(nóng)藥采用方法檢出限作為MRL［3］。

食用植物油中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，必須盡可能的除去基質(zhì)中脂肪、色素及其他高分子量的干擾物，否則基質(zhì)干擾物會(huì)污染檢測(cè)儀器，降低儀器使用壽命。國(guó)內(nèi)外研究植物油中農(nóng)藥殘留的前處理方法主要有液液萃取（LLE）、固相萃?。⊿PE）、基質(zhì)固相分散法（MSPD）、凝膠滲透色譜（GPC）等方法［4－9］。這些方法中有些操作繁瑣，有些只針對(duì)特定農(nóng)藥種類，故當(dāng)測(cè)定多種類型的農(nóng)藥殘留時(shí)，需要采用不同的前處理方法，因此也大大增加了檢測(cè)成本。QuEChERS方法和在線GPC系統(tǒng)可以簡(jiǎn)便、快速的處理完成植物油樣品，還可以同時(shí)檢測(cè)多種農(nóng)藥殘留［10］。

我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2763—2014中規(guī)定了植物油中多種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法，但是本方法的研究目的在于建立一種能同時(shí)快速測(cè)定66種有機(jī)磷、有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留的方法。樣品經(jīng)乙腈溶液提取后，采用分散固相萃取的方式凈化，C18凈化劑的使用可以有效去除油基質(zhì)，保護(hù)色譜柱不被基質(zhì)堵塞，進(jìn)而有效避免檢測(cè)儀器的污染損傷。PSA可以吸附樣品基質(zhì)中的強(qiáng)極性雜質(zhì)、有機(jī)酸和色素等干擾物，同樣避免色譜柱和檢測(cè)儀器的損傷。本研究建立的方法提高了分析速度和效率，對(duì)于滿足食用植物油中多農(nóng)藥殘留的日常檢測(cè)提供了參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

有機(jī)磷、有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH公司。

無(wú)水硫酸鎂和無(wú)水氯化鈉：分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；弗羅里硅土、中性氧化鋁、N－丙基乙二胺（PSA）、C18：北京BESEP 公司；乙腈、甲醇、正己烷：色譜純，美國(guó)Fisher公司。大豆油、花生油、玉米油、香油、葵花籽油：市售。

1.2 儀器與設(shè)備

7890A氣相色譜儀：美國(guó)安捷倫公司；GC－2010 Plus氣相色譜儀：日本島津公司；TG 16－II臺(tái)式高速離心機(jī)：長(zhǎng)沙平凡儀器儀表公司；HGC－24A氮吹儀：天津恒奧科技發(fā)展有限公司：QL－902旋渦混合器：海門其林貝爾儀器制造有限公司。

1.3 樣品前處理

提?。喝? g均勻植物油樣品于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈提取液和5 g氯化鈉，渦旋振蕩2 min后，8 000 r／min 離心5 min，將上層提取溶液轉(zhuǎn)移到另一個(gè)離心管中，樣品中再分別加入5 mL乙腈，重復(fù)2次，合并3次提取溶液。

凈化：將10 mL提取溶液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管，加入240 mg C18、240 mg PSA吸附劑和720 mg無(wú)水硫酸鎂，渦旋振蕩2 min后，8 000 r／min離心5 min。

濃縮：將1.0 mL已凈化的提取溶液轉(zhuǎn)移到10 mL離心管，在40℃條件下用氮?dú)鉂饪s吹干，1.0 mL正己烷復(fù)溶，樣品過(guò)0.22μm有機(jī)濾膜后，待GCECD分析；將4 mL已凈化的提取溶液轉(zhuǎn)移到有準(zhǔn)確刻度的離心管，在40℃條件下用氮?dú)鉂饪s至1.0 mL以下時(shí)，使用乙腈定容到1.0 mL，樣品過(guò)0.22μm有機(jī)濾膜后，待GC－FPD分析。

1.4 儀器條件

有機(jī)磷農(nóng)藥：色譜柱DB－5ms（30 m×0.25 mm×0.25μm）；程序升溫：80℃保持1 min，然后以10℃／min升溫至280℃，保持5 min，以20℃／min升溫至300℃，保持18 min；載氣為高純氮?dú)?，恒流流速?.0 mL／min；進(jìn)樣口溫度：220℃；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1 μL；檢測(cè)器溫度：250 ℃；H2流量：75 mL／min，空氣流量：100 mL／min。

有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥：色譜柱：DB－35ms（30 m ×0.25 mm ×0.25μm）；程序升溫：150 ℃保持2 min，然后以10℃／min升溫至300℃，保持18 min；載氣為高純氮?dú)?，恒流流速?.0 mL／min；進(jìn)樣口溫度：220 ℃；分流進(jìn)樣，分流比：10∶1；進(jìn)樣量：1 μL；檢測(cè)器溫度：320℃。

2 結(jié)果與討論

2.1 試驗(yàn)條件的優(yōu)化

2.1.1 提取方法

分別考察了乙腈－氯化鈉、乙腈／正己烷－水、甲醇低溫冷凍提取3種提取方式對(duì)目標(biāo)農(nóng)藥添加回收率的影響（如圖1所示）。乙腈正己烷－水提取和甲醇低溫冷凍提取方法的試驗(yàn)結(jié)果中，艾氏劑、p，p'－滴滴伊和滅蟻靈的回收率偏低（小于60%）。采用乙腈溶液提取植物油中的農(nóng)藥殘留，通過(guò)加入一定量的氯化鈉，可以對(duì)有機(jī)磷、有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥進(jìn)行充分的提取，而較少溶解植物油基質(zhì)中的干擾物，還可以減少對(duì)儀器進(jìn)樣口和色譜柱的損傷，故采用20 mL乙腈分3次提取樣品。

2.1.2 凈化劑的選擇

按照1.3所述的前處理過(guò)程，考察4種常用凈化劑對(duì)有機(jī)磷、有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥加標(biāo)回收率的影響（圖2）［11－13］。C18凈化吸附劑碳含量較高，可以通過(guò)疏水作用，對(duì)非極性的組分有較好的吸附效果。食用植物油中非極性的油脂含量最高，因此C18對(duì)油脂的去除有十分顯著的效果，同時(shí)還可以除去其他一些非極性的雜質(zhì)［14］。PSA是弱陰離子交換吸附劑，它對(duì)于樣品中的一些強(qiáng)極性雜質(zhì)、有機(jī)酸、色素和金屬離子等具有良好的凈化吸附效果［15］。當(dāng)凈化10 mL的樣品提取溶液時(shí)，選擇PSA和C18的使用量均為240 mg，可以取得較好的凈化效果。

圖1 不同提取方式對(duì)農(nóng)藥添加回收率的影響

圖2 不同凈化劑對(duì)農(nóng)藥添加回收率的影響

2.2 方法的線性范圍和檢出限

在1.4的試驗(yàn)條件下，66種有機(jī)磷、有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥分離良好（見(jiàn)圖3和圖4）。用空白植物油樣品制備樣品空白提取液，作為基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋液。將10 mg／L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋，配制成基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.4的條件進(jìn)行測(cè)定，以66種農(nóng)藥的質(zhì)量濃度對(duì)相應(yīng)的峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得線性方程及相關(guān)系數(shù)。以S／N＝3計(jì)算方法中農(nóng)藥的檢出限（LOD），以S／N＝10計(jì)算方法農(nóng)藥的定量限（LOQ）。

表1 66種有機(jī)磷、有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥的線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

表1 （續(xù)）

圖3 34種有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（0.05 mg／kg）

圖4 32種有機(jī)磷農(nóng)藥基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（0.05 mg／kg）

2.3 方法的回收率和精密度

為考察方法的準(zhǔn)確度，按照1.3所確定的方法，在相應(yīng)線性范圍內(nèi)進(jìn)行了3個(gè)水平（0.08、0.16、0.40 mg／kg）的添加回收率試驗(yàn)，每個(gè)水平做6個(gè)平行樣品測(cè)定，結(jié)果詳見(jiàn)表2。

表2 部分有機(jī)磷、有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥添加回收試驗(yàn)的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.4 樣品的檢測(cè)

為了驗(yàn)證方法的可行性，應(yīng)用本方法對(duì)市售植物油樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示6個(gè)植物油樣品均被檢出農(nóng)藥殘留，其中玉米油檢出了七氯，花生油檢出了毒死蜱，大豆油檢出了乙酰甲胺磷，但均未超過(guò)植物油中的限量要求。

表3 不同食用植物油樣品檢測(cè)結(jié)果／mg／kg

3 結(jié)論

研究建立了分散固相萃?。瓪庀嗌V法測(cè)定食用植物油中66種有機(jī)磷、有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留量的方法，該方法靈敏度能滿足國(guó)內(nèi)外食品安全標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)植物油的最大殘留限量要求。在0.08～0.40 mg／kg的添加水平，平均回收率62.3%～112.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n＝6）不大于8.6%，檢出限是0.001 ～0.018 mg／kg，定量限0.003 ～0.05 mg／kg。本方法簡(jiǎn)便快速，采用GC－ECD／FPD作為分散固相萃取技術(shù)后續(xù)的檢測(cè)方法，成本低廉，較適用于在基層企業(yè)推廣。

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［2］GB 2763—2014食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)－食品中農(nóng)藥最大殘留限量［S］

GB 2763—2014 National food safety standard－Maximum residue limits for pesticides in food［S］

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Rapid Determination of 66 Pesticides Residues in Edible Vegetable Oil by Dispersive Solid Phase Extraction Method－Gas Chromatography

Shi Xiaomei Chen Shiheng Zhang Qing Yang Yongtan
（COFCO Nutrition＆ Health Research Institute，Beijing Key Laboratory of Nutrition Health and Food Safety，Beijing 102209）

A method was established for the quick determination of 66 organophosphorus，organochlorine and pyrethroid pesticides residues in edible vegetable oil，samples were purified by dispersive solid phase extraction（DSPE）method and detected by gas chromatography （with FPD／ECD detector）.Samples were extracted by acetonitrile for three times，and purified by PSA and C18using dispersive solid phase extraction method.After nitrogen flushing concentration and filtration，samples were detected by GC－ECD and GC－FPD.At the fortification level of 0.08，0.16，0.40 mg／kg，the average recoveries ranged from 62.3%to 112.3%，and the relative standard deviations（RSDs，n＝6）were less than 8.6%，limit of detections（LODs）were 0.001～0.018 mg／kg，this method can basically meet the standard request of peptide residue MRLs in edible vegetable oil at home and abroad.

organophosphorus，organochlorine and pyrethroid pesticides，dispersive solid － phase extraction，edible vegetable oil

O657.7

A

1003－0174（2016）07－0132－06

中糧集團(tuán)應(yīng)用基礎(chǔ)項(xiàng)目（2013－C2－F007）

2014－11－21

史曉梅，女，1986年出生，碩士，食品質(zhì)量與安全

楊永壇，男，1971年出生，研究員，食品質(zhì)量與安全