李楠

【摘要】 目的 探討隱球菌性腦膜炎患者顆粒溶素（GNLY）的表達(dá)和臨床意義。方法 選擇28例隱球菌性腦膜炎患者作為腦膜炎組， 另選同期進(jìn)行健康檢查的28例健康人作為健康人組， 分離其外周血單個(gè)核細(xì)胞， 并采用免疫印跡法檢測(cè)其蛋白含量， 再使用熒光定量法檢測(cè)mRNA的含量， 分析隱球菌性腦膜炎患者蛋白質(zhì)含量與其他免疫指標(biāo)的關(guān)系。結(jié)果 和健康人組相比腦膜炎組GNLY蛋白、mRNA含量明顯降低， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；腦膜炎組患者的GNLY蛋白質(zhì)的表達(dá)情況和血清中的干擾素（IFN）-γ、免疫球蛋白（Ig）G水平呈正相關(guān)， 與白細(xì)胞介素（IL）-10水平呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論 顆粒溶素直接影響隱球菌性腦膜炎患者的病情發(fā)展， 通過(guò)測(cè)定其水平可為患者的治療提供理論依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 隱球菌性腦膜炎；顆粒溶素

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.02.011

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2013年6月～2014年6月收治的28例隱球菌性腦膜炎患者作為腦膜炎組， 以及同期進(jìn)行健康體檢的健康人28例作為健康人組， 腦膜炎組患者中男12例、女16例， 年齡35～67歲， 平均年齡（50.6±5.6）歲， 健康人組中男14例、女14例， 年齡37～65歲， 平均年齡（49.3±5.7）歲。兩組年齡、性別等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 分別在清晨對(duì)研究對(duì)象抽取靜脈血液3 ml作為樣本， 然后注入構(gòu)椽酸鈉抗凝管并加入適量的生理鹽水稀釋?zhuān)?再進(jìn)行離心處理， 分離出血清后將每個(gè)血清樣本分成兩份（一份進(jìn)行免疫印跡反應(yīng)， 一份進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)）， 按照說(shuō)明書(shū)的規(guī)范進(jìn)行操作。通過(guò)定量的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）和反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)， 分別提取研究者血清中的RNA 2 ?g， 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)， 反應(yīng)過(guò)程中所使用到的設(shè)備和反應(yīng)酶都按照說(shuō)明書(shū)的內(nèi)容準(zhǔn)備；采用定量PCR反應(yīng)， 在定量反應(yīng)的過(guò)程中分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增和RT質(zhì)量控制， 然后分別求出兩組標(biāo)本的相對(duì)表達(dá)量[1]。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Pearson法進(jìn)行分析。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩組GNLY蛋白、mRNA表達(dá)量比較 腦膜炎組GNLY蛋白含量（0.62±0.06）mmol/L明顯低于健康人組的（1.11± 0.12）mmol/L， 幾乎為健康人組含量的0.56倍左右；腦膜炎組GNLY-mRNA的表達(dá)量（0.35±0.04）mmol/L低于健康人組的（1.20±0.15）mmol/L， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2. 2 兩組免疫指標(biāo)對(duì)比 研究發(fā)現(xiàn)腦膜炎組血清IgG含量明顯少于健康人組（P<0.05）， GNLY蛋白的表達(dá)和IgG呈正相關(guān)關(guān)系。見(jiàn)表1。

2. 3 兩組血清細(xì)胞因子水平比較 健康人組血清中IL-10、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、IFN-γ、IL-4水平與腦膜炎組比較， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。GNLY蛋白的表達(dá)與IFN-γ水平呈正相關(guān)， 與IL-10水平呈負(fù)相關(guān)。見(jiàn)表2。

3 小結(jié)

本次試驗(yàn)中腦膜炎組28例患者GNLY蛋白及mRNA的含量較健康人組明顯下降（P<0.05）， 由此分析兩種指標(biāo)的表達(dá)量均明顯下降， 其與致病關(guān)系密切。Th1型免疫應(yīng)答能夠分泌 Th1型細(xì)胞因子（如IFN -γ）， 在強(qiáng)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答及對(duì)宿主抵抗細(xì)胞內(nèi)病原菌過(guò)程中發(fā)揮重要作用， 而Th2型免疫應(yīng)答分泌Th2細(xì)胞因子（如IL-10）卻可能抑制Th1型細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫應(yīng)答， 加重感染病情， 試驗(yàn)中健康人組的免疫指標(biāo)（IgG）與細(xì)胞因子水平（IL-4等）和腦膜炎組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

綜上所述， 隱球菌性腦膜炎患者的發(fā)病與患者GNLY的蛋白含量、mRNA含量相關(guān)， 通過(guò)對(duì)其含量的測(cè)定可給臨床治療方案的制訂提供堅(jiān)實(shí)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 周曄， 鄧安梅， 谷明莉， 等.隱球菌性腦炎患者顆粒酶B、顆粒溶素、穿孔素的表達(dá)及臨床意義.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)， 2011， 13（1）： 64-68.

[2] 周曄， 鄧安梅， 奚偉強(qiáng)， 等.隱球菌性腦膜炎患者顆粒溶素的表達(dá)及其臨床意義.臨床軍醫(yī)雜志， 2011， 37（4）：552-553.

[3] 陳燕， 周曄， 鄧安梅， 等.穿孔素、顆粒酶、顆粒溶素在銀屑病患者中的表達(dá)及臨床意義.臨床軍醫(yī)雜志， 2010， 36（4）：861-862.

[收稿日期：2015-09-11]