劉美蘭

【摘要】目的：本文主要探討血栓與止血檢測用于出血病與易栓癥中的臨床診斷應(yīng)用研究。方法：選取出血病15個病種、156個家系、168例先證者和616名家族成員進(jìn)行了檢測，在人類基因庫中尋找相關(guān)的基因序列，通過RT-PCR、AS-PCR和實(shí)時PCR擴(kuò)增，得到PCR的純化產(chǎn)物，再用RFLP、TA克隆和直接測序等方法進(jìn)行基因診斷；同時采用抽取DNA、合成引物、PCR擴(kuò)增、PCR產(chǎn)物純化及直接測序分析方法，并采用RFLP和AS-PCR驗(yàn)證等技術(shù)，分別對4個家系的AT缺陷癥、4個家系的PC缺陷癥及2個家系的PS缺陷癥作出基因診斷。結(jié)果：在血栓與止血檢測在出血病方面的應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)診斷準(zhǔn)確率達(dá)100%；在血栓與止血檢測在易栓癥方面的應(yīng)用，診斷準(zhǔn)確率達(dá)100%。結(jié)論：發(fā)現(xiàn)栓和止血監(jiān)測的結(jié)果在一定程度上可反應(yīng)出血病和易栓癥的診斷。

【關(guān)鍵詞】血栓；止血；出血病；易栓癥

出血癥是由于凝血系統(tǒng)出現(xiàn)問題而發(fā)生的出血現(xiàn)象，而易栓癥是由于凝血因子、抗凝蛋白等的遺傳性或獲得性缺陷而發(fā)生血栓栓塞癥狀。其二者是臨床中最為常見的危害人類健康的疾病，而血栓和止血監(jiān)測的結(jié)果在一定程度上可反應(yīng)出血病和易栓癥的診斷。

1、資料與方法

1.1血栓與止血檢測

對血栓和止血的檢測一定程度上可反應(yīng)出血病和易栓癥的診斷，診斷方法大致可分為表型檢測和篩選試驗(yàn)這兩類。表型檢測常用作診斷試驗(yàn)；篩選試驗(yàn)常需監(jiān)測的指標(biāo)主要有血小板計數(shù)（PLT）、出血時間（BT）、活化部分凝血活酶時間（APTT）、凝血酶原時間（PT）、凝血酶時間（TT）、優(yōu)球蛋白溶解時間（ELT）、纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物（FDPs）等等。

目前對部分先天性和遺傳性出血疾病和易栓癥需要進(jìn)行基因檢測，以確定是否存在基因缺陷。

1.2血栓與止血檢測在出血病和易栓癥中的應(yīng)用

出血病包括有新生兒出血癥和腦干出血癥和兩種，主要是由一期止血缺陷和二期止血缺陷所導(dǎo)致的，一期止血缺陷主要由血管壁和血小板異常所引發(fā)的止血性功能缺陷，而二期止血缺陷主要由抗凝物質(zhì)和凝血障礙所引起的止血性功能缺陷。本研究對15個病種、156個家系、168例先證者和616名家族成員進(jìn)行了檢測。在人類基因庫中尋找相關(guān)的基因序列，通過RT-PCR、AS-PCR和實(shí)時PCR擴(kuò)增，得到PCR的純化產(chǎn)物，再用RFLP、TA克隆和直接測序等方法進(jìn)行基因診斷，并已獲得102種國內(nèi)外首先報道的突變基因。

血栓病在臨床上可以分為遺傳性和獲得性兩種，無論是遺傳性易栓癥還是獲得性易栓癥，二者共同的最主要臨床特點(diǎn)都是血栓易發(fā)傾向，又多數(shù)以靜脈血栓栓塞性疾?。╒TE）形式出現(xiàn)，有些疾病動脈血栓的發(fā)生率也有升高。體內(nèi)主要抗凝蛋白如抗凝血酶（antithrombin，AT）、蛋白S（proteinS，PS）、蛋白C（proteinC，PC）的先天缺乏會導(dǎo)致血栓性疾病。對靜脈系統(tǒng)血栓病的檢測可發(fā)現(xiàn)部分患者具備這種先天性缺陷。肺栓塞（PulmonaryembolismPE）是DVT中常見的并發(fā)癥，也是靜脈血栓形成和導(dǎo)致死亡的最為主要的因素，易栓癥的診斷見表1。

2、結(jié)果

在血栓與止血檢測用于出血病應(yīng)用方面，基于研究閱讀文獻(xiàn)，通過對137名血友病患者進(jìn)行產(chǎn)前診斷，采用Southern-Blot和PCR-DGGE技術(shù)手段，檢測F8內(nèi)含子22倒位；根據(jù)性別基因位點(diǎn)和多態(tài)性位點(diǎn)，再對內(nèi)含子22倒位陰性者進(jìn)行間接連鎖分析，發(fā)現(xiàn)其累積識別能力高達(dá)99.4%，準(zhǔn)確率高達(dá)100%，同時診斷率也高達(dá)100%。

在血栓與止血檢測用于易栓癥應(yīng)用方面，本研究采用抽取DNA、合成引物、PCR擴(kuò)增、PCR產(chǎn)物純化及送入公司進(jìn)行測序等分析方法，并采用AS-PCR和RFLP等驗(yàn)證技術(shù)，分別對4個家系的PC缺陷癥、4個家系的AT缺陷癥及2個家系的PS缺陷癥進(jìn)行基因診斷，發(fā)現(xiàn)突變基因共計8種，最終診斷準(zhǔn)確率高達(dá)100%。

3、討論

基于前人研究發(fā)現(xiàn)血栓和止血監(jiān)測的結(jié)果在一定程度上可反應(yīng)出血病和易栓癥的診斷。本實(shí)驗(yàn)首先研究了血栓與止血檢測在出血病中的臨床應(yīng)用，對137名血友病患者進(jìn)行產(chǎn)前診斷，發(fā)現(xiàn)累積識別能力達(dá)99.4%，準(zhǔn)確率高達(dá)100%，同時診斷率也高達(dá)100%。其次研究了血栓與止血檢測在易栓癥中的臨床應(yīng)用，采用多種醫(yī)學(xué)手段對易栓癥多種病癥進(jìn)行基因診斷，診斷準(zhǔn)確率達(dá)100%。綜上可見，在診斷出血病與易栓癥中，血栓和止血檢測可作為決定性檢測指標(biāo)。