癢停擦劑抗炎止癢作用實(shí)驗(yàn)研究

張俊威，許慶瑞，霍金海，王偉明*

(黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院，哈爾濱 150036)

摘要：目的對(duì)癢停擦劑的抗炎、止癢和抗過(guò)敏作用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。方法分別采用豚鼠局部瘙癢、二甲苯致小鼠耳腫、蛋清致大鼠足跖腫脹和小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型評(píng)價(jià)癢停擦劑止癢、抗炎及抗過(guò)敏作用。結(jié)果癢停擦劑能降低磷酸組胺所致豚鼠局部瘙癢的閾值(P<0.01)；減輕二甲苯所致小鼠耳腫脹率和蛋清致大鼠足跖腫程度(P<0.05，P<0.01)；降低5%DNCB至小鼠耳廓遲發(fā)性超敏反應(yīng)模型的耳腫程度(P<0.01)。結(jié)論癢停擦劑具有止癢、抗炎、抑制遲發(fā)超敏反應(yīng)及調(diào)節(jié)免疫功能的藥理作用。

關(guān)鍵詞：癢停擦劑；止癢；抗感染；遲發(fā)超敏反應(yīng)

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.05.024

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1003-5699(2015)05-0511-04

基金項(xiàng)目:黑龍江省應(yīng)用技術(shù)研究與開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(PC13S18)。

作者簡(jiǎn)介:張俊威(1973-),女,碩士,副研究員,從事中藥藥理研究。

收稿日期:(責(zé)任編輯：張瑞彬2014-08-15)

*通信作者:王偉明，電話-(0451)55665478，電子信箱-yjs-163163@163.com

Effect of Yangting embrocation anti-inflammatory and anti-pruritus

ZHANG Junwei,XU Qingrui,HUO Jinhai,WANG Weiming*

(Heilongjiang Academy of Traditional Chinese Medicine,Harbin 150036,China)

Abstract:ObjectiveStudy on the pharmacological effect of Yangting embrocation anti-inflammatory,anti-pruritus and antianaphylaxis.MethodsRespectively used Guinea pigs to the local itching,mice ear swelling caused by xylene and egg white in rats foot metatarsus swelling and delayed-type hypersensitivity in mice model to evaluate stop itch liniment itching,anti-inflammatory and anti-allergic effects.ResultsYangting embrocation could increase itch-threshold of cavy caused by histamine phosphate (P<0.01),reduce the rate of mouse ear swelling caused by xylene and egg white degree of swell in rats (P<0.05,P<0.01),reduce 5% DNCB to mice auricle late-onset allergic reaction model of the ear swelling degree (P<0.01).ConclusionYangting embrocation has the pharmacological effects of anti-pruritus,anti-inflammatory,antianaphylaxis,inhibiting delayed-type hypersensitivity and adjusts the immune function.

Keywords:Yangting embrocation;anti-pruritus;anti-infection;delayed-type hypersensitivity

癢停擦劑由冰片、黃柏、苦參、百部、地膚子等組成，為中藥外用酊劑，具有清熱除濕殺蟲，疏風(fēng)止癢作用，用于濕疹、皮膚瘙癢癥、蕁麻疹及過(guò)敏性皮炎等癥。癢停擦劑做為黑龍江省中醫(yī)醫(yī)院的院內(nèi)制劑在臨床應(yīng)用多年，具有良好的療效。本實(shí)驗(yàn)分別采用磷酸組胺致豚鼠局部瘙癢模型、二甲苯致小鼠耳腫、蛋清致大鼠足跖腫脹及2，4-二硝基氯苯(DNCB)致小鼠耳廓遲發(fā)性超敏反應(yīng)模型從止癢、抗炎和抗過(guò)敏作用等方面觀察癢停擦劑的藥效，為臨床應(yīng)用提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1受試藥物及試劑癢停擦劑(受試藥)，黑龍江省中醫(yī)醫(yī)院制劑室，批號(hào)：100302。復(fù)方醋酸曲安奈德溶液(陽(yáng)性對(duì)照藥)，廣東恒誠(chéng)制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H10930202。40%乙醇溶液(溶劑對(duì)照)。生理鹽水，哈爾濱三聯(lián)醫(yī)藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H23020612，批號(hào)：080513A17。2，4-二硝基氯苯(DNCB)，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號(hào)：20070713。

1.2動(dòng)物清潔級(jí)ICR小鼠，18～22 g，雌雄兼用；清潔級(jí)Wistar大鼠，180～220 g,雌雄兼用，均由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院試驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK-(吉)2007-0003。普通級(jí)豚鼠,250～350 g，雌雄各半，由哈爾濱市松北區(qū)華宇養(yǎng)殖場(chǎng)提供，合格證號(hào)SCXK-(黑)2007-003。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施使用許可證號(hào)：(黑)2006-040。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1對(duì)豚鼠局部瘙癢的影響豚鼠36只，體質(zhì)量200～250 g，常規(guī)飼養(yǎng)7 d后隨機(jī)分為6組,分別為癢停擦劑高、中、低劑量組，陽(yáng)性對(duì)照藥組，溶劑對(duì)照組和空白對(duì)照組，每組6只,雌雄各半。將各組豚鼠右后足背剃毛，用粗砂紙輕輕擦傷豚鼠剃毛處，形成面積1 cm×1 cm的表皮破損創(chuàng)面。各組豚鼠按實(shí)驗(yàn)所設(shè)劑量于創(chuàng)面處涂抹相應(yīng)藥物:癢停擦劑高、中、低劑量組分別涂抹癢停擦劑0.1，0.05，0.025 mL；陽(yáng)性對(duì)照藥組涂抹復(fù)方醋酸曲安奈德溶液0.05 mL；溶劑對(duì)照組涂抹40%乙醇溶液0.05 mL；空白對(duì)照組涂抹等容積的生理鹽水0.05 mL。給藥30 min后在創(chuàng)面處滴0.01%磷酸組織胺0.05 mL/只，此后每隔3 min按0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%遞增濃度,至出現(xiàn)豚鼠回頭舔后足為止。累計(jì)各組每只豚鼠所用磷酸組胺總量(μg)為致癢閾,以給藥后的致癢閾為評(píng)價(jià)指標(biāo)。如滴至0.1%磷酸組織胺豚鼠仍未舔后足，則以滴加總量為致癢閾。

2.2對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響清潔級(jí)ICR小鼠60只，體質(zhì)量18～22 g，常規(guī)飼養(yǎng)7 d后隨機(jī)分為6組，組別同實(shí)驗(yàn)2.1，每組10只，雌雄各半。各組小鼠按實(shí)驗(yàn)所設(shè)劑量于右耳涂抹相應(yīng)藥液：癢停擦劑高、中、低劑量組分別涂抹癢停擦劑0.1、0.05、0.025 mL；陽(yáng)性對(duì)照藥組涂抹復(fù)方醋酸曲安奈德溶液0.05 mL；溶劑對(duì)照組涂抹40%乙醇溶液0.05 mL；空白對(duì)照組涂抹等容積的生理鹽水0.05 mL。給藥30 min后，將二甲苯0.05 mL均勻涂于小鼠右耳，30 min后剪下左右耳廓，用打孔器同時(shí)取下兩耳片稱重，按下式計(jì)算小鼠耳腫脹率。

2.3對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹的影響[5]清潔級(jí)Wistar大鼠60只，體質(zhì)量180～220 g，常規(guī)飼養(yǎng)7 d后隨機(jī)分為6組，組別同實(shí)驗(yàn)2.1，每組10只，雌雄各半。各組大鼠按給藥劑量設(shè)計(jì)于右后足涂抹相應(yīng)藥液，給藥劑量同實(shí)驗(yàn)2.1。涂藥后30 min在大鼠右后肢足跖皮下注射新鮮的10%蛋清溶液0.1 mL/只，分別于致炎后0.5、1、2、4 h用無(wú)彈性的軟皮尺測(cè)量踝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)，計(jì)算足跖腫脹率(%)。

2.4對(duì)DNCB致小鼠耳廓遲發(fā)性超敏反應(yīng)的影響清潔級(jí)ICR小鼠70只，正常飼養(yǎng)7 d后隨機(jī)分為7組，分別為癢停擦劑高、中、低劑量組，陽(yáng)性對(duì)照藥組，溶劑對(duì)照組，模型對(duì)照組和空白對(duì)照組，每組10只，雌雄各半。各組小鼠致敏前24 h腹部去毛(3 cm×3 cm)，同時(shí)于小鼠左耳涂抹相應(yīng)劑量藥液，1次/d，連續(xù)9 d。給藥劑量同實(shí)驗(yàn)2.1，模型對(duì)照組涂抹0.05 mL的生理鹽水溶液。給藥第2天各組小鼠致敏：除空白對(duì)照組外，其余小鼠于腹部去毛處均勻涂抹5%的2，4-二硝基氯苯(DNCB)丙酮液致敏，空白對(duì)照組涂抹等容積的生理鹽水，2 d后強(qiáng)化1次。給藥第9天，小鼠左耳涂抹藥液30 min后，將1%DNCB丙酮液均勻涂于小鼠左耳正反兩面，建立Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)小鼠動(dòng)物模型(空白對(duì)照組涂抹生理鹽水)。于涂抹DNCB溶液1 h后處死小鼠，稱體質(zhì)量，取其胸腺、脾臟稱重，計(jì)算臟器指數(shù)；取下雙耳耳片稱重，計(jì)算耳腫脹度。

3結(jié)果與結(jié)論

3.1對(duì)豚鼠局部瘙癢的影響與空白對(duì)照組比較，陽(yáng)性對(duì)照藥組和癢停擦劑各劑量組的致癢閾明顯升高，均具有極顯著差異(P<0.01)，癢停擦劑各組的止癢作用隨著給藥劑量的增加而增強(qiáng)，呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系；溶劑對(duì)照組致癢閾雖高于空白組但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與溶劑對(duì)照組比較，癢停擦劑各劑量組致癢閾明顯升高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。提示癢停擦劑可以提高磷酸組胺對(duì)豚鼠的致癢閾，具有明顯的止癢作用，而溶劑不具有止癢作用。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2對(duì)小鼠耳腫脹率的影響與空白對(duì)照組比較，陽(yáng)性對(duì)照藥組和癢停擦劑各劑量組的小鼠耳腫脹率明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。癢停擦劑各劑量組的耳腫脹率隨著劑量的增加而降低，提示癢停擦劑具有抗炎作用且呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系。溶劑對(duì)照組與空白對(duì)照組比較，耳腫率明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但與癢停擦劑各劑量組比較，耳腫脹率明顯升高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)。說(shuō)明雖然40%乙醇溶劑有抗炎作用,但其抗炎效果明顯弱于全方，提示癢停擦劑的主要抗炎有效成分來(lái)自于全方中溶于乙醇的各藥物組分。結(jié)果見(jiàn)表2。

表1　癢停擦劑對(duì)豚鼠局部瘙癢模型的影響 ± s, n=6)

注:與空白對(duì)照組比較,## P<0.01;與溶劑對(duì)照組比較,△△ P<0.01

注：與空白對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01；與溶劑組比較，△P<0.05，△△P<0.01

3.3對(duì)大鼠足跖腫脹程度的影響與空白對(duì)照組比較，各給藥組大鼠的足跖腫脹程度均有不同程度的減輕，尤其是陽(yáng)性對(duì)照組和癢停擦劑中、高劑量組，致炎后0.5 h即可明顯減輕10%蛋清引起的大鼠足腫程度并持續(xù)至4 h，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)；溶劑對(duì)照組的足腫程度雖有降低，但至2 h后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與溶劑對(duì)照組比較，癢停擦劑各劑量組大鼠足腫程度均減輕，尤以中、高劑量組顯著(P<0.05，P<0.01)。提示癢停擦劑及其溶劑均具有抗炎作用。40%乙醇溶劑雖有一定的抗炎作用,但起效較慢，抗炎效果較弱。而癢停擦劑全方的抗炎作用起效快，作用時(shí)間持久，能快速、持續(xù)抑制炎癥引起的腫脹。 結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　癢停擦劑對(duì)大鼠足跖腫脹程度的影響 ± s, n=10)

注：與空白對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01；與溶劑對(duì)照組比較，△P<0.05，△△P<0.01

3.4對(duì)DNCB致小鼠耳廓遲發(fā)超敏反應(yīng)的影響與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠耳腫脹程度明顯升高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說(shuō)明DNCB致敏1周后經(jīng)致敏源激發(fā)可引起小鼠遲發(fā)超敏反應(yīng)，模型復(fù)制成功。與模型對(duì)照組比較，陽(yáng)性對(duì)照組和癢停擦劑各劑量組小鼠耳廓腫脹程度均明顯減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),且癢停擦劑各劑量組的腫脹程度隨著癢停擦劑給藥劑量的增加而降低，呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系。提示癢停擦劑具有抑制遲發(fā)超敏反應(yīng)的作用。陽(yáng)性對(duì)照組小鼠的脾指數(shù)和胸腺指數(shù)與空白對(duì)照組比較明顯降低，胸腺指數(shù)具有極顯著差異(P<0.01)。提示陽(yáng)性對(duì)照藥復(fù)方醋酸曲安奈德溶液可能是通過(guò)抑制T淋巴細(xì)胞的增殖而減輕超敏反應(yīng)程度,具有免疫抑制作用。而癢停擦劑各劑量組的耳腫程度雖然明顯降低，但對(duì)致敏小鼠的脾指數(shù)和胸腺指數(shù)均無(wú)影響，說(shuō)明癢停擦劑雖然可以抑制Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)引起的耳腫脹程度，但對(duì)機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫功能均無(wú)抑制作用。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4　癢停擦劑對(duì)小鼠耳廓遲發(fā)超敏反應(yīng)耳腫脹程度的影響 ± s, n=10)

注：與模型對(duì)照組比較，##P<0.01；；與溶劑對(duì)照組比較，△P<0.05,△△P<0.01

4討論

中醫(yī)認(rèn)為多因濕熱內(nèi)蘊(yùn)，復(fù)感風(fēng)邪，濕熱互結(jié)化燥生風(fēng)致癢，或濕熱郁久化生為蟲致癢，所以止癢的關(guān)鍵在于“除濕熱”，外治法則以清熱燥濕祛風(fēng)，殺蟲止癢為主[1-2]。黃柏苦寒為君，外用能燥濕斂瘡；冰片苦辛性涼為臣，外用能清熱消腫、止癢止痛，苦參清熱燥濕，地膚子祛風(fēng)止癢，百部外用止癢殺蟲，共為佐劑。5味藥以活血行血，驅(qū)風(fēng)散寒的酒劑為使，緩和諸藥的寒性，共行清熱除濕殺蟲，疏風(fēng)止癢之功效。

本實(shí)驗(yàn)中，癢停擦劑能顯著提高組胺引起的豚鼠皮膚瘙癢的致癢閾，且呈現(xiàn)出較好的量效關(guān)系，提示全方具有良好的抗組胺止癢效果。

急性炎癥是濕疹、蕁麻疹及過(guò)敏性皮炎等皮膚疾病的共同臨床癥狀。通過(guò)二甲苯致小鼠耳腫和蛋清致大鼠足跖腫脹實(shí)驗(yàn)證實(shí)，癢停擦劑能降低化學(xué)物質(zhì)引起的皮膚急性炎癥反應(yīng)程度，具有抗炎作用并呈現(xiàn)出較好的量效關(guān)系。

過(guò)敏是皮膚病的主要病因之一，目前多認(rèn)為濕疹的發(fā)病機(jī)理是由復(fù)雜的內(nèi)外激發(fā)因子引起的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)[3]。通過(guò)DNCB致敏并激發(fā)復(fù)制小鼠遲發(fā)變態(tài)反應(yīng)模型，測(cè)量激發(fā)后小鼠的耳腫脹程度和免疫器官系數(shù)的變化，觀察藥物對(duì)遲發(fā)超敏反應(yīng)的抑制程度及機(jī)體免疫機(jī)能的影響。

本實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性對(duì)照藥采用的是復(fù)方醋酸曲安奈德溶液，為醋酸曲安奈德和水楊酸的復(fù)方制劑。曲安奈德是中強(qiáng)氟化糖皮質(zhì)激素，具有外用皮質(zhì)激素的抗炎、抗過(guò)敏及收縮血管的作用，但長(zhǎng)期使用會(huì)造成激素的依賴性[4]。

通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察，證實(shí)癢停擦劑和復(fù)方醋酸曲安奈德溶液都具有良好的抗炎、止癢、抗過(guò)敏作用，但癢停擦劑對(duì)急性炎癥的抑制不僅起效更快，抑制程度更強(qiáng)而且作用時(shí)間更長(zhǎng)；復(fù)方醋酸曲安奈德溶液屬于激素類制劑，具有免疫抑制功能，通過(guò)對(duì)細(xì)胞免疫功能的抑制作用降低遲發(fā)超敏反應(yīng)引起的腫脹程度，表現(xiàn)為陽(yáng)性對(duì)照組的胸腺指數(shù)明顯降低。長(zhǎng)期使用可引起機(jī)體免疫功能的降低，增加感染機(jī)率。而癢停擦劑不僅消腫作用強(qiáng)而且對(duì)脾指數(shù)和胸腺指數(shù)均無(wú)影響，說(shuō)明其對(duì)機(jī)體免疫功能無(wú)抑制作用。

參考文獻(xiàn)：

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