■劉 勇 周繼術(shù) 吉 紅 于海波 董武子 王 濤 劉海俠

（西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，陜西楊凌 712100）

多鱗白甲魚(yú)（Varicorhinus macrolepis）屬鯉形目，鯉科，突吻魚(yú)屬[1]，又名多鱗鏟頜魚(yú)、赤鱗魚(yú)、錢(qián)魚(yú)。多鱗白甲魚(yú)主要分布于嘉陵江水系和漢水水系的中上游，淮河上游，渭河水系，伊河、洛河和山東泰山。因其獨(dú)特的地理分布和對(duì)生態(tài)環(huán)境的適應(yīng)性，被稱為魚(yú)類的“活化石”。多鱗白甲魚(yú)以其細(xì)嫩的肉質(zhì)、鮮美的味道、豐富的營(yíng)養(yǎng)以及獨(dú)特的藥用保健價(jià)值而聞名于世。然而，由于受氣候變化、水電工程、旅游開(kāi)發(fā)等因素的影響，水域生態(tài)系統(tǒng)呈碎片化或片段化人為損壞，再加上人為的過(guò)度捕撈，使野生多鱗白甲魚(yú)的棲息環(huán)境受到嚴(yán)重破壞，資源衰減，分布區(qū)域日趨縮小[2]。湖北、山東、陜西、甘肅等地已將多鱗白甲魚(yú)列為省級(jí)保護(hù)動(dòng)物。

為保護(hù)和開(kāi)發(fā)我國(guó)這一名貴經(jīng)濟(jì)魚(yú)類，已有學(xué)者對(duì)其生物學(xué)[3-4]、繁殖生態(tài)[5]、發(fā)育學(xué)[6]、肌肉營(yíng)養(yǎng)成分[7-8]、繁殖生物學(xué)[2,9-10,]、養(yǎng)殖技術(shù)[11]、疾病防治[12]等多方面進(jìn)行了研究，同時(shí)陜西省多鱗白甲魚(yú)的人工繁殖的成功也多有報(bào)道[13-14]，但該魚(yú)的成魚(yú)或親魚(yú)的營(yíng)養(yǎng)需求及其培育等方面，尤其是蛋白質(zhì)需求的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。

多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)需求是親魚(yú)繁殖期間所需營(yíng)養(yǎng)元素的基礎(chǔ)，也是提高多鱗白甲魚(yú)繁殖數(shù)量與質(zhì)量，進(jìn)而提高種群數(shù)量與促進(jìn)養(yǎng)殖業(yè)的物質(zhì)基礎(chǔ)。為了解多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)需求，本試驗(yàn)采用蛋白質(zhì)濃度梯度法，研究了不同蛋白水平對(duì)多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)生長(zhǎng)、體組成與雌魚(yú)性腺發(fā)育的影響，為開(kāi)發(fā)多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)專用配合飼料提供參考資料。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

以秘魯魚(yú)粉、肉骨粉、豆粕、菜粕等為蛋白源（購(gòu)自陜西省華秦飼料廠，陜西楊凌），大豆油為主要脂質(zhì)源，小麥麩與面粉等為淀粉料，配制成蛋白水平分別為30%、33%、36%、39%和42%的等脂5組試驗(yàn)飼料。將各種原料按比例稱重與混合后，制成直徑1.5 mm顆粒，風(fēng)干48 h后于冰箱（-20℃）保存?zhèn)溆?。飼料原料的粉碎與顆粒飼料的加工制作均在西北農(nóng)林科技大學(xué)安康水產(chǎn)試驗(yàn)示范站完成。試驗(yàn)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)飼料配方與常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分(風(fēng)干基礎(chǔ))(%)

1.2 試驗(yàn)魚(yú)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)選用3齡多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)[（26.53±0.37）g]，由嵐皋綠水生態(tài)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)有限公司提供。多鱗白甲魚(yú)經(jīng)過(guò)2周預(yù)飼養(yǎng)后，將體質(zhì)健壯、游動(dòng)力強(qiáng)且無(wú)傷病的450尾多鱗白甲魚(yú)隨機(jī)分為5組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾。將每30尾魚(yú)隨機(jī)放于15個(gè)池（120 cm×120 cm×80 cm）內(nèi)，分別飼喂以上5組試驗(yàn)飼料。養(yǎng)殖池位于陜西省嵐皋縣綠水生態(tài)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)有限公司內(nèi)，飼養(yǎng)過(guò)程中采用24 h流水養(yǎng)殖模式，每天投喂三次（7:30、13:30和18:30），以2/3以上魚(yú)不再搶食為飽食標(biāo)準(zhǔn)。每天觀察魚(yú)體活動(dòng)情況與采食情況及時(shí)調(diào)整投喂量，發(fā)現(xiàn)死魚(yú)要及時(shí)撈出、稱重并做好記錄。每天傍晚投喂后1 h內(nèi)清洗糞便和殘餌。每天測(cè)定水溫、溶氧、pH值和氨氮，飼養(yǎng)殖期間水體pH值7～8，溶氧＞7 mg/l，氨氮＜0.01 mg/l。飼養(yǎng)試驗(yàn)于2015年7月15日開(kāi)始，于9月20日結(jié)束，共66 d。

1.3 樣品采集與分析

1.3.1 魚(yú)體生長(zhǎng)性能與生物學(xué)性狀測(cè)定

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，停食1 d，用MS-222(3-氨基苯甲酸乙酯甲烷磺酸鹽）將所有試驗(yàn)魚(yú)麻醉后，測(cè)量魚(yú)體體長(zhǎng)、體重，解取魚(yú)體內(nèi)臟，分離并稱取魚(yú)體腹脂、性腺、肝胰臟、脾臟等組織器官重量，檢測(cè)魚(yú)體成活率、特定生長(zhǎng)率及腹脂指數(shù)、性腺指數(shù)等生物學(xué)性狀。

1.3.2 試驗(yàn)飼料、肌肉及全魚(yú)常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定

飼料、肌肉及全魚(yú)水分、粗蛋白、粗脂肪、灰分測(cè)定分別采用恒溫干燥法（105℃）、凱氏定氮法、索氏抽提法和馬弗爐灼燒法[15]。

1.3.3 試驗(yàn)飼料、魚(yú)體腹腔脂肪組織及魚(yú)體性腺脂肪酸組成分析

稱取0.3～0.5 g試驗(yàn)飼料或魚(yú)體組織樣品，放于10 ml離心管中，往管內(nèi)加入甲醇-氯仿（1∶2）溶液5 ml，高速勻漿機(jī)勻漿，靜止2 h，定量濾紙過(guò)濾，加4 ml蒸餾水，3 000 r/min離心 5 min，棄上清，下層40℃水浴抽干。加入1 ml色譜純正己烷溶解油脂，再加1 ml 0.4 mol KOH-甲醇混合液，混勻后靜置30 min以將脂肪酸進(jìn)行甲酯化，再加入2 ml去離子水，靜置分層后提取上層清液于1.5 ml離心管中，用進(jìn)口封口膜密封，-20℃保存待用。在氣相色譜儀（安捷倫7820a，安捷倫科技,美國(guó)）上進(jìn)行測(cè)定。檢測(cè)結(jié)果按面積歸一化法計(jì)算各種脂肪酸百分含量，飼料脂肪酸組成見(jiàn)表2。

1.3.4 雌魚(yú)性腺H.E染色與切片觀察

將多鱗白甲魚(yú)雌魚(yú)性腺用4%多聚甲醛固定后，將樣品送于楊凌示范區(qū)醫(yī)院（陜西楊凌）病理科進(jìn)行H.E染色與切片。

1.4 數(shù)據(jù)處理

本試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果均采用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（mean±S.D.）表示，用SPSS19.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），若差異顯著再作Duncan′s法多重比較檢驗(yàn)組間的差異，P＜0.05為差異顯著。

表2 試驗(yàn)飼料脂肪酸組成(%)

2 結(jié)果與分析

2.1 不同蛋白水平對(duì)多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)生長(zhǎng)與生物學(xué)性狀的影響（見(jiàn)表3）

由表3可知，不同蛋白水平下多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)生長(zhǎng)無(wú)顯著差異，魚(yú)體生物學(xué)性狀中，雌魚(yú)腹腔脂肪指數(shù)與性腺指數(shù)均隨飼料蛋白水平的增加而呈增加的趨勢(shì)，其中性腺指數(shù)在CP39組達(dá)最高水平（P＜0.05），腹腔脂肪指數(shù)隨蛋白水平上升到CP36組即呈顯著上升趨勢(shì)；除雌魚(yú)以上指標(biāo)外，雌魚(yú)的其它生物學(xué)性狀指標(biāo)與雄魚(yú)的所有已測(cè)定的生物學(xué)性狀在各蛋白水平間均無(wú)顯著差異。

2.2 不同蛋白水平對(duì)多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)全魚(yú)、肌肉與性腺組織常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響（見(jiàn)表4）

由表4可知，不同蛋白水平飼料飼喂下，全魚(yú)粗蛋白與灰分無(wú)顯著差異，而水分有先升高后下降的趨勢(shì)，在飼料蛋白水平為36%時(shí)達(dá)最高值，與之相反，脂肪則表現(xiàn)為先減少后升高的趨勢(shì)，在飼料蛋白水平為36%時(shí)達(dá)最低值；魚(yú)體肌肉的水分、粗蛋白、粗脂肪等均無(wú)顯著變化，肌肉灰分有先減少后增高的趨勢(shì)。

不同蛋白水平飼料飼喂下，魚(yú)體性腺粗蛋白含量隨飼料蛋白水平的增加而下降，由CP30組的(16.92±2.91)%下降至CP42組的(9.36±3.99)%(P＜0.05)，性腺的水分或粗脂肪在各飼料組間均無(wú)顯著差異。

表3 飼料蛋白水平對(duì)多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)生長(zhǎng)與生物學(xué)性狀的影響

表4 飼料蛋白水平對(duì)多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)全魚(yú)與肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響(風(fēng)干基，%)

2.3 飼料蛋白水平對(duì)多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)機(jī)體脂肪酸組成的影響(見(jiàn)表5～表7)

隨飼料蛋白水平的增加，魚(yú)體腹腔脂肪組織與性腺主要的脂肪酸均呈不同的變化趨勢(shì)；結(jié)合飼料脂肪酸組成來(lái)看（見(jiàn)表2），魚(yú)體腹腔脂肪組織與性腺主要的脂肪酸組成變化趨勢(shì)與飼料中脂肪酸組成相一致，如飼料中飽和脂肪酸呈上升趨勢(shì)，魚(yú)體組織中飽和脂肪酸也呈上升趨勢(shì)（見(jiàn)表5、表6）。

根據(jù)Tian等(2015)的方法，脂肪酸組成的相對(duì)值通過(guò)CORREL函數(shù)計(jì)算出皮爾森相關(guān)系數(shù)(Pearson correlation coefficient,PCC)以研究組織—飼料脂肪酸組成的相關(guān)性（見(jiàn)表7）。結(jié)果表明，隨飼料蛋白水平的增加，腹腔脂肪組織與性腺組織脂肪酸組成與飼料脂肪酸組成相關(guān)性均呈上升趨勢(shì)。

表5 飼料蛋白水平對(duì)多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)腹腔組織脂脂肪酸組成的影響(%)

表6 飼料蛋白水平對(duì)多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)性腺脂肪酸組成的影響(%)

表7 飼料蛋白水平對(duì)多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)腹腔與性腺脂肪酸組成相關(guān)性分析

2.4 多鱗白甲魚(yú)雌性親魚(yú)的性腺組織學(xué)觀察(見(jiàn)圖1)

對(duì)多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)性腺的組織學(xué)觀察可以發(fā)現(xiàn)，隨著蛋白水平的增加，雌魚(yú)卵母細(xì)胞個(gè)體越大，表現(xiàn)出發(fā)育成熟度越高，但當(dāng)?shù)鞍姿竭^(guò)高，達(dá)到39%～42%水平時(shí)，雌魚(yú)卵母細(xì)胞呈現(xiàn)一定的過(guò)熟狀態(tài)。

3 討論

圖1 飼料蛋白水平對(duì)多鱗白甲魚(yú)雌性親魚(yú)性腺的影響

3.1 不同蛋白水平對(duì)多鱗白甲魚(yú)生長(zhǎng)的影響

飼料蛋白水平的研究多用于幼魚(yú)、稚魚(yú)或者魚(yú)種階段，如青魚(yú)大規(guī)格魚(yú)種[16]、翹嘴鲌幼魚(yú)[17]與奧尼羅非魚(yú)[18]、泥鰍幼魚(yú)[19]等，飼料蛋白水平對(duì)成魚(yú)生長(zhǎng)的影響見(jiàn)于雌劍尾魚(yú)[20]。對(duì)于攝食20%、30%、40%與50%蛋白水平的雌劍尾魚(yú)而言，攝食20%和30%蛋白水平飼料的雌劍尾魚(yú)的生長(zhǎng)速度沒(méi)有差異，但投喂40%～60%蛋白組飼料試驗(yàn)魚(yú)生長(zhǎng)速度顯著高于20%蛋白組[20]，即投喂30%與40%蛋白飼料情況下雌劍尾魚(yú)的生長(zhǎng)速度沒(méi)有差異。本試驗(yàn)中，蛋白水平為30%～42%時(shí)組間多鱗白甲魚(yú)特定生長(zhǎng)率也無(wú)顯著差異，這與雌劍尾魚(yú)的生長(zhǎng)結(jié)果相一致。筆者推測(cè)，這可能與30%～42%蛋白水平對(duì)多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)生長(zhǎng)而言并無(wú)顯著差異有關(guān)外，還可能與多鱗白甲魚(yú)刮食固著藻類的食性有關(guān)[11]，即當(dāng)飼料中蛋白不夠充足時(shí)，多鱗白甲魚(yú)通過(guò)刮食養(yǎng)殖池中固著藻類以暫時(shí)彌補(bǔ)營(yíng)養(yǎng)差異。

3.2 不同蛋白水平對(duì)多鱗白甲魚(yú)生物學(xué)性狀與雌魚(yú)性腺組織學(xué)的影響

在不同蛋白水平飼料對(duì)多鱗白甲魚(yú)生物學(xué)性狀影響的檢測(cè)中，最引人關(guān)注的是雌魚(yú)的性腺指數(shù)隨飼料蛋白水平的增加而增加（表3），通過(guò)對(duì)雌魚(yú)性腺H.E染色觀察（圖1）也可以發(fā)現(xiàn)，隨著蛋白水平的增加，雌魚(yú)卵母細(xì)胞個(gè)體越大，表現(xiàn)出發(fā)育成熟度越高。因此，該研究結(jié)果可以說(shuō)明，攝入的蛋白越多,可以為性腺組織中卵黃蛋白原的合成提供更多原料,進(jìn)而促進(jìn)卵母細(xì)胞生長(zhǎng)和性腺發(fā)育，這與在異育銀鯽[21]與黃鱔[22]等的研究結(jié)果相一致。

與雌魚(yú)性腺受飼料蛋白水平的影響不同的是，多鱗白甲魚(yú)雄魚(yú)性腺指數(shù)均不受飼料蛋白水平的影響，表現(xiàn)出飼料蛋白水平對(duì)雌雄多鱗白甲魚(yú)性腺發(fā)育具有一定的差別。與此相關(guān)的是，隨飼料蛋白水平的增加，多鱗白甲魚(yú)雌魚(yú)腹腔脂肪指數(shù)也呈上升趨勢(shì)，而雄魚(yú)則無(wú)相應(yīng)的表現(xiàn)的影響，表現(xiàn)出飼料蛋白水平對(duì)雌雄多鱗白甲魚(yú)脂質(zhì)代謝或腹脂蓄積機(jī)制具有很大差異。這是否與多鱗白甲魚(yú)分批產(chǎn)卵的習(xí)性[23]有關(guān)，相關(guān)問(wèn)題尚需進(jìn)一步研究

3.3 飼料蛋白水平對(duì)多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)全魚(yú)、肌肉與性腺組織常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響

對(duì)異育銀鯽的研究發(fā)現(xiàn)，親魚(yú)性腺發(fā)育期間，蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)對(duì)其性腺營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)積累的影響可能有三個(gè)層次：第一，當(dāng)?shù)鞍讛z入不足(飼料蛋白水平低于24%)時(shí)，性腺對(duì)蛋白和脂肪的蓄積都受到影響；第二，當(dāng)?shù)鞍讛z入適中(飼料蛋白水平在24%～32%之間)時(shí)，性腺對(duì)蛋白和脂肪的積累都顯著增加；第三，當(dāng)?shù)鞍讛z入進(jìn)一步增加(飼料蛋白水平達(dá)到40%)時(shí)，可促使性腺積累更多的蛋白質(zhì)，而脂肪的蓄積不再隨飼料蛋白水平的升高而增加[21]。與此不一致的是，本試驗(yàn)中，多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)性腺粗蛋白含量呈下降趨勢(shì)（見(jiàn)表4），與此同時(shí)，全魚(yú)或肌肉粗蛋白含量在各組間均無(wú)明顯差異（見(jiàn)表4），因此，高飼料蛋白水平下多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)多攝入的蛋白營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的去向是一個(gè)重要問(wèn)題。結(jié)合高蛋白水平下，魚(yú)體腹腔脂肪指數(shù)與性腺指數(shù)的增加（見(jiàn)表3），本文作者推測(cè)，這些多攝入的蛋白質(zhì)可能通過(guò)轉(zhuǎn)化成性腺物質(zhì)，在本次飼養(yǎng)中，雌雄魚(yú)未完全分開(kāi)飼養(yǎng)的情況下通過(guò)魚(yú)體的繁殖活動(dòng)而損耗了。因此，針對(duì)這種分批產(chǎn)卵魚(yú)而言，在未來(lái)多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)的飼養(yǎng)試驗(yàn)中，雌雄親魚(yú)應(yīng)盡量分開(kāi)飼養(yǎng)，以減少試驗(yàn)誤差并能精準(zhǔn)反映飼料營(yíng)養(yǎng)元素的影響。

3.4 飼料蛋白水平對(duì)多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)機(jī)體脂肪酸組成的影響

在調(diào)配不同飼料蛋白水平的情況下，5組試驗(yàn)飼料的脂肪酸組成形成了一定的差異。多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)腹腔肪組織與性腺組織的脂肪酸組成與飼料脂肪酸組成保持一定的相似性，這與以往對(duì)大西洋鮭[24-26]、虹鱒[27]和鏡鯉[28]等的研究結(jié)果一致，反映出動(dòng)物機(jī)體組織和細(xì)胞的脂肪酸組成與飼料脂肪酸組成保持一致的特性。組織—飼料脂肪酸組成的皮爾森相關(guān)系數(shù)分析可知，隨飼料蛋白水平的增加，該相關(guān)系數(shù)呈上升趨勢(shì)（見(jiàn)表7），表現(xiàn)出高的蛋白質(zhì)水平下，魚(yú)體攝入的脂肪酸被更全面的蓄積在魚(yú)體內(nèi)。與脂肪對(duì)蛋白質(zhì)的節(jié)約[29]相對(duì)應(yīng)的是，筆者認(rèn)為，高水平攝入的蛋白質(zhì)也對(duì)食物來(lái)源的脂肪具有保全作用，從而使魚(yú)體脂肪酸組成與飼料脂肪酸組成的相關(guān)系數(shù)更高，相關(guān)機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

4 小結(jié)

飼料蛋白水平的增加不影響多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)的生長(zhǎng)，但對(duì)魚(yú)體脂肪酸組成與雌魚(yú)性腺發(fā)育有顯著影響，多鱗白甲魚(yú)親魚(yú)的蛋白需求水平以36%～39%為宜。