張　磊，王　京，林　婭，朱心玲，姚其正(.遵義醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州遵義　563003; .中國藥科大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南京　0009)

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新型含1，3，4-噁二唑啉的吡唑類化合物的合成及其抗腫瘤活性*

張磊1，王京1，林婭1，朱心玲1，姚其正2
(1.遵義醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州遵義563003; 2.中國藥科大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南京210009)

摘要:以4-甲氧基苯乙酮為原料，設(shè)計(jì)并合成了5個(gè)新型的含1，3，4-噁二唑啉的吡唑類化合物(6a～6e)，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR，13C NMR，IR和ESI-MS表征。用MTT法測定了6a～6e抑制人肝癌細(xì)胞HepG2增殖的體外活性。結(jié)果表明:3-乙?；?2-(4-乙酰氧基-3，5-二甲氧基苯基)-5-［3-(4-甲氧基苯基)-1-苯甲基-吡唑-5-基］噁二唑啉(6a)具有較好的抑制活性，其IC50為28.04 μM，優(yōu)于5-氟脲嘧啶(37.57 μM)。

關(guān)鍵詞:1，3，4-噁二唑啉;吡唑;合成;抗腫瘤活性

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近年來，吡唑類氮雜環(huán)化合物因其良好的生物活性而逐漸成為抗腫瘤新藥的研究熱點(diǎn)。Vujasinovic等［1－3］報(bào)道了以吡唑結(jié)構(gòu)為母核的3-苯基-1-芳香甲基吡唑類化合物具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，其抗腫瘤機(jī)制主要在于促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡或自噬。

1，3，4-噁二唑啉是一類重要的氮雜環(huán)化合物，其廣泛的生物活性如:抗腫瘤、抗真菌和抑制單胺氧化酶等［4－6］。據(jù)Wong等［7－8］報(bào)道，含有1，3，4-噁二唑啉母核的化合物A-105972是通過對乳腺癌、肝癌、肺癌和前列腺腫癌等多種癌細(xì)胞有較好的抑制活性。

Scheme 1

本課題組通過綴合3-苯基-1-芳香甲基吡唑與1，3，4-噁二唑兩種抗腫瘤藥效團(tuán)，合成了一系列新型的含1，3，4-噁二唑的吡唑類化合物［4］。在此基礎(chǔ)上，本文以4-甲氧基苯乙酮(1)為原料，設(shè)計(jì)并合成了5個(gè)新型的含1，3，4-噁二唑啉的吡唑類化合物(6a～6e，Scheme 1)，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR，13C NMR，IR和ESI-MS表征。用MTT法測定了6a～6e抑制人肝癌細(xì)胞HepG2增殖的體外活性。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

Mel-TEMP型熔點(diǎn)儀(溫度未校正); Bruke Avance-300 MHz型核磁共振儀(DMSO-d6為溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo));Nicolet Impact-410型紅外光譜儀(KBr壓片);Agilent 1100 LC/DAD/MSD型質(zhì)譜儀。

3-(4-甲氧基苯基)-1H-5-吡唑甲酸乙酯(2)［9］，1-芳甲基-3-(4-甲氧基苯基)吡唑-5-甲酸乙酯(3)［10］和1-芳甲基-3-(4-甲氧基苯基)吡唑-5-甲酰肼(4)［11］按文獻(xiàn)方法合成;其余所用試劑均為分析純。

1.2 6a～6e的合成(以6a為例)

在反應(yīng)瓶中依次加入乙醇5 mL，4 322 mg(1 mmol)，3，5-二甲氧基-4-羥基苯甲醛(5a)182 mg(1 mmol)和冰醋酸2滴，氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流反應(yīng)6 h(TLC檢測)。冷卻至室溫，抽濾，濾餅用冰乙醇(3×1 mL)洗滌，干燥得固體A。

在反應(yīng)瓶中加入固體A和醋酸酐5 mL，氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流反應(yīng)3 h～4 h(TLC檢測)。冷卻至室溫，倒入冰水中，劇烈攪拌至油狀物固化，過濾，濾餅用水洗滌至中性，干燥后經(jīng)硅膠柱層析［洗脫劑:V(乙酸乙酯)∶V(石油醚)=1∶8］純化得3-乙?；?2-(4-乙酰氧基-3，5-二甲氧基苯基)-5-［3-(4-甲氧基苯基)-1-苯甲基-吡唑-5-基］噁二唑啉(6a)。

用類似的方法合成6b～6e。

6a:淡黃色固體，收率66%，m.p.141℃～143℃;1H NMR δ:2.25(s，3H，COCH3)，2.29(s，3H，COCH3)，3.72(s，3H，OCH3)，3.77(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H，OCH3)，5.77～5.79(dd，J=21.5 Hz，2H，CH2in Bn)，6.79(s，2H，ArH)，6.96(d，J=8.7 Hz，2H，ArH)，7.11(s，1H)，7.23～7.36(m，6H，ArH)，7.80(d，J=8.7 Hz，2H，ArH);13C NMR δ:20.57，21.78，55.03，55.56，56.53，91.94，103.69，106.60，114.59，124.92，127.16，127.57，128.01，128.76，128.97，129.49，134.99，137.57，147.71，150.67，152.51，159.77，167.68，168.49; IR ν:3 451，3 126，2 922，2 850，1 767，1 671，1 609，1 469，1 436，1 402，1 364，1 291，1 251，1 201，1 173，1 129，1 055，953 cm－1; ESI-MS m/z:571.2{［M + H］+}。

6b:白色固體，收率70%，m.p.128℃～131 ℃;1H NMR δ:2.22(s，3H，COCH3)，2.27(s，3H，COCH3)，3.77(s，3H，COCH3)，5.71～5.83(dd，J=22.1 Hz，2H，CH2in Bn)，6.95(d，J=8.7 Hz，2H，ArH)，7.17～7.37(m，9H，ArH)，7.43(d，J=8.4 Hz，2H，ArH)，7.80(d，J=8.7 Hz，2H，ArH);13C NMR δ:21.27，21.71，55.06，55.57，91.35，106.58，114.59，122.81，124.90，127.15，127.62，128.05，128.46，128.70，129.03，134.17，137.57，147.74，150.64，152.05，159.76，167.41，169.60; IR ν:3 492，3 061，3 026，2 923，2 853，1 759，1 669，1 611，1 512，1 470，1 437，1 400，1 368，1 302，1 249，1 220，1 167，1 052，1 027，913 cm－1; ESI-MS m/z:511.2{［M +H］+}。

6c:白色固體，收率69%，m.p.149℃～151 ℃;1H NMR δ:2.23(s，3H，COCH3)，3.77(s，3H，OCH3)，5.76(s，2H，CH2in Bn)，6.95(d，J=8.6 Hz，2H，ArH)，7.21～7.36(m，7H，ArH)，7.42～7.51(m，2H，ArH)，7.74(s，1H，ArH)，7.80(d，J=8.6 Hz，2H，ArH);13C NMR δ:21.61，55.10，55.61，89.90，106.53，114.62，124.88，127.17，127.56，128.03，128.46，128.54，128.97，130.28，131.59，132.06，133.69，136.15，137.51，147.55，150.66，159.81，167.50; IR ν:3 421，3 125，3 089，3 072，3 031，3 003，2 938，2 837，2 360，2 342，1 665，1 610，1 589，1 419，1 435，1 404，1 351，1 299，1 245，1 175，1 103，1 047，1 030，976 cm－1; ESI-MS m/z:521.1{［M + H］+}。

6d:淡黃色固體，收率66%，m.p.158℃～159℃;1H NMR δ:2.22(s，3H，COCH3)，2.27(s，3H，COCH3)，3.77(s，3H，OCH3)，5.70～5.83(dd，J=24.0 Hz，2H，CH2in Bn)，6.96(d，J=8.5 Hz，2H，ArH)，7.17～7.49(m，11H，ArH)，7.80(d，J=8.5 Hz，2H，ArH);13C NMR δ:21.28，21.72，55.05，55.57，91.23，106.59，114.59，120.45，124.12，124.53，124.88，127.16，127.62，128.04，128.66，129.01，130.49，137.54，138.25，147.75，150.65，151.15，159.77，167.57，169.57; IR ν:3 421，3 132，2 923，2 825，2 359，1 760，1 661，1 613，1 471，1 446，1 412，1 365，1 302，1 248，1 212，1 178，1 052，1 026，942 cm－1; ESI-MS m/z:511.3{［M + H］+}。

6e:黃白色固體，收率74%，m.p.145℃～147℃;1H NMR δ:2.24(s，3H，COCH3)，2.26(s，3H，COCH3)，3.75(s，3H，OCH3)，3.77(s，3H，OCH3)，5.71～5.83(dd，J=21.6 Hz，2H，CH2in Bn)，6.94～6.98(m，3H，ArH)，7.12～7.37(m，9H，ArH)，7.81(d，J=8.7 Hz，2H，ArH);13C NMR δ:20.80，21.72，55.05，55.55，56.32，91.56，106.58，111.63，114.58，119.07，123.81，124.91，127.16，127.59，128.03，128.72，129.00，135.44，137.56， 140.89，147.72，150.66，151.52，159.77，167.52，168.93; IR ν:3 474，3 132，2 923，2 852，2 359，1 772，1 658，1 608，1 509，1 478，1 449，1 405，1 363，1 259，1 196，1 177，1 142，1 050，1 033，900 cm－1; ESI-MS m/z:541.3{［M + H］+}。

1.3抗腫瘤活性

以5-FU和紫杉醇為陽性藥［4］，用MTT法測定6a～6e對人肝癌細(xì)胞HepG2的體外抗增殖活性。HepG2經(jīng)消化和計(jì)數(shù)、配制為c=3.5×104個(gè)· mL－1的細(xì)胞懸液，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔100 μL;于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。用完全培養(yǎng)基稀釋藥物至所需c，每孔加入100 μL含藥培養(yǎng)基;相同條件下培養(yǎng)72 h。將96孔板用MTT染色(5 mg·mL－1，每孔20 μL)，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。棄去培養(yǎng)基，每孔加入DMSO 150 μL，輕搖10 min后測定490 nm處各孔OD值，并計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC50)。

2　結(jié)果與討論

2.1表征

(1)1H NMR

由6a～6e的1H NMR分析可見，δ 2.23處單峰為甲酰胺中甲基的特征吸收峰，δ 5.78處雙二重峰為N1-位上取代芐基中亞甲基的特征吸收峰。

(2)IR

由6a～6e的IR分析可見，3 100 cm－1附近的弱特征峰為苯環(huán)C－H鍵的伸縮振動吸收峰，1 609 cm－1處的強(qiáng)特征峰為C=N伸縮振動吸收峰，3 450 cm－1處的弱特征峰和1 671 cm－1處的強(qiáng)特征峰為酯C=O鍵的伸縮振動吸收峰，1 767 cm－1處的強(qiáng)特征峰為酰胺C=O鍵的伸縮振動吸收峰。

2.2抗腫瘤活性

6a～6g的抗腫瘤活性見表1。由表1可見，6a～6e對HepG2均有一定抑制活性。其中，6a的抑制活性最強(qiáng)，其IC50為28.04 μM，優(yōu)于陽性對照藥5-FU(37.57 μM)。初步的構(gòu)效分析表明:在6a～6e的結(jié)構(gòu)中，與噁二唑啉直接相連的苯環(huán)上連有供電子基團(tuán)時(shí)，抗腫瘤活性較強(qiáng)，供電子基團(tuán)數(shù)越多，活性越強(qiáng)，如6a和6d;但當(dāng)2，4-位取代基為吸電子基Cl時(shí)，6c活性反而優(yōu)于4-

表1　6a～6e對HepG2的抑制活性Table 1　The inhibition activities of 6a～6e against HepG2

圖1　不同c(6a)抑制HepG2增殖的倒置相差顯微鏡圖片F(xiàn)igure 1　Morphology images of different concentration of c(6a)inhibited the proliferation of HepG2

位取代基為甲氧基的6b。

圖1為c(6a)抑制HepG2增殖的倒置相差顯微鏡圖片。由圖1可見，空白組細(xì)胞數(shù)量較多，輪廓清晰且活力旺盛;實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)量隨c(6a)增大而顯著減少，且細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯皺縮或變圓等改變。

3　結(jié)論

依據(jù)藥效基團(tuán)拼合原理，設(shè)計(jì)并合成了5個(gè)新型的含1，3，4-噁二唑啉的吡唑類化合物(6a～6e)。用MTT法測定了6a～6e抑制人肝癌細(xì)胞HepG2增殖的體外活性。結(jié)果表明:3-乙酰基-2-(4-乙酰氧基-3，5-二甲氧基苯基)-5-［3-(4-甲氧基苯基)-1-苯甲基-吡唑-5-基］噁二唑啉(6a)具有較好的抑制活性，其IC50為28.04 μM，優(yōu)于陽性對照藥5-FU，具有進(jìn)一步研究的價(jià)值。

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Synthesis and Anti-tumor Activities of
Novel Pyrazole Derivatives Containing 1，3，4-Oxadiazoline

ZHANG Lei1，WANG Jing1，LIN Ya1，ZHU Xin-ling1，YAO Qi-zheng2
(1.School of Pharmacy，Zunyi Medical College，Zunyi 563003，China;
2.School of Pharmacy，China Pharmaceutical University，Nanjing 210009，China)

Abstract:Five novel pyrazole derivatives containing 1，3，4-oxadiazoline(6a～6e)were designed and synthesized from 4-methoxyacetophenone.The structures were characterized by1H NMR，13C NMR，IR and ESI-MS.The in vitro anti-tumor activities of 6a～6e were tested by MTT method.The results showed that 3-acetyl-2-(4-acetoxy-3，5-dimethoxyphenyl)-5-［3-(4-methoxyphenyl)-1-benzyl-pyrazol-5-yl］-oxadiazoline(6a)exhibited better inhibition activity against HepG2 with IC50of 28.04 μM than 5-FU(37.57 μM).

Keywords:1，3，4-oxadiazoline; pyrazole; synthesis; anti-tumor activity

通訊作者:王京，講師，Tel.0851-28609461，E-mail:wangjing0642320@126.com;姚其正，教授，Tel.025-86634730，E-mail:qz_yao@163.com

作者簡介:張磊(1986－)，男，漢族，江蘇宿遷人，博士，副教授，主要從事新藥分子設(shè)計(jì)與合成的研究。Tel.0851-28609461，E-

基金項(xiàng)目:貴州省科技廳資助項(xiàng)目{黔科合LH字［2014］7565號，黔科合LH字［2014］7557號，黔科合人才團(tuán)隊(duì)［2014］4002號}

收稿日期:2014-08-25;

修訂日期:2015-04-28

DOI:10.15952/j.cnki.cjsc.1005－1511.2015.06.0499 *

文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

中圖分類號:O626.21