秦松　張蓓

【摘要】目的建立RP-HPLC法對(duì)人工牛黃甲硝唑膠囊中甲硝唑溶出度的測(cè)定方法。方法采用C₁₈色譜柱，甲醇-水（20：80）為流動(dòng)相，流速：1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)320nm，柱溫35℃。結(jié)果甲硝唑進(jìn)樣量在0.4～4.0μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，r=0.9999，平均回收率為99.45%，RSD為0.46%（n=6）；3批次樣品溶出度檢查結(jié)果良好。結(jié)論本法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性高、專屬性強(qiáng)，符合溶出度方法的建立原則，可用于人工牛黃甲硝唑膠囊中甲硝唑溶出度的測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】人工牛黃甲硝唑膠囊；RP-HPLC法；甲硝唑；溶出度

【中圖分類號(hào)】R927 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】2095-0616（2015）21-48-04

人工牛黃甲硝唑膠囊為復(fù)方制劑，曾用名是牙痛安膠囊，主要成分是甲硝唑和人工牛黃，外加淀粉和膠囊殼等輔料組成，其中甲硝唑是對(duì)大多數(shù)厭氧菌有明顯抗炎作用，而人工牛黃起解熱抗炎作用，其制劑是臨床常用的一種抗厭氧菌藥物，用于治療急性智齒冠周炎、局部牙槽膿腫、牙髓炎、根尖周炎等有顯著療效。甲硝唑在此復(fù)方制劑的抗炎作用中起主要作用，同時(shí)溶出度作為藥品質(zhì)量的重要參考指標(biāo)，而目前我國(guó)國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中未收載其溶出度的檢查項(xiàng)目。所以，為了有效控制藥品質(zhì)量，本研究采用RP-HPLC法對(duì)人工牛黃甲硝唑膠囊中甲硝唑的溶出度測(cè)定方法進(jìn)行考核。

1儀器與材料

1.1儀器

安捷倫1260型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫）；CPA225D型電子天平（德國(guó)賽多利斯）；RCZ-8M型溶出試驗(yàn)儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）

1.2試藥

人工牛黃甲硝唑膠囊（市售品，規(guī)格：甲硝唑0.2g、人工牛黃5mg，ABC三個(gè)生產(chǎn)企業(yè)與批號(hào)分別為：靖宇天池制藥有限公司，20131106、新鄉(xiāng)恒久遠(yuǎn)藥業(yè)有限公司，20130705），重慶迪康長(zhǎng)江制藥有限公司，140226）；甲醇為一級(jí)色譜純（美國(guó)天地，1410106）；鹽酸為分析純（洛陽市化學(xué)試劑廠，140606）；水為高純水（自制）。

1.3對(duì)照品

甲硝唑?qū)φ掌放?hào)為100191-201507，來源為中國(guó)食品藥品檢定研究院，其含量為100%。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Agela Promosil C₁₈柱（4.6 mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（20：80）；檢測(cè)波長(zhǎng)：320nm；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μL；在此色譜條件下，理論板數(shù)按甲硝唑峰計(jì)算不低于2000。

2.2溶液制備

取人工牛黃甲硝唑膠囊各1粒，用鹽酸溶液（9→1000）溶解后，稀釋至900mL，搖勻，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，即得供試品溶液。精密稱取甲硝唑?qū)φ掌?0.00mg置100mL容量瓶中，用鹽酸溶液（9→1000）溶解后，稀釋至刻度，即得對(duì)照品溶液（0.2000mg/mL）。取空白膠囊殼1粒，加入按處方比例稱取的1粒膠囊量的淀粉輔料和人工牛黃約5mg，然后按供試品溶液的制備方法配制成陰性對(duì)照溶液。

2.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

在上述色譜條件下，分別取上述制備的對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液注入色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。甲硝唑峰保留時(shí)間為8.51min，在此時(shí)間對(duì)照品溶液和供試品溶液均出現(xiàn)甲硝唑色譜峰，而陰性對(duì)照溶液則在此時(shí)間段未出現(xiàn)干擾吸收峰，表明在本實(shí)驗(yàn)條件下處方中其他成分對(duì)測(cè)定無影響。

2.4方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：在上述色譜條件下，精密吸取上述對(duì)照品溶液2、5、10、15、20μL，注入液相色譜儀，測(cè)得峰面積。以對(duì)照品峰面積Y為縱坐標(biāo)，以折算后按20¨L進(jìn)樣量的對(duì)照品溶液濃度X（μg/mL）為橫坐標(biāo)（分別為20、50、100、150、200μg/mL），進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=29.680X+1.226，r=0.9999。結(jié)果表明，甲硝唑進(jìn)樣量在0.4～4.0μg范圍內(nèi)與峰面積有良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定甲硝唑的峰面積，結(jié)果甲硝唑峰面積的RSD為0.32%（n=6），表明該方法的精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液分別在配制完成后室溫放置0、4、8、12和16h時(shí)進(jìn)樣，測(cè)得峰面積RSD為0.45%（n=5），表明供試品溶液在16h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取甲硝唑?qū)φ掌?0.00mg置50mL容量瓶中，加鹽酸溶液（9→1000）適量溶解后稀釋至刻度，搖勻后作為對(duì)照品貯備溶液（0.4000mg/mL）。精密量取6份已知質(zhì)量濃度的供試品溶液（0.1947 mg/mL）各5mL，分別置6個(gè)10mL容量瓶，再精密量取對(duì)照品貯備溶液（0.4000mg/mL）1mL、2mL和3mL各2份分別置上述6個(gè)10mL容量瓶中，加鹽酸溶液（9→1000）稀釋至刻度并搖勻，分別進(jìn)樣測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

2.5溶出度測(cè)定和溶出曲線的繪制

按《中國(guó)藥典2010年版（二部）》的附錄XC第二法（槳法）操作。量取經(jīng)脫氣處理的鹽酸溶液（9→1000）900mL，倒入溶出杯，待恒溫至（37℃±0.5℃），以轉(zhuǎn)速50r/min啟動(dòng)溶出儀，取人工牛黃甲硝唑膠囊1粒裝入沉降籃，投入溶出杯中并開始計(jì)時(shí)，分別在第5、10、20、30、40、50分鐘時(shí)間點(diǎn)取溶液5mL，用0.45μm濾膜過濾后進(jìn)樣測(cè)定，并在每次取樣后立即補(bǔ)充相同溫度相同體積的鹽酸溶液（9→1000）。經(jīng)本文的RP-HPLC法測(cè)定后計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的累計(jì)溶出百分率，結(jié)果見表2。將表2的數(shù)據(jù)以時(shí)間為橫坐標(biāo)、累積溶出百分率為縱坐標(biāo)，繪制成溶出曲線。結(jié)果見圖2。由溶出曲線可見，樣品在30min時(shí)甲硝唑的溶出量達(dá)到了90%以上，按照口服制劑溶出度的要求，參考甲硝唑片已有的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的溶出度要求，考慮甲硝唑的體外一體內(nèi)相關(guān)性及不同企業(yè)工藝的影響，可確定取樣時(shí)間為30min，限度為標(biāo)示量的80%較為合適。

2.6批次樣品的溶出度檢查

分別取3批次樣品，照上述2.5的方法操作，在30min時(shí)取樣5mL，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后進(jìn)樣測(cè)定其溶出度。結(jié)果見表3。從3批次樣品的檢查結(jié)果可見，此方法測(cè)得的結(jié)果穩(wěn)定可靠，溶出度結(jié)果良好。

3討論

3.1溶出條件的選擇

在溶出方式的選擇上，一般常用轉(zhuǎn)籃法和槳法，因試驗(yàn)藥品為膠囊劑，在使用轉(zhuǎn)籃法時(shí)轉(zhuǎn)籃易被膠囊碎片堵塞，影響藥物溶出，因此選擇槳法；但因溶出過程膠囊會(huì)浮于液面而影響溶出，所以還需要使用沉降籃；槳法常用的轉(zhuǎn)速為50～75r/min，但考慮到為保證藥品質(zhì)量，以便對(duì)胃動(dòng)力減弱的患者也能有較好的治療效果，故選用轉(zhuǎn)速50f/min。在溶出介質(zhì)的選擇上，因人工牛黃甲硝唑膠囊是一種胃溶型制劑，所以選擇鹽酸溶液（9→1000）作為溶出介質(zhì)，這與其現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的含量測(cè)定項(xiàng)溶劑一致。

3.2檢測(cè)條件的選擇

據(jù)有關(guān)研究的文獻(xiàn)報(bào)道甲硝唑所用檢測(cè)波長(zhǎng)有277nm、318nm、320nm、390nm，經(jīng)比較后選擇320nm波長(zhǎng)較為理想，與甲硝唑各制劑的現(xiàn)行國(guó)家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)一致。在流動(dòng)相的選擇上，篩選了不同比例的甲醇-水，并與文獻(xiàn)報(bào)道的流動(dòng)相進(jìn)行比較，結(jié)果顯示甲醇-水（20：80）的流動(dòng)相成本低，易配制，所得的色譜圖峰形及系統(tǒng)適用性也很好。

3.3本研究方法的優(yōu)點(diǎn)

上述試驗(yàn)及一些文獻(xiàn)資料表明，不同廠家生產(chǎn)的人工牛黃甲硝唑膠囊溶出速率存在一定差別，可見在制劑生產(chǎn)工藝上有較大差異。溶出度作為制劑質(zhì)量控制的一種方式，其目的就是使不同企業(yè)生產(chǎn)的同一品種能達(dá)到一定程度的生物等效。經(jīng)本文的試驗(yàn)驗(yàn)證，RP-HPLC法測(cè)定人工牛黃甲硝唑膠囊中甲硝唑的溶出度，方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性高、專屬性強(qiáng)，可作為人工牛黃甲硝唑膠囊質(zhì)量評(píng)價(jià)與控制的有效手段。endprint