郭衛(wèi)華

人教版高中生物必修1的“生物組織中還原糖、蛋白質(zhì)的鑒定”實驗對“斐林試劑”和“雙縮脲試劑”的使用作了要求：① 斐林試劑鑒定還原糖時，必須將甲液和乙液混合均勻后使用，切勿分別加入生物組織樣液中進行檢測。② 雙縮脲試劑鑒定蛋白質(zhì)時，先向蛋白稀釋液中加入A液（1 mL），均勻，再加入B液3～4滴。針對平時學(xué)生實驗時反映出的很多問題，筆者進行了探索，旨在探究劑的使用條件，改進實驗，確保實驗順利完成。

1 實驗?zāi)康?/p>

嘗試探究斐林試劑、雙縮脲試劑的使用條件，進一步將本實驗完善，為日后教學(xué)工作的改進奠定基礎(chǔ)。

2 實驗原理

可溶性還原糖（如葡萄糖、果糖、麥芽糖）與斐林試劑發(fā)生作用，可生成磚紅色的Cu2O沉淀。

葡萄糖+Cu（OH）2葡萄糖酸+Cu2O↓（磚紅色）+H2O;

蛋白質(zhì)+雙縮脲試劑→紫色。

蛋白質(zhì)與雙縮脲試劑發(fā)生作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中含有很多肽鍵，在堿性NaOH溶液中能與雙縮脲試劑中的Cu2+作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)。

3 材料、試劑、器具

實驗材料：新鮮去皮的梨汁、生豆?jié){、熟豆?jié){。

實驗試劑：斐林試劑（甲液：質(zhì)量濃度0.1g/mL NaOH溶液;乙液：質(zhì)量濃度0.05 g/mL CuSO4溶液）、雙縮脲試劑（A液：質(zhì)量濃度0.1 g/mL NaOH溶液;B液：質(zhì)量濃度0.01 g/mL CuSO4溶液）、質(zhì)量分?jǐn)?shù)8%的鹽酸、蒸餾水等。

器具：試管、試管架、試管夾、燒杯、量筒、滴管、酒精燈、三腳架、石棉網(wǎng)、打火機等。

4 方法步驟及現(xiàn)象（表1、表2）

5 對實驗現(xiàn)象的分析

由表1的1、2號試管現(xiàn)象可看出，斐林試劑的使用順序?qū)嶒灲Y(jié)果有一定影響，但都能出現(xiàn)磚紅色沉淀，可能是待測液中的有機酸會中和一些NaOH，使產(chǎn)生的Cu（OH）2不足，所以2號試管磚紅色沉淀會少些。1、3號試管現(xiàn)象說明斐林試劑實為新制的Cu（OH）2懸濁液，不需提供酸性環(huán)境，加入鹽酸會將新的Cu（OH）2分解，致使還原糖無法和斐林試劑反應(yīng)，所以無磚紅色沉淀。從1、4號試管現(xiàn)象可知，加熱方式不同對實驗結(jié)果有一定影響，水浴加熱比直接用酒精燈加熱更理想，受熱更均勻，也更安全。1、5號試管說明只加乙液實驗無法進行，即還原糖不能單純的與Cu2+發(fā)生反應(yīng)并生成磚紅色沉淀。

由表2的1、2號試管可知，雙縮脲試劑使用順序?qū)嶒灲Y(jié)果有一定影響。1、3號試管說明加入的雙縮脲試劑B液（CuSO4）不能過量，否則藍色的Cu2+會遮蓋產(chǎn)生的紫色或致使試管底部余有Cu2+。由1、4號試管可看出，在堿性溶液中，蛋白質(zhì)才能與雙縮脲試劑中Cu2+反應(yīng)，形成紫色絡(luò)合物，也就是說蒸餾水不能代替NaOH溶液。1、5號試管可看出，豆?jié){經(jīng)煮沸仍可發(fā)生雙縮脲反應(yīng)，也進一步說明了雙縮脲試劑是和肽鍵反應(yīng)，即使蛋白質(zhì)變性了，空間結(jié)構(gòu)破壞但肽鍵未破壞，也能和雙縮脲試劑出現(xiàn)顏色反應(yīng)。

此次實驗發(fā)現(xiàn)斐林試劑和雙縮脲試劑的使用中，試劑使用順序?qū)嶒灲Y(jié)果會有一定影響但不大，而試劑的量（如雙縮脲試劑B液）對實驗結(jié)果的影響較大。此外實驗的水浴的溫度、處理時間、溶液酸堿性條件、加熱方式等都有可能影響實驗結(jié)果，所以實驗過程中要控制好無關(guān)變量。

6 實驗設(shè)計及說明

本實驗設(shè)計立足于高中生物實驗“檢測生物組織中的還原糖、蛋白質(zhì)”基礎(chǔ)之上，但又加以改進和創(chuàng)新：① 從斐林試劑的使用順序、條件要求（酸堿性）、加熱方式等方面進行設(shè)計，通過實驗讓學(xué)生能更好的理解相關(guān)的理論知識。② 針對雙縮脲試劑的使用條件及蛋白質(zhì)檢測中易出現(xiàn)的問題進行設(shè)計，通過變性和未變性蛋白質(zhì)對照，進一步說明雙縮脲反應(yīng)的本質(zhì)為“雙縮脲試劑和肽鍵反應(yīng)”，也提示雙縮脲試劑不能做為鑒定蛋白質(zhì)變性的試劑。

誠然此實驗時如果選材能更廣些（用葡萄糖等）、重復(fù)性再多些（如讓好多班都做）、實驗方案（如試管多設(shè)置）等，或許得出的結(jié)論更有說服力。

參考文獻：

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