錢正明，廖娜，李文慶，艾中，田野，李文佳

(廣東東陽(yáng)光藥業(yè)有限公司，廣東 東莞 523808)

現(xiàn)代分析技術(shù)在冬蟲(chóng)夏草質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用△

錢正明，廖娜，李文慶，艾中，田野，李文佳*

(廣東東陽(yáng)光藥業(yè)有限公司，廣東 東莞 523808)

冬蟲(chóng)夏草為我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥，其具有良好的藥用功效及經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本文介紹了現(xiàn)代分析技術(shù)在冬蟲(chóng)夏草質(zhì)量評(píng)價(jià)研究中的應(yīng)用，包括色譜技術(shù)(薄層色譜、液相色譜、氣相色譜和電泳色譜)、波譜技術(shù)(紫外-可見(jiàn)光譜、紅外光譜、核磁共振譜、原子光譜和質(zhì)譜)和分子生物技術(shù)(核酸分子鑒定技術(shù)和蛋白質(zhì)分子鑒定技術(shù))。

冬蟲(chóng)夏草；色譜技術(shù)；波譜技術(shù)；分子生物技術(shù)

冬蟲(chóng)夏草為我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥，具有補(bǔ)腎益肺、止血化痰的功能[1]?，F(xiàn)代研究表明其具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗衰老等作用[2-6]。由于冬蟲(chóng)夏草良好的藥用功效和人們健康意識(shí)的提高，近年來(lái)市場(chǎng)需求量逐年增加，供不應(yīng)求。目前市場(chǎng)上冬蟲(chóng)夏草品類繁多，質(zhì)量參差不齊，因此其品質(zhì)評(píng)價(jià)研究已經(jīng)引起了人們?cè)絹?lái)越多的重視?，F(xiàn)代分析技術(shù)也被大量運(yùn)用于冬蟲(chóng)夏草質(zhì)量評(píng)價(jià)研究，如：色譜技術(shù)、波譜技術(shù)和分子生物技術(shù)。本文就近年來(lái)現(xiàn)代分析技術(shù)在冬蟲(chóng)夏草質(zhì)量評(píng)價(jià)研究中的應(yīng)用進(jìn)行了介紹和總結(jié)，為冬蟲(chóng)夏草質(zhì)量評(píng)價(jià)研究工作提供科學(xué)參考。

1 色譜技術(shù)

色譜分析技術(shù)已成為中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中最為常用的技術(shù)，其在冬蟲(chóng)夏草定性和定量研究中得到了廣泛的應(yīng)用，主要包括薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法和電泳色譜法。

1.1 薄層色譜法

薄層色譜法具有操作方便、結(jié)果直觀、多樣品同時(shí)分析等特點(diǎn)，在冬蟲(chóng)夏草定性定量分析中均有應(yīng)用。

本研究組采用薄層色譜技術(shù)建立了鑒別冬蟲(chóng)夏草存儲(chǔ)年限的定性分析方法[7]。首先制備冬蟲(chóng)夏草供試品溶液和麥角甾醇對(duì)照品溶液，然后對(duì)供試品溶液和對(duì)照品溶液進(jìn)行薄層層析，在365 nm紫外燈下檢視，通過(guò)比較冬蟲(chóng)夏草供試品溶液中麥角甾醇斑點(diǎn)和麥角甾醇緊鄰斑點(diǎn)在薄層色譜上的亮度，即可判斷冬蟲(chóng)夏草儲(chǔ)存年限在1年以內(nèi)、2年以內(nèi)或2年以上。傅道珍[8]建立了一種可以鑒別冬蟲(chóng)夏草和4種偽品的薄層色譜分析方法，在其建立的薄層分析條件下冬蟲(chóng)夏草有8個(gè)紫紅色斑點(diǎn)，新疆蟲(chóng)草有6個(gè)紫紅色斑點(diǎn)和1個(gè)藍(lán)色斑點(diǎn)，而亞香棒蟲(chóng)草、地蠶和人工偽制品則沒(méi)有明顯斑點(diǎn)。Wu D T等[9]將薄層色譜和糖凝膠電泳技術(shù)應(yīng)用于冬蟲(chóng)夏草多糖特征分析，結(jié)果顯示冬蟲(chóng)夏草多糖中存在1，4-α-D-葡萄糖苷鍵、1，4-β-D-葡萄糖苷鍵和1，4-α-D-半乳糖苷鍵，冬蟲(chóng)夏草和蟲(chóng)草菌絲體的多糖薄層圖譜不一致。

薄層色譜在冬蟲(chóng)夏草定量分析方面也有文獻(xiàn)報(bào)道。米莉莉等[10]建立了冬蟲(chóng)夏草核苷類成分的薄層色譜定量分析方法，對(duì)冬蟲(chóng)夏草核苷類成分進(jìn)行薄層分離后，在270 nm處進(jìn)行薄層掃描測(cè)定，結(jié)果顯示冬蟲(chóng)夏草中主要核苷為腺苷和尿苷。汪寶琪等[11]采用薄層色譜技術(shù)對(duì)冬蟲(chóng)夏草中D-甘露糖進(jìn)行分離后，用高碘酸鉀-聯(lián)苯胺顯色，在295、370 nm處進(jìn)行雙波長(zhǎng)反射法鋸齒形薄層掃描，測(cè)得西藏產(chǎn)冬蟲(chóng)夏草中甘露醇的含量為8.4%。

1.2 高效液相色譜法

高效液相色譜具有分離效率高、分析速度快和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，是目前冬蟲(chóng)夏草質(zhì)量評(píng)價(jià)中運(yùn)用最多的分析技術(shù)。同時(shí)高效液相色譜技術(shù)可以根據(jù)分析物性質(zhì)的不同采用不同檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)分析。

紫外檢測(cè)器是液相色譜最常用的檢測(cè)器，通常用來(lái)檢測(cè)具有紫外吸收的物質(zhì)，如冬蟲(chóng)夏草中的核苷類和甾醇類化合物。核苷類成分腺苷是《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定的冬蟲(chóng)夏草含量測(cè)定項(xiàng)的指標(biāo)[1]，其分析通常采用反相色譜模式分離，檢測(cè)波長(zhǎng)多為260 nm[12-14]。本研究組[12]建立了高效液相色譜-紫外檢測(cè)法同時(shí)測(cè)定冬蟲(chóng)夏草中5種核苷類成分的含量，色譜柱為ZORBAX SB-Aq，檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm，并用所建立的方法對(duì)6批冬蟲(chóng)夏草樣本的不同部位進(jìn)行了核苷含量測(cè)定，結(jié)果顯示冬蟲(chóng)夏草子座中總核苷含量>全草總核苷含量>蟲(chóng)體總核苷含量。常規(guī)液相色譜柱分析冬蟲(chóng)夏草核苷類成分耗時(shí)較長(zhǎng)，需30～60 min[13-14]。本研究組[15]在前期研究基礎(chǔ)上利用高效液相色譜-紫外檢測(cè)技術(shù)建立了一種快速分析冬蟲(chóng)夏草中核苷類成分的方法，色譜柱為Poroshell，檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm，在15 min內(nèi)完成了6種核苷成分(尿嘧啶、尿苷、肌苷、鳥(niǎo)苷、腺苷和蟲(chóng)草素)的分離，并成功運(yùn)用于冬蟲(chóng)夏草樣本中的核苷含量的測(cè)定。甾醇也是冬蟲(chóng)夏草中的一類重要活性成分，通常采用反相液相模式進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)在280 nm左右。張薇薇等[16]測(cè)定了11批冬蟲(chóng)夏草中麥角甾醇的含量，結(jié)果顯示不同批次間冬蟲(chóng)夏草麥角甾醇含量差異明顯。此外，也有報(bào)道用高效液相色譜-紫外檢測(cè)技術(shù)結(jié)合柱前衍生的方法分析冬蟲(chóng)夏草中原本無(wú)紫外吸收的化合物。Guan J等[17]采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生結(jié)合高效液相-紫外檢測(cè)器的方法，對(duì)冬蟲(chóng)夏草多糖酶解后的單糖成分進(jìn)行了分析。王麗等[18]采用柱前鄰苯二甲醛和氯甲酸芴甲酯在線自動(dòng)衍生結(jié)合高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器-熒光檢測(cè)器的方法，對(duì)5種不同產(chǎn)地的冬蟲(chóng)夏草氨基酸含量進(jìn)行了分析。

冬蟲(chóng)夏草中沒(méi)有紫外吸收的化合物，通常使用示差折光檢測(cè)器(RID)和蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)進(jìn)行檢測(cè)。劉謀盛等[19]建立了HPLC-RID法測(cè)定冬蟲(chóng)夏草中甘露醇含量，樣品水提液經(jīng)反相C18柱預(yù)分離后，采用陽(yáng)離子交換柱進(jìn)行分離，RID檢測(cè)，結(jié)果顯示2個(gè)冬蟲(chóng)夏草樣本中甘露醇含量分別為6.52%和6.38%。周丹蕾[20]采用HPLC-ELSD對(duì)冬蟲(chóng)夏草中海藻糖、甘露醇和麥芽三糖進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示該方法不僅可用于多個(gè)糖類成分的同時(shí)測(cè)定，同時(shí)還首次發(fā)現(xiàn)了冬蟲(chóng)夏草中海藻糖的存在。Guan J等[21]采用HPLC-ELSD對(duì)冬蟲(chóng)夏草水溶性多糖進(jìn)行了分析，測(cè)試樣本經(jīng)由凝膠柱分離，ELSD檢測(cè)，結(jié)果顯示冬蟲(chóng)夏草水溶性多糖主要分為2個(gè)色譜峰，第一個(gè)多糖峰分子量大于400 kDa，第二個(gè)多糖峰分子量在10～80 kDa。

質(zhì)譜檢測(cè)器具有能提供結(jié)構(gòu)信息、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。本研究組[22]采用高效液相-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(HPLC-QTOF/MS)建立了冬蟲(chóng)夏草高效液相特征圖譜，利用和對(duì)照品或文獻(xiàn)核對(duì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)的方法，鑒定了其中的9個(gè)化合物，包括尿嘧啶、尿苷、肌苷、鳥(niǎo)嘌呤、鳥(niǎo)苷、脫氧鳥(niǎo)苷、腺苷、腺嘌呤和蟲(chóng)草素，其中脫氧鳥(niǎo)苷為首次從冬蟲(chóng)夏草中發(fā)現(xiàn)。Fan H等[23]采用高效液相-質(zhì)譜技術(shù)(HPLC-MS)對(duì)冬蟲(chóng)夏草中的核苷類成分進(jìn)行定性和定量分析，樣品采用加壓溶劑萃取法提取，經(jīng)ZORBAX Eclipse XDB-C18柱分離后MS檢測(cè)，結(jié)果在冬蟲(chóng)夏草中檢測(cè)出43種核苷類化合物，鑒定了其中的16種成分，并對(duì)13種核苷類成分進(jìn)行了定量分析，結(jié)果顯示質(zhì)譜檢測(cè)器定量具有準(zhǔn)確靈敏的優(yōu)點(diǎn)。Hu H K等[24]采用高效液相-質(zhì)譜技術(shù)對(duì)冬蟲(chóng)夏草樣品進(jìn)行了分析，并在冬蟲(chóng)夏草樣品中首次發(fā)現(xiàn)了環(huán)丙氨酸-亮氨酸-鼠李糖苷和苯丙氨酸-葡萄糖苷。

液相色譜可以同時(shí)連接多個(gè)檢測(cè)器，對(duì)冬蟲(chóng)夏草中的多類成分同時(shí)進(jìn)行分析。顧振宇等[25]采用HPLC-DAD-RID法同時(shí)分析了冬蟲(chóng)夏草中蟲(chóng)草素和蟲(chóng)草酸的含量，蟲(chóng)草素采用紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，蟲(chóng)草酸則用示差檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。Wang S等[26]建立了一種HPLC-DAD-ELSD聯(lián)用同時(shí)定量分析冬蟲(chóng)夏草中8種核苷及其堿基、3種糖類及多球殼菌素的方法，采用Prevail Carbohydrate ES糖柱對(duì)冬蟲(chóng)夏草中的成分進(jìn)行分離，使用DAD在254 nm處檢測(cè)核苷類成分，ELSD檢測(cè)糖類及多球殼菌素。陳林琤等[27]采用HPLC-UV-MS法對(duì)西藏冬蟲(chóng)夏草中的麥角固醇及其衍生物進(jìn)行了定性定量分析，首先用高效液相-質(zhì)譜對(duì)冬蟲(chóng)夏草提取物液中的化合物進(jìn)行定性分析，對(duì)冬蟲(chóng)夏草中麥角固醇及其衍生物進(jìn)行了質(zhì)譜鑒定，并用高效液相-紫外檢測(cè)器技術(shù)對(duì)其中的麥角固醇進(jìn)行了含量測(cè)定。

1.3 氣相色譜法

氣相色譜(GC)是一種以氣體為流動(dòng)相的色譜法，由于其靈敏度高、分析速度快、樣品量少而得到廣泛的應(yīng)用。冬蟲(chóng)夏草中的脂肪酸、甾醇、糖類及揮發(fā)性成分均可用GC進(jìn)行分析。

Yang F Q等[28]采用氣相色譜技術(shù)對(duì)冬蟲(chóng)夏草中4種甾醇和10種脂肪酸進(jìn)行了定量分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)棕櫚酸、亞油酸、油酸、硬脂酸是冬蟲(chóng)夏草中主要的脂肪酸，麥角甾醇是其主要的甾醇類化合物。Guan J等[29]建立了GC-MS分析冬蟲(chóng)夏草中的糖類成分的方法，通過(guò)加壓溶劑萃取法提取冬蟲(chóng)夏草中多糖，三氟乙酸水解，鹽酸羥胺衍生化，然后采用GC-MS進(jìn)行分析檢測(cè)，結(jié)果顯示冬蟲(chóng)夏草中多糖的主要組成糖為葡萄糖、半乳糖和甘露糖。凌建亞等[30]采用超臨界CO2萃取結(jié)合GC-MS技術(shù)對(duì)冬蟲(chóng)夏草子座中揮發(fā)性成分進(jìn)行了分析，從中鑒定了39種化合物，它們主要為不飽和脂肪酸、飽和脂肪酸、酯及烷烴類化合物。

1.4 電泳色譜法

電泳色譜是指根據(jù)化合物在單位電場(chǎng)強(qiáng)度作用下遷移速度的不同從而達(dá)到分離的分析方法。目前在冬蟲(chóng)夏草分析中較為常用的有毛細(xì)管電泳和平板電泳。

1.4.1 毛細(xì)管電泳法 毛細(xì)管電泳(CE)具有高效、快速、有機(jī)溶劑消耗少等特點(diǎn)。Gong Y X等[31]采用高效毛細(xì)管區(qū)帶電泳法同時(shí)分析了冬蟲(chóng)夏草中6種核苷和堿基，發(fā)現(xiàn)緩沖液濃度、pH值和改性劑乙腈的濃度是影響實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵性因素，并確定了最佳實(shí)驗(yàn)條件，電泳緩沖鹽為500 mmol·L-1硼酸，pH值為8.6，改性劑乙腈為12.2%。Yang F Q等[32]利用CE-MS聯(lián)用技術(shù)建立了同時(shí)測(cè)定冬蟲(chóng)夏草中包括胞嘧啶、腺嘌呤、蟲(chóng)草素、腺苷等12種核苷及堿基的定量分析方法，分析結(jié)果顯示CE-MS不僅具有CE的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)兼?zhèn)淞薓S定性及高靈敏度的優(yōu)勢(shì)。此外，毛細(xì)管電泳色譜(CEC)也被成功運(yùn)用于冬蟲(chóng)夏草核苷類成分的定量分析[33]。

1.4.2 平板電泳技術(shù) 任艷等[34]運(yùn)用雙向電泳技術(shù)對(duì)不同產(chǎn)地、不同加工方式的冬蟲(chóng)夏草中可溶性蛋白質(zhì)進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地和不同加工方法會(huì)造成冬蟲(chóng)夏草的可溶性蛋白的差異。石繼紅等[35]采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法對(duì)天然冬蟲(chóng)夏草和冬蟲(chóng)夏草菌絲體中的蛋白質(zhì)亞基進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)天然冬蟲(chóng)夏草中含有9種亞基，而后者只有7種。

2 波譜技術(shù)

波譜分析是現(xiàn)代分析中一類極其重要的分析手段，其主要利用物質(zhì)的波譜特征進(jìn)行定性或定量分析。常見(jiàn)的波譜分析方法包括紫外-可見(jiàn)光譜、紅外光譜、核磁共振譜、原子光譜和質(zhì)譜。

2.1 紫外-可見(jiàn)光譜

該法是根據(jù)待測(cè)物溶液對(duì)紫外光的吸收特性所建立起來(lái)的一種定性和定量分析方法。紫外光譜具有操作簡(jiǎn)單和儀器普及的優(yōu)點(diǎn)。本研究組利用紫外光譜技術(shù)開(kāi)發(fā)了定性鑒別冬蟲(chóng)夏草中是否混有發(fā)酵冬蟲(chóng)夏草菌粉的分析方法[36]。首先將一定濃度的腺苷溶液作為參比溶液在220～350 nm進(jìn)行紫外掃描，再對(duì)待測(cè)冬蟲(chóng)夏草粉末樣本30%乙醇提取液進(jìn)行紫外掃描，觀察其紫外光譜在275～250 nm區(qū)段內(nèi)是否存在負(fù)吸收值，如果樣本無(wú)負(fù)吸收值則表明冬蟲(chóng)夏草粉末中混入了發(fā)酵冬蟲(chóng)夏草粉。此外也有文獻(xiàn)報(bào)道利用紫外光譜技術(shù)對(duì)冬蟲(chóng)夏草與其他蟲(chóng)草進(jìn)行定性鑒別分析，如冬蟲(chóng)夏草95%乙醇提取液在200～400 nm波長(zhǎng)有4個(gè)最大吸收波長(zhǎng)，而亞香棒蟲(chóng)草95%乙醇提取液在此波段只有兩個(gè)最大吸收波長(zhǎng)[37]。

紫外-可見(jiàn)光譜除了用于冬蟲(chóng)夏草定性鑒別外，還被用于冬蟲(chóng)夏草活性成分的含量測(cè)定。索菲婭等[38]建立了冬蟲(chóng)夏草中甘露醇、多糖含量的紫外測(cè)定法，以高碘酸鈉為反應(yīng)試劑在412 nm處測(cè)定D-甘露醇的含量；苯酚-硫酸為反應(yīng)試劑在490 nm處測(cè)定冬蟲(chóng)夏草多糖含量，并用所建立的方法對(duì)3個(gè)不同產(chǎn)地冬蟲(chóng)夏草樣本中的甘露醇和多糖進(jìn)行了含量測(cè)定。白云娥等[39]用硫酸-蒽酮作為反應(yīng)試劑，以624 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)也成功建立了冬蟲(chóng)夏草多糖含量測(cè)定方法。

2.2 紅外光譜

紅外光譜是根據(jù)化合物在紅外光照射下，分子中的化學(xué)鍵或官能團(tuán)振動(dòng)的原理來(lái)顯示結(jié)構(gòu)信息。根據(jù)波長(zhǎng)的不同可分為近紅外光譜、中紅外光譜和遠(yuǎn)紅外光譜。目前應(yīng)用在冬蟲(chóng)夏草質(zhì)量評(píng)價(jià)研究中的技術(shù)主要為近紅外光譜技術(shù)和中紅外光譜技術(shù)。

王鋼力等[40]建立了冬蟲(chóng)夏草近紅外光特征譜，并用TQ定量分析軟件對(duì)102批不同產(chǎn)地(青海和西藏)冬蟲(chóng)夏草樣品近紅外光譜進(jìn)行了判別分析，結(jié)果顯示所建立方法可以對(duì)不同產(chǎn)地的冬蟲(chóng)夏草進(jìn)行較好的區(qū)分。石巖等[41]利用近紅外光譜技術(shù)建立了冬蟲(chóng)夏草中總氨基酸及主要氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸和精氨酸)的含量測(cè)定方法，首先對(duì)樣本特征波段的近紅外光譜數(shù)據(jù)和通過(guò)氨基酸自動(dòng)分析儀獲得的總氨基酸及各氨基酸含量數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)學(xué)建模，獲得相關(guān)數(shù)學(xué)模型；然后利用所得數(shù)學(xué)模型和待測(cè)冬蟲(chóng)夏草樣本近紅外光譜數(shù)據(jù)即可獲得待測(cè)樣本的氨基酸含量。此外，Xie C Q等[42]采用傅里葉變換近紅外技術(shù)對(duì)發(fā)酵冬蟲(chóng)夏草菌絲體中精氨酸的含量進(jìn)行了測(cè)定。

宋文軍[43]運(yùn)用中紅外光譜技術(shù)對(duì)冬蟲(chóng)夏草進(jìn)行了分析，得到了冬蟲(chóng)夏草的特征吸收峰，分別為脂類(1746、1656 cm-1)、蛋白質(zhì)(1549、1155 cm-1)和多糖(1082、1023 cm-1)。Yang P等[44]對(duì)冬蟲(chóng)夏草和偽品(地蠶和草石蠶)進(jìn)行了二維紅外圖譜分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)冬蟲(chóng)夏草二維紅外光譜670～780 cm-1×1400～1700 cm-1段的吸收峰可用于鑒別冬蟲(chóng)夏草和偽品，正品冬蟲(chóng)夏草在該波段有數(shù)個(gè)顯著的峰值，而偽蟲(chóng)草則無(wú)顯著峰值。

2.3 核磁共振譜

核磁共振譜是利用化合物原子核對(duì)射頻輻射的吸收而建立起來(lái)的波譜技術(shù)，它是目前對(duì)化合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行定性、定量分析的最強(qiáng)有力的工具之一。本研究組[45]通過(guò)對(duì)21批野生冬蟲(chóng)夏草(西藏7批、青海7批和四川7批)進(jìn)行氫譜分析，建立了冬蟲(chóng)夏草核磁特征圖譜，并找到了其核磁特征吸收峰；再利用所建立的冬蟲(chóng)夏草特征譜圖對(duì)30批冬蟲(chóng)夏草野生撫育品和4種冬蟲(chóng)夏草混淆品(中華被毛孢菌絲粉、蟲(chóng)草花、蟬花、蝙蝠蛾擬青霉菌絲粉)進(jìn)行核磁譜特征峰對(duì)比分析，結(jié)果表明野生冬蟲(chóng)夏草和冬蟲(chóng)夏草野生撫育品核磁特征譜特征峰一致，而冬蟲(chóng)夏草混淆品則存在明顯的核磁特征峰缺失，因此該方法可用于定性鑒別冬蟲(chóng)夏草真?zhèn)?。Nie S P等[46]使用核磁共振技術(shù)對(duì)冬蟲(chóng)夏草多糖進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示冬蟲(chóng)夏草極性多糖的主鏈?zhǔn)怯善咸烟且?-4和1-3糖苷鍵連接，支鏈的葡萄糖主要連接在主鏈葡萄糖的2、6位上，微量甘露糖和半乳糖一般隨機(jī)連接在支鏈上。

2.4 原子光譜

原子光譜是由原子中的電子在能量變化時(shí)所發(fā)射或吸收的一系列波長(zhǎng)的光所形成的光譜。其包括原子吸收光譜、原子發(fā)射光譜和原子熒光光譜。原子吸收光譜具有選擇性強(qiáng)、靈敏度高和分析范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，已被成功應(yīng)用于冬蟲(chóng)夏草微量元素和重金屬元素的測(cè)定。卑占宇等[47]利用該技術(shù)成功分析了冬蟲(chóng)夏草中6種微量元素(鐵、銅、鋅、錳、鎂、鈣)的含量。王鋼力等[48]用原子吸收分光光度法對(duì)14批不同產(chǎn)地冬蟲(chóng)夏草中的砷、汞、銅、鉛和鎘的殘留量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果顯示所有冬蟲(chóng)夏草樣本中汞、銅、鉛和鎘的殘留量較低，但砷的含量14批樣品中有13批超過(guò)藥用植物及制劑綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。此外，原子發(fā)射光譜和原子熒光光譜也有用于冬蟲(chóng)夏草微量元素和重金屬殘留分析。韓濤等[49]用電感耦合等離子體-原子發(fā)射光譜法(ICP-AES)測(cè)定冬蟲(chóng)夏草中微量元素(鈣、鉀、鎂、鈉、磷、銅、鐵、錳、鎳、鋅、砷、鎘)含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)冬蟲(chóng)夏草中鈉、磷、鈣、鉀、鎂含量豐富。師存杰等[50]采用原子熒光光譜法測(cè)定冬蟲(chóng)夏草中砷和汞，并成功運(yùn)用于4個(gè)冬蟲(chóng)夏草樣本的檢測(cè)。

2.5 電感耦合等離子體質(zhì)譜

電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)具有靈敏度高、同時(shí)測(cè)定多元素及測(cè)定同位素比值的優(yōu)點(diǎn)。潘清靈等[51]用微波消解ICP-MS法測(cè)定22個(gè)西藏不同地區(qū)的冬蟲(chóng)夏草中12種微量元素，結(jié)果顯示對(duì)人體有益的鉀、鈉、鈣、鎂、鋁、鐵元素在冬蟲(chóng)夏草中含量較為豐富。汪瓊等[52]也用該技術(shù)對(duì)冬蟲(chóng)夏草不同部位中的30個(gè)微量元素進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示冬蟲(chóng)夏草中含有11種人體必需的微量元素(釩、鉻、錳、鐵、鈷、鎳、銅、鋅、硒、鉬、錫)，其子座和蟲(chóng)體中微量元素的含量差異較大。

3 分子生物學(xué)技術(shù)

分子生物學(xué)技術(shù)在冬蟲(chóng)夏草質(zhì)量研究中主要用于其真?zhèn)舞b別。按照技術(shù)特征可以分為核酸分子鑒定技術(shù)和蛋白質(zhì)分子鑒定技術(shù)，該內(nèi)容本研究組在前期發(fā)表的論文中已進(jìn)行了詳細(xì)綜述[53]，在此僅作簡(jiǎn)單總結(jié)。核酸分子鑒定技術(shù)在冬蟲(chóng)夏草中的應(yīng)用主要包括：基于ITS序列的條形碼技術(shù)、基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)分子鑒定技術(shù)及環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法(LAMP)鑒定技術(shù)[54-58]。Li X等[54]采用基于ITS序列的條形碼技術(shù)成功鑒別冬蟲(chóng)夏草和5種偽品(古尼蟲(chóng)草、蟬蛹草、垂蟲(chóng)草、蛹蟲(chóng)草和羅伯茨蟲(chóng)草)。PCR分子鑒定技術(shù)在冬蟲(chóng)夏草中的應(yīng)用包括隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性技術(shù)(RAPD)和擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)(AFLP)，F(xiàn)eng K等[55]利用RAPD技術(shù)對(duì)冬蟲(chóng)夏草及其混淆品進(jìn)行了很好的區(qū)分。Wong Y L等[56]利用PCR結(jié)合側(cè)向流層析技術(shù)建立了快速鑒別冬蟲(chóng)夏草和偽品(古尼蟲(chóng)草和蛹蟲(chóng)草)的分析方法。李奎等[59]采用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)實(shí)現(xiàn)了冬蟲(chóng)夏草特異性擴(kuò)增，可用于區(qū)別冬蟲(chóng)夏草混淆品。此外，李楊[60]利用蛋白免疫技術(shù)對(duì)冬蟲(chóng)夏草進(jìn)行了鑒別研究，首先對(duì)冬蟲(chóng)夏草中的抗原進(jìn)行提取、純化，并制備抗體，采用金標(biāo)法檢測(cè)待測(cè)樣本中冬蟲(chóng)夏草抗原，由此判定冬蟲(chóng)夏草的真?zhèn)巍?/p>

4 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，大量現(xiàn)代化分析技術(shù)被運(yùn)用于冬蟲(chóng)夏草的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究，這為市場(chǎng)上冬蟲(chóng)夏草及其相關(guān)產(chǎn)品的品質(zhì)評(píng)價(jià)提供了技術(shù)支撐，有利于提升冬蟲(chóng)夏草行業(yè)的質(zhì)量評(píng)價(jià)水平。但目前報(bào)道的冬蟲(chóng)夏草分析方法大多集中于成分的分析，對(duì)其性狀評(píng)價(jià)仍然為傳統(tǒng)方法，存在著主觀經(jīng)驗(yàn)為主，難以客觀化和標(biāo)準(zhǔn)化的問(wèn)題。現(xiàn)代感官評(píng)價(jià)技術(shù)，如電子鼻、電子舌和電子眼等現(xiàn)代技術(shù)可以彌補(bǔ)以上缺點(diǎn)，近年來(lái)這些技術(shù)已有報(bào)道應(yīng)用于其他中藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究[61-63]，未來(lái)也可嘗試用于冬蟲(chóng)夏草的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究?？傊?，冬蟲(chóng)夏草質(zhì)量評(píng)價(jià)研究將隨著現(xiàn)代分析技術(shù)的發(fā)展不斷完善，新技術(shù)的應(yīng)用及多技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用將成為冬蟲(chóng)夏草質(zhì)量評(píng)價(jià)方法發(fā)展的重要方向。

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ApplicationofModernInstrumentalAnalyticalTechniquesinQualityEvaluationofCordycepssinensis

QIAN Zhengming，LIAONa，LIWenqing，AIZhong，TIANYe，LIWenjia*

(GuangdongSunshineLakePharmaCo.，LTD，Dongguan523808，China)

Cordycepssinensisis a traditional and valuable Chinese medicine，which has a good medicinal and economic value.This paper reviewed the modern instrumental analytical techniques in quality evaluation ofC.sinensis，including chromatographic technique (thin layer chromatography，high performance liquid chromatography，gas chromatography and electrophoresis)，spectroscopic technique (ultraviolet spectroscopy，infrared spectroscopy，nuclear magnetic resonance spectroscopy，atomic spectroscopy and mass spectrum) and molecular biological technique (identification of nucleic acid and protein).

Cordycepssinensis；chromatographic technique；spectroscopic technique；molecular biological technique

2015-09-25)

中醫(yī)藥行業(yè)科研專項(xiàng)(201507002)

*

李文佳，工程師，研究方向：中藥資源與開(kāi)發(fā)；E-mail：liwenjia@hecpharm.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.5.032