梁牧豐

（長春市綠園區(qū)城西醫(yī)院，吉林 長春 130062）

高密度脂蛋白膽固醇的檢測方法及臨床應(yīng)用

梁牧豐

（長春市綠園區(qū)城西醫(yī)院，吉林 長春 130062）

目的不同HDL-C檢測方法的臨床應(yīng)用評(píng)估。方法依據(jù)超速離心法、電泳法、化學(xué)沉淀法和均相測定法操作標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行HDL-C含量測定，以NECP標(biāo)準(zhǔn)比較四種檢測方法的精確度和變異系數(shù)。結(jié)果超速離心法耗時(shí)耗力，精密度較低；電泳法樣品用量少，不適用于大規(guī)模樣本檢測；沉淀法方便快捷且精密度最高，適用于臨床研究；均相法可完全自動(dòng)化檢測大規(guī)模樣本。結(jié)論四種方法精密度均在NECP允許誤差范圍內(nèi)。臨床檢驗(yàn)中，需根據(jù)樣本數(shù)量、專業(yè)水平和儀器試劑等多方面因素選擇最適宜的HDL-C檢測方法。

HDL-C；檢測方法；臨床應(yīng)用

流行病學(xué)研究顯示，高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）表達(dá)水平與冠心病、肝硬化和動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病率成負(fù)相關(guān)關(guān)系，即HDL-C表達(dá)水平降低，疾病發(fā)病率會(huì)隨之增加。因此，臨床檢測HDL-C體內(nèi)含量具有極其重要的臨床價(jià)值和意義。

1 HDL-C檢測方法

近年來，HDL-C檢測方法受到了國內(nèi)外廣泛關(guān)注，在臨床實(shí)驗(yàn)室中已常規(guī)化。HDL-C檢測方法主要包括超速離心法、電泳法、化學(xué)沉淀法和均相測定法。

1.1 超速離心法：美國疾病控制與預(yù)防中心和美國國家膽固醇教育計(jì)劃（NECP）都將超速離心法定為HDL-C測定推薦參考方法。超速離心法分為三步：①超速離心去除富含TG的脂蛋白；②懸浮液用肝素-MnCl2處理，離心除去富含apoB的脂蛋白；③用ALBK法測定上清中HDL-C含量。超速離心法操作嚴(yán)格且較為復(fù)雜，耗時(shí)長且技術(shù)要求高，因此這種檢測方法不適用于大規(guī)模樣本檢測。

1.2 電泳法：由于脂蛋白分子大小及其所帶電荷數(shù)不同，因此在一定電場條件下具有不同的遷移率。血清中脂蛋白根據(jù)遷移速率不同可分為HDL、VLDL和LDL。HDL的分子量較小，具有較高的陽極遷移率，可與其他脂蛋白分開。HDL用choI基質(zhì)試劑孵育后10%乙酸固定，然后在570 nm波長下掃描確定HDL-C含量。此法可用于高TG標(biāo)本檢測，多用于臨床研究。

1.3 化學(xué)沉淀法：沉淀劑（如硫酸葡聚糖、聚乙二醇等）可以選擇性與含有apoB脂蛋白（除HDL-C）聚合，HDL-C則溶解在上清液中，可用酶法測定其含量。中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)建議磷鎢酸鎂沉淀法為HDL-C檢測推薦方法[1]，但由于其檢測樣本用量大，檢測過程無法完全自動(dòng)化，因此該檢測法存在使用局限性?；瘜W(xué)沉淀檢測方法操作簡單且價(jià)格便宜，NCEP推薦其為HDL-C常規(guī)檢測方法。但是該檢測法也存在著極大缺點(diǎn)，只能適用于實(shí)驗(yàn)室研究使用，并不適合大規(guī)?；蚺R床大批量樣本的檢測。

1.4 均相測定法：均相法也稱直接檢測法，指以化學(xué)和免疫學(xué)為理論基礎(chǔ)，不需要沉淀預(yù)處理能夠用儀器自動(dòng)化分析的檢測方法。①聚乙二醇修飾酶法（PEGME法）即硫酸α-環(huán)糊精、DS、Mg2+與非HDL的脂蛋白形成聚合物沉淀，同時(shí)用PEG對(duì)酶進(jìn)行修飾，修飾酶（對(duì)HDL選擇性最大）與HDL直接作用，從而測定HDL-C含量。②免疫分離法（IS 法）包括PEG/抗體包裹法和抗體免疫分離法，日本國際試劑公司和日本和光制藥公司分別研發(fā)出可供上述方法自動(dòng)檢測的商品化試劑盒。③選擇性抑制法（PPD）是指用聚陰離子和某種表面活性劑能與脂蛋白（包含HDL）聚合，而另一種表面活性劑能夠特異性的溶解HDL，然后用酶試劑檢測溶液中HDL-C含量。④清除法分為反應(yīng)促進(jìn)劑-過氧化物酶清除法和過氧化氫酶清除法。均相法的優(yōu)點(diǎn)是需要血清樣本量較小，能夠?qū)崿F(xiàn)完全自動(dòng)化，可進(jìn)行大規(guī)模檢測，適用于臨床HDL-C檢測。

2 臨床資料

2001年NECP修改了成人體內(nèi)HDL-C水平劃分標(biāo)準(zhǔn)，定義HDL-C＜1.04 mmol/L時(shí)為降低，存在冠心病[2]、肝硬化和動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。依據(jù)NCEP標(biāo)準(zhǔn)化程序規(guī)定，HDL-C檢測方法總誤差在13%以內(nèi)；其密度＜1.09 mmol/L時(shí)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤5%；密度≥1.09 mmol/L時(shí)變異系數(shù) CV≤4%[3]。

2.1 一般資料：我院選取2014年10月至2015年4月共280例健康體檢者血清樣本，平均分成四組，每組70例。

2.2 方法和結(jié)果：第一組實(shí)驗(yàn)：取5 mL血清樣品，用超速離心法檢測HDL-C含量。專業(yè)工作人員用時(shí)4 d完成此組樣本檢測。結(jié)果顯示，健康體檢者中61例HDL-C含量＞1.09 mmol/L，SD=4.6%；而有9例HDL-C含量＜1.09 mmol/L，CV=2.8%。

第二組實(shí)驗(yàn)：取1 μL血清樣品，用電泳法檢測HDL-C含量。工作人員用時(shí)1 d完成此組樣本檢測。結(jié)果顯示，59例HDL-C含量＞1.09 mmol/L，SD=4.1%；而有11例HDL-C含量＜1.09 mmol/L，CV=4.9%。

第三組實(shí)驗(yàn)：用葡聚糖沉淀法檢測血清樣品中HDL-C含量。工作人員用時(shí)1 d完成此組樣本檢測。結(jié)果顯示，67例HDL-C含量＞1.09 mmol/L，SD=2.1%；而有3例HDL-C含量＜1.09 mmol/L，CV=2.4%。

第四組實(shí)驗(yàn)：用PEGME法檢測血清樣品中HDL-C含量。工作人員用時(shí)8 h完成此組樣本檢測。結(jié)果顯示，66例HDL-C含量＞1.09 mmol/L，SD=3.9%；而有4例HDL-C含量＜1.09 mmol/L，CV=4.6%。

3 小 結(jié)

血清中HDL-C含量對(duì)預(yù)測冠心病、肝硬化等疾病發(fā)病率有著十分重要的臨床評(píng)價(jià)作用和意義。上述四種檢測方法中，沉淀法精密度較高，而直接法快捷省力適用于大批量樣本檢測。在臨床檢驗(yàn)中，檢驗(yàn)人員需要根據(jù)樣本數(shù)量、專業(yè)水平、實(shí)驗(yàn)儀器和可用試劑等多方面因素選擇最適宜的HDL-C檢測方法。

[1] 陳慧娟,趙紅梅,周繪.高密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒方法學(xué)比對(duì)研究[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2009,24(3):104-105.

[2] 章慧慧,張建華,徐巖.高密度脂蛋白膽固醇亞類與冠心病的相關(guān)性[J].國際心血管病雜志,2012,39(6):336-338.

[3] 黃文淵,蔡其浩.直接清除法測定高密度脂蛋白膽固醇研究探討[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2009,6(15):19-22.

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1671-8194（2016）33-0029-01