超速離心
- 奶牛乳源外泌體提取方法的優(yōu)化及效果評(píng)價(jià)
體可通過差速超速離心法、化學(xué)沉淀法、蔗糖密度梯度離心法、超濾分離法、尺寸排阻色譜法、免疫親和法、微流控法和其他商業(yè)試劑盒等提取方法得到。超濾分離法主要通過濾膜孔徑不同來分離外泌體,該方法操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短,且保證外泌體生物活性,但易堵塞濾膜,與外泌體同等大小的蛋白質(zhì)雜質(zhì)與之混雜,且過膜壓力會(huì)對(duì)外泌體造成機(jī)械性損傷,導(dǎo)致分離純度低,因此僅適用于尿液、細(xì)胞培養(yǎng)液等的外泌體提取;尺寸排阻色譜法是通過固定相多孔凝膠孔徑大小分離外泌體,方法簡(jiǎn)單高效,純度高且色譜柱可重
動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào) 2024年2期2024-03-05
- 污水中新型冠狀病毒富集方法研究進(jìn)展
離心和過濾或超速離心和再懸浮的組合,如超速離心法、超濾法、常規(guī)過濾法等。其中,PEG絮凝沉淀和超濾被世界衛(wèi)生組織推薦用于脊髓灰質(zhì)炎病毒循環(huán)的環(huán)境監(jiān)測(cè),膜吸附脫附被美國環(huán)保局作為檢測(cè)水中隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲的標(biāo)準(zhǔn)方法。2022年,國家衛(wèi)健委將PEG絮凝沉淀、鋁鹽絮凝沉淀、離心超濾作為污水中新冠病毒富集的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布實(shí)施。本文將重點(diǎn)介紹幾種當(dāng)前最為常用的富集方法(表1)。1.1 膜吸附-洗脫法膜吸附-脫附法基本過程是將含有病毒的水體通過吸附性過濾器,利用過濾器
凈水技術(shù) 2023年12期2024-01-04
- 銀屑病皮損間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體對(duì)PBMCs分泌細(xì)胞因子的影響
ima XE超速離心機(jī)來自美國Beckman公司,透射電鏡來自日本電子株式會(huì)社。1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞DMSCs來源于太原市中心醫(yī)院皮膚科門診的尋常型銀屑病患者及泌尿外科行包皮環(huán)切術(shù)后留存的正常包皮皮膚組織,PBMCs來源于太原市中心醫(yī)院門診診斷的尋常型銀屑病患者外周血及健康志愿者外周血。該研究已通過太原市中心醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號(hào)2022011)。所有健康志愿者均除外銀屑病。所有研究對(duì)象已排除其他免疫疾病及炎癥性疾病,取材前3個(gè)月內(nèi)未使用糖皮質(zhì)激素、生物制
山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2023年10期2023-11-24
- PABPC1對(duì)人單核白血病細(xì)胞系THP-1翻譯活性的影響
溶液體積到達(dá)超速離心管刻度線上方2 mm左右,同樣方法加入50%濃度的蔗糖溶液。待加完蔗糖溶液蓋上超速離心管的的短帽,在自動(dòng)梯度儀上選取參數(shù)為SW41,sucrose,20%～50%,點(diǎn)擊“RUN”鍵進(jìn)行梯度制備。運(yùn)行結(jié)束后直接掀開短帽,槍頭貼在液面下吸出多余的蔗糖梯度溶液,吸完后沿側(cè)壁緩慢加入樣品。待蔗糖梯度溶液中加入樣品后,將超速離心管轉(zhuǎn)移至SW1轉(zhuǎn)子的轉(zhuǎn)子架內(nèi),擰緊轉(zhuǎn)子蓋,在超速離心機(jī)38 000 r/min,3 h進(jìn)行超速離心。離心結(jié)束后再按照Bi
基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床 2023年5期2023-05-04
- 外泌體分離提取技術(shù)的研究進(jìn)展
志物等特征，超速離心法、超濾法、親合法等外泌體提取方法被應(yīng)用在不同研究場(chǎng)景中。本文對(duì)目前主要的外泌體提取方法的基本原理、優(yōu)勢(shì)及缺陷、技術(shù)進(jìn)展等進(jìn)行歸納與總結(jié)，旨在為研究者提供參考借鑒。1 超速離心法Johnstone等[7]首次在網(wǎng)織紅細(xì)胞培養(yǎng)基中提取外泌體時(shí)采用了超速離心法。經(jīng)過不斷改進(jìn)，目前超過80%的研究者選擇超速離心法提取外泌體[8]。超速離心法以不同的離心力或離心時(shí)間循環(huán)，逐步淘汰較大的顆粒，最終得到底部沉淀的外泌體，主要分為2個(gè)步驟，首先以中低
湖北理工學(xué)院學(xué)報(bào) 2023年1期2023-04-16
- 巴西完成鈾濃縮廠一期工程建設(shè)
行第10 個(gè)超速離心機(jī)級(jí)聯(lián)落成儀式，標(biāo)志著雷森迪鈾濃縮廠一期工程完成建設(shè)。第10 個(gè)級(jí)聯(lián)投運(yùn)后，該濃縮廠將能滿足安格拉1號(hào)機(jī)組70%的年濃縮服務(wù)需求。巴原工表示，鈾濃縮廠使用的技術(shù)由巴西海軍和巴西能源與核研究所（IPEN）聯(lián)合研發(fā)，是一種完全國產(chǎn)化的技術(shù)。巴西目前擁有2臺(tái)核電機(jī)組，即60.9萬千瓦的安格拉1 號(hào)和127.5 萬千瓦的安格拉2 號(hào)機(jī)組。巴西正在建設(shè)1 臺(tái)壓水堆機(jī)組，即134 萬千瓦的安格拉3 號(hào)機(jī)組，該機(jī)組將于2026 年底前投運(yùn)。雷森迪鈾濃
國外核新聞 2022年12期2023-01-23
- 高效陰離子交換色譜-脈沖安培法檢測(cè)凍干b 型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗的游離多糖含量
nt 公司；超速離心機(jī) OptimaTMMAX-XP（轉(zhuǎn)頭型號(hào)TLA-120.2）、超速離心管（型號(hào) 343778）均購自美國 Beckman 公司；214SPE3000 C4 固相萃取柱（5 ml）購自 VydacBioSelect 公司。50% 氫氧化鈉溶液（HPLC 級(jí)）購自美國Thermo Fisher 公司；醋酸鈉（NaAc，純度 ≥ 99%）購自美國 Sigma 公司；甲醇（HPLC 級(jí)）、氯化鈉均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；實(shí)驗(yàn)用水均為超純
中國醫(yī)藥生物技術(shù) 2022年6期2022-12-09
- 切向流過濾結(jié)合超速離心分離小細(xì)胞外囊泡方法的建立
方法主要包括超速離心法［7］、密度梯度分離［8］、尺寸排阻色譜柱［9］、聚乙二醇沉淀法［10］等。聚乙二醇沉淀法易獲取、產(chǎn)量較高，但會(huì)同時(shí)沉淀出其他雜蛋白；密度梯度分離和尺寸排阻色譜柱分離純度較高，但獲取效率較低，耗時(shí)偏長；超速離心法最為常用，但處理體積受到儀器限制，難以進(jìn)行大批量分離［11-12］。在過去幾年中，切向流過濾逐步在脂質(zhì)體、慢病毒等納米顆粒分離中推廣應(yīng)用，與傳統(tǒng)死端過濾不同，切向流過濾系統(tǒng)中的流體沿膜包表面切向流動(dòng)，既不會(huì)堵塞過濾孔徑，也可根
中國生物制品學(xué)雜志 2022年9期2022-09-17
- 兩種巨噬細(xì)胞外泌體制備方法的對(duì)比研究
取方法主要有超速離心法[5]、密度梯度離心法[6]、超濾法[7]等，但這些方法是否適合巨噬細(xì)胞外泌體的提取有待進(jìn)一步研究，巨噬細(xì)胞外泌體提取的純度及濃度決定了相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究的深入性以及精確性。本研究主要以聚合物沉淀法和超速離心法提取的巨噬細(xì)胞外泌體進(jìn)行對(duì)比，探索適用于巨噬細(xì)胞外泌體的制備方法，為后續(xù)外泌體的進(jìn)一步研究提供方法和參考，提高相關(guān)實(shí)驗(yàn)的精確性。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 細(xì)胞株 鼠源巨噬細(xì)胞RAW264.7，購自武漢普諾賽生命科技有限公司
新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2022年8期2022-09-16
- 大鼠腹膜源肥大細(xì)胞外泌體的分離、培養(yǎng)與鑒定*
上清液，采用超速離心法分離上清液中的外泌體，通過透射電鏡，納米流式細(xì)胞儀從外泌體形態(tài)、粒徑和表面標(biāo)志蛋白三個(gè)方面鑒定外泌體。分離得到的肥大細(xì)胞被甲苯胺藍(lán)染成藍(lán)紫色，分離的肥大細(xì)胞外泌體呈典型盤狀，粒徑分布范圍為30～150 nm，平均粒徑為75.33 nm，外泌體表面標(biāo)志蛋白CD9和CD81呈陽性表達(dá)。Percoll密度梯度分離法聯(lián)合超速離心法分離大鼠腹腔灌洗液中肥大細(xì)胞外泌體的方法是可行的。肥大細(xì)胞；外泌體；超速離心肥大細(xì)胞（mast cells， MC
中國病理生理雜志 2022年6期2022-07-06
- 差異超速離心法對(duì)不同種屬間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體分離的可靠性研究
通過同種差異超速離心的方法分離細(xì)胞培養(yǎng)上清中的外泌體，旨在探究差異超速離心法對(duì)BMSCs 來源外泌體分離的可靠性和穩(wěn)定性，為進(jìn)一步研究BMSCs 外泌體的生物學(xué)功能及其臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用提供一種可靠的方法。1 材料和方法1.1 材料1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 4～6 周清潔級(jí)C57 小鼠20 只，體重14～16 g，4～6 周清潔級(jí)SD 大鼠20 只，體重180～200 g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理中心提供，動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK(粵）2016-0167。1.1.
中國臨床解剖學(xué)雜志 2022年3期2022-06-06
- 巨噬細(xì)胞來源外泌體的分離與鑒定
n 公司)，超速離心機(jī)(美國Thermo 公司)，透射電鏡(日本Hitachi 公司)，粒徑分析儀(廈門NanoFCM公司)，多功能酶標(biāo)儀(美國Thermo公司)，凝膠成像系統(tǒng)(上海CLINX 公司)，DMEM 培養(yǎng)基、青霉素-鏈霉素和胎牛血清FBS (美國Gbico 公司)，PBS緩沖液(美國Hycone 公司)，BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒(上海Beyotime 公司)，兔單克隆抗體CD9、CD81、TSG101、Calnexin(英國Abcam公司)。
海南醫(yī)學(xué) 2022年7期2022-04-18
- PSMA-CAR慢病毒顆粒包裝濃縮及感染CIK細(xì)胞的研究*
f，德國)；超速離心機(jī)(Beckman，美國)；超凈工作臺(tái)(蘇州泰安空氣技術(shù)有限責(zé)任公司，中國)。1.3 實(shí)驗(yàn)方法1.3.1 慢病毒包裝 將HEK-293FT細(xì)胞以1～2×106個(gè)/孔的密度接種于10 mm培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)液為10%FBS+DMEM高糖，37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。病毒包裝前用新鮮預(yù)熱的DMEM高糖培養(yǎng)基換液，繼續(xù)培養(yǎng)2 h。以空載體PCDH-CAR(空載體)作為陽性對(duì)照，PSMA-CAR慢病毒載體的用量為20 μg，慢病毒包裝質(zhì)粒
腫瘤預(yù)防與治療 2022年3期2022-03-29
- 肝癌細(xì)胞來源外泌體對(duì)腫瘤相關(guān)M2型巨噬細(xì)胞極化的影響
，本研究通過超速離心的方法提取外泌體，研究來源于HCC細(xì)胞的外泌體對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響，探討其在巨噬細(xì)胞極化過程中的作用。1 材料與方法1.1 細(xì)胞系 Hep G2細(xì)胞株、L02細(xì)胞株、人源單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞(THP-1)購自上海中國科學(xué)院細(xì)胞培養(yǎng)中心。1.2 試劑和儀器1.2.1 主要試劑 DMEM、RPMI 1640(美國Gibco公司)；胎牛血清、胰蛋白酶(美國Hyclone公司)；TSG101、CD63(英國Abcam公司)；Arg-1、CD163(
臨床肝膽病雜志 2022年3期2022-03-28
- 微生物檢驗(yàn)技術(shù)在慢性胃炎幽門螺桿菌臨床診斷中的價(jià)值研究
、組織培養(yǎng)、超速離心等方式，對(duì)微生物進(jìn)行檢驗(yàn)的技術(shù)。作為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的一項(xiàng)重要組成部分，微生物檢驗(yàn)技術(shù)能夠幫助臨床對(duì)感染性疾病作出微生物學(xué)的診斷參考，并且經(jīng)過系統(tǒng)的檢驗(yàn)方案，對(duì)臨床標(biāo)本作出及時(shí)、準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷、抗菌藥物敏感性報(bào)告[1]。目前臨床已普遍認(rèn)為，通過微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)，能夠加強(qiáng)臨床醫(yī)師對(duì)臨床診治的把握。本研究就此展開探討，以微生物檢驗(yàn)技術(shù)的臨床價(jià)值為重點(diǎn)，納入50 例慢性胃炎患者，分析該技術(shù)對(duì)臨床治療的影響。1 資料與方法1.1 一般資料選取20
中國當(dāng)代醫(yī)藥 2022年2期2022-02-12
- 過濾對(duì)超速離心法提取外泌體的影響
離純化方法。超速離心法作為外泌體提取的“金標(biāo)準(zhǔn)”是最常用的提取和純化手段[8]。有研究[9-10]報(bào)道在超速離心提取外泌體時(shí)，先用0.22 μm濾器過濾，認(rèn)為這樣可以去除標(biāo)本中的大分子物質(zhì)，容易獲取外泌體。但過濾對(duì)外泌體的提取數(shù)量有何影響？是否提高了外泌體的純度？相關(guān)報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)通過納米顆粒追蹤分析(nanoparticle tracking analysis，NTA)方法和Amnis量化成像流式檢測(cè)外泌體特異性抗體CD9、CD63的方法，檢測(cè)過濾前后
首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2021年6期2021-12-20
- 三種方法提取血清外泌體的比較研究
分離方法包括超速離心法、密度梯度離心法、免疫吸附法、沉淀法及尺寸排阻色譜法等[6-8]。本研究擬選擇超速離心法、沉淀法和尺寸排阻色譜法提取并鑒定血清外泌體，旨在驗(yàn)證采用不同方法提取血清外泌體的得率和純度，為后續(xù)外泌體的研究和應(yīng)用提供參考依據(jù)。1 材料和方法1.1 研究對(duì)象 隨機(jī)選取2021年1月～3月贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院健康體檢者8 例，其中男性4 例、女性4 例，年齡20～40 歲，所有體檢者體檢結(jié)果均在參考區(qū)間內(nèi)。使用普通真空采血管采集受試者靜脈血1
現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志 2021年6期2021-12-14
- 血清脂蛋白亞組分和脂蛋白（a）分離技術(shù)的研究進(jìn)展
等[12]用超速離心結(jié)合IM法得到4種LDL亞組分，分別為LDL-Ⅰ、LDL-Ⅱ、LDL-Ⅲ和LDL-Ⅳ，其粒徑分別為21.99～23.80、21.10～21.99、20.17～21.10和18.00～20.17 nm。KRAUSS等[13]采用IM法將LDL分為7種亞組分，LDL1的粒徑為22.46～23.32 nm，LDL2a的粒徑為22.20～22.45 nm，LDL2b的粒徑為21.41～22.19 nm，LDL3a的粒徑為20.82～21.40
檢驗(yàn)醫(yī)學(xué) 2021年10期2021-12-07
- 毛細(xì)管超速離心技術(shù)在體外預(yù)測(cè)大量胎母輸血綜合征的研究*
在評(píng)估毛細(xì)管超速離心技術(shù)在ABO血型不一致的大量胎母輸血的臨床檢測(cè)限及檢出率，現(xiàn)報(bào)道如下。材料與方法1 標(biāo)本來源 母體模擬血液標(biāo)本：采集O型育齡期非妊娠期健康女性捐獻(xiàn)者靜脈全血2 mL，以EDTA-K2抗凝；胎兒模擬血液標(biāo)本：A和B型新生兒臍帶血，EDTA-K2抗凝。2 試劑及儀器 抗A、B單克隆抗體（批號(hào)：20201216）為上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供，HbF-GITC單克隆抗體（552829），為BD Biosciences公司；湘儀L550型離心機(jī)
臨床輸血與檢驗(yàn) 2021年3期2021-06-25
- 小鼠血清外泌體不同提取方法的比較
1.2.1 超速離心法 采用超速離心法提取小鼠血清外泌體，具體步驟如圖1所示。將6只60日齡昆明系小鼠摘眼球采集小鼠血液，收集血液于離心管中，待血液凝固后，放入離心機(jī)中，3 000 r/min，4℃離心5 min，上清液即為血清。將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中，300 g，4℃離心10 min；取上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中，2 000 g，4℃離心10 min；取上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中10 000 g，4℃離心70 min；取上清液轉(zhuǎn)移到新的超離管中，100
甘肅畜牧獸醫(yī) 2021年3期2021-04-23
- 血漿外泌體提取方法的比較
提取方法包括超速離心法、膜親和法、沉淀法、免疫磁珠法、超濾法、排阻色譜法等[4-5]。本研究擬選擇超速離心法、膜親和法、沉淀法提取并鑒定血漿外泌體，旨在了解及驗(yàn)證不同方法提取血漿外泌體的效率。1 材料和方法1.1 研究對(duì)象隨機(jī)選取2018年12月—2019年2月復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院進(jìn)行體檢的表面健康者8名，其中男4名、女4名，年齡21～36歲，所有對(duì)象體檢結(jié)果均在參考區(qū)間內(nèi)。采集所有對(duì)象靜脈血10 mL，乙二胺四乙酸二鉀抗凝，1 000×g離心10 min
檢驗(yàn)醫(yī)學(xué) 2020年12期2021-01-04
- 尿液細(xì)胞外囊泡的單顆粒水平多參數(shù)定量表征
]通過對(duì)尿液超速離心后的沉淀物進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)沉淀物中含有大量膜蛋白，為尿液中存在具有膜結(jié)構(gòu)的EVs提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù)。2004年，Pisitkun等[6]通過超速離心，首次提純了uEVs，并且通過蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)現(xiàn)uEVs攜載的很多蛋白與人類疾病密切相關(guān)。近幾年，uEVs攜載的分子標(biāo)志物已被用于多種泌尿系統(tǒng)疾病(如急性腎損傷、前列腺癌和膀胱癌等)的診斷與治療監(jiān)控[7～13]。盡管uEVs的生物學(xué)功能及臨床應(yīng)用價(jià)值不斷地被發(fā)掘，但由于uEVs自身具有高度的
分析化學(xué) 2020年10期2020-10-22
- 淋巴瘤來源外泌體的提取方法比較與鑒定
或通過小體系超速離心進(jìn)一步純化外泌體。1.3.3 exoEasy試劑盒提取外泌體 取細(xì)胞上清液，先用0.8 μm孔徑的濾頭過濾，去除細(xì)胞、細(xì)胞碎片、凋亡小體等；再用試劑盒中溶液與細(xì)胞上清液等量上下顛倒混勻、離心過柱，用洗脫液將外泌體從柱上洗脫下來備用。1.3.4 超速離心法提取外泌體 取細(xì)胞上清液，500 g離心5 min，去沉淀物；2 000 g離心10 min，去細(xì)胞和細(xì)胞碎片；然后依次經(jīng)0.45、0.22 μm帶有聚偏二氟乙烯膜濾膜的濾頭過濾；再經(jīng)超
浙江醫(yī)學(xué) 2020年13期2020-07-30
- 雞胚來源的外泌體不同提取方法比較
樣品前處理、超速離心、液體樣本外泌體提取的商業(yè)化試劑盒分離雞胚組織來源的外泌體，比較各方法所獲外泌體含量與純度，為后續(xù)深入解析雞胚中活性物質(zhì)及其作用機(jī)制提供依據(jù)。1 材料與方法1.1 試驗(yàn)材料從廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所家禽試驗(yàn)場(chǎng)收集處于產(chǎn)蛋高峰期的惠陽胡須雞受精蛋30枚。于收集當(dāng)天置于數(shù)字孵化器中孵化，孵化條件為37 ℃、相對(duì)濕度65%～75%，每小時(shí)自動(dòng)翻蛋1次，孵化至13 d時(shí)，取出雞胚蛋終止孵化，選擇大小及重量相近的胚蛋12枚，分為3組，每組4
廣東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020年5期2020-07-27
- 腎小管上皮細(xì)胞來源包含miroRNA-21的微囊泡在心肌肥大中的作用
培養(yǎng)液，分別超速離心，留取沉淀用透射電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)條件培養(yǎng)液沉淀物中有呈簇狀的雙層膜結(jié)構(gòu)的小囊泡，直徑在50～200 nm，符合MVs的形態(tài)學(xué)特征，見圖1。圖1 腎小管上皮細(xì)胞產(chǎn)生的條件培養(yǎng)液超速離心獲得的沉淀物的冷凍電鏡照片a.無TGF-β1 處理的供體腎小管上皮細(xì)胞產(chǎn)生的條件培養(yǎng)液超速離心獲得的沉淀物；b.5 ng/ml的TGF-β1處理的供體腎小管上皮細(xì)胞產(chǎn)生的條件培養(yǎng)液超速離心獲得的沉淀物。標(biāo)尺=100 nm2.2Dil-C18 染料標(biāo)記的MVs可
臨床薈萃 2020年3期2020-04-01
- 外泌體提取方法及其miRNA在非小細(xì)胞肺癌中的應(yīng)用*
集方法，包括超速離心法、蔗糖密度梯度離心法、沉淀法、試劑盒法、尺寸排阻法(SEC)、超濾法、基于表面成分親和力分離法、交流電動(dòng)力學(xué)(ACE)分離法及微流控芯片法。2 外泌體的提取純化方法2.1基于密度的分離方法2.1.1超速離心法 超速離心法是最常用的外泌體提取方法[5]，首先，施加較低速度的離心力300 g以從細(xì)胞培養(yǎng)液中去除細(xì)胞；然后，對(duì)上清液施加較大的離心力(10 000～20 000 g)，去除大的細(xì)胞碎片和破碎的細(xì)胞器；最后，再次進(jìn)行高速(100
國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志 2020年15期2020-03-03
- 基于超速離心技術(shù)的油液自動(dòng)凈化處理裝置的研發(fā)
的重視。1 超速離心技術(shù)及其在油液凈化中的應(yīng)用分析[2,3]超速離心技術(shù)是利用旋轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)子帶動(dòng)液體產(chǎn)生高速運(yùn)動(dòng)，通過離心力使不同密度的液體、雜質(zhì)和油液分離。將超速離心技術(shù)應(yīng)用到油液凈化中，其基本的工作原理是：設(shè)置一個(gè)帶有雙噴式噴油嘴的轉(zhuǎn)子，借助由油液產(chǎn)生的壓力來提供其驅(qū)動(dòng)力。設(shè)備開啟后，油泵將油液輸送到轉(zhuǎn)子內(nèi)，待油液充滿轉(zhuǎn)收稿日期：由編輯部登記子后，就沿轉(zhuǎn)子下部噴油嘴噴出，既而產(chǎn)生驅(qū)動(dòng)力使轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)，其轉(zhuǎn)速可高達(dá)4000～6000rpm以上，所產(chǎn)生的力量為
制造業(yè)自動(dòng)化 2019年11期2019-12-05
- 外泌體中的miRNA-744-5P調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的體外實(shí)驗(yàn)研究
主要通過梯度超速離心法。1.2.3 轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn) 用于轉(zhuǎn)染的miRNA-744-5P inhibitor序列5’-3’：UGCUGUUAGCCCUAGCCCCGCA該產(chǎn)品購自蘇州泓迅生物科技公司，miR-744-5P inhibitor是miRNA抑制物，本實(shí)驗(yàn)中即反義RNA寡聚物anti-miRNA，是化學(xué)修飾的成熟miRNA互補(bǔ)單鏈，產(chǎn)品為凍干粉形成的即用型試劑，使用前瞬時(shí)離心，用RNase-free H2O或滅菌dd H2O配制成20μM儲(chǔ)存液，分裝保存
醫(yī)藥前沿 2019年23期2019-09-05
- 單采血小板來源外泌體的提取與鑒定
1 實(shí)驗(yàn)材料超速離心機(jī)（美國Thermo Scientific公司）；離心水平轉(zhuǎn)頭（美國Thermo Scientific公司）；透射電鏡（日本JEOL公司）；全能型化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（美國BIORAD公司）；血小板震蕩儀（美國Forma Scientific公司）；0.22μm filter（美國Millipore公司）；BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒（Solarbio公司）；CD9單克隆抗體、β-actin內(nèi)參、二抗、（Bioworld Technology公司
標(biāo)記免疫分析與臨床 2019年2期2019-08-10
- 超速離心法與QIAGEN膜親和柱法提取前列腺癌細(xì)胞培養(yǎng)上清外泌體的方法學(xué)比較*
的提取方法有超速離心法、蔗糖密度梯度離心法、PEG沉淀法、磁珠法以及膜親和柱法等[7-8]，超速離心法是外泌體提取的金標(biāo)準(zhǔn)，但超速離心法耗時(shí)耗力，并且提取率低；沉淀法雖然簡(jiǎn)單，但會(huì)同時(shí)沉淀許多雜蛋白，并且商品化試劑成本高；磁珠法適用于提取血液等起始量要求較低的生物樣本來源的外泌體，用途有限；膜親和柱法適用于提取包括細(xì)胞上清、血液及尿液等多種生物體液來源的外泌體，且操作相對(duì)簡(jiǎn)便。基于此，本研究通過常規(guī)的外泌體鑒定方法，對(duì)比了超速離心法和QIAGEN膜親和柱法
現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志 2019年3期2019-06-21
- 新劑型藥物血漿中游離藥物濃度研究方法概述
度測(cè)定方法（超速離心法、超濾法、平衡透析法和快速平衡透析法）及其優(yōu)缺點(diǎn)和適用范圍做一個(gè)概要介紹，為新劑型藥物的研發(fā)提供幫助。關(guān)鍵詞 游離藥物濃度 超速離心 超濾 平衡透析中圖分類號(hào)：R969.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2019）07-0074-04Summary of research methods for free concentration of new dosage forms drug in plasmaMA Zhiyu*
上海醫(yī)藥 2019年7期2019-05-06
- 不同離心方法提取及鑒定精漿外泌體的效果比較
取方法多樣，超速離心法、ExoPerfectTM?MU法與PEG6000法比較提取外泌體在細(xì)胞上清［12］和其他的體液中都有成功的報(bào)道［13］，而3種方法比較提取精漿外泌體的應(yīng)用報(bào)道較少。本研究比較及鑒定超速離心法、Exo?PerfectTM?MU法及PEG6000法提取的精漿外泌體，為外泌體的研究提供不同的選擇方法。1 資料與方法1.1 研究對(duì)象收集2017年3月至7月南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院檢驗(yàn)中心30例正常志愿者的精漿樣本。納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合WHO第5版診
醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào) 2019年2期2019-03-22
- 三種方法濃縮慢病毒后綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)染效率的比較
較超濾管法、超速離心法及病毒濃縮液法這三種方法濃縮慢病毒后的GFP轉(zhuǎn)染效率。1 材料與方法1.1 材料 293T細(xì)胞；DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)液；0.25%胰酶(0.25%胰蛋白酶/1 mmol/L EDTA)；胎牛血清(FBS)(康源生物科技有限公司)；psPAX2菌種;pMD2.G菌種；GFP慢病毒載體菌種；LB液體培養(yǎng)液，質(zhì)粒提取專用試劑盒；EntransterTM-H4000試劑盒。1.2 方法1.2.1 pMD2.G、psPAX2及GFP慢病毒載體質(zhì)粒的
武警醫(yī)學(xué) 2019年1期2019-02-21
- 外泌體的提取、鑒定和保存方法研究進(jìn)展
方法1.1 超速離心法(差速離心法) 超速離心法是目前制備外泌體的經(jīng)典方法，是根據(jù)外泌體的沉降系數(shù)差速離心將其分離出來。該方法是在4℃條件下依次以300 g，2000 g，10 000 g離心以去除細(xì)胞與細(xì)胞碎片，再以100 000 g超速離心達(dá)到分離、富集外泌體的目的。磷酸緩沖液(PBS)清洗可部分去除殘存蛋白質(zhì)。超速離心法具有操作簡(jiǎn)單、不被分離試劑污染、獲得的外泌體數(shù)量較多的優(yōu)點(diǎn)，因此最常用，也被認(rèn)為是外泌體提取純化的金標(biāo)準(zhǔn)。但是超速離心法，需要昂貴的
現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志 2018年5期2018-11-06
- 外泌體分離方法研究進(jìn)展
法。3.1 超速離心法 超速離心法分離外泌體是目前最普遍的一種方法。據(jù)估計(jì)，采用超速離心法的研究者占所有外泌體分離方法的56%［21］。超速離心法的步驟［22］如圖2所示。最后用PBS洗滌，獲得外泌體。該法不需要對(duì)外泌體進(jìn)行標(biāo)記或者使用其他分離試劑，不易被污染，適用于大劑量樣品分離。但是在分離過程中，由于超高速離心，外泌體的結(jié)構(gòu)、功能很容易遭到破壞，并且易聚集成塊，下游分析不利。此外，該法較為耗時(shí)且需要專門的技術(shù)人員。圖2 超速離心法分離外泌體步驟示意圖3
轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)電子雜志 2018年4期2018-05-24
- 高中物理中對(duì)慣性參考系和加速參考系的一些探討
加速參考系；超速離心機(jī)一個(gè)參考系，如果在其中對(duì)一個(gè)據(jù)信沒有受到任何作用力和約束的粒子沒有觀察到加速度，那么它就被認(rèn)為是一個(gè)慣性參考系。凡是相對(duì)慣性參考系做加速運(yùn)動(dòng)的參考系都是非慣性參考系，也叫做加速參考系。牛頓第一、第二定律只有在慣性參考系中作觀察時(shí)才是成立的。這一點(diǎn)，從日常經(jīng)驗(yàn)來看是顯然的。如果觀察者的參考系是靜止在一個(gè)旋轉(zhuǎn)木馬上。那么，即使沒有外力的作用，觀察者在這個(gè)參考系中的加速度也不會(huì)是零。觀察者只有頂住旋轉(zhuǎn)木馬的某個(gè)部分，按照牛頓第三定律該部分產(chǎn)
考試周刊 2018年36期2018-04-19
- 非小細(xì)胞肺癌患者血清外泌體的分離與鑒定
研究的前提。超速離心分離外泌體的方法是當(dāng)前外泌體分離的金標(biāo)準(zhǔn)。本研究利用超速離心的方法分離并鑒定非小細(xì)胞肺癌患者血清中的外泌體，同時(shí)也為研究非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展以及早期篩查提供新的切入點(diǎn)。1 材料與方法1.1材料BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(博士德生物工程有限公司)；RIPA裂解液(碧云天生物技術(shù)研究所)；兔抗CD9、CD63單克隆抗體、辣根過氧化物酶標(biāo)記抗兔二抗(武漢愛博泰克生物科技有限公司)；ECL化學(xué)發(fā)光液(上海七海復(fù)泰生物科技有限公司)；高速離心機(jī)
中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué) 2016年9期2016-11-01
- 高密度脂蛋白膽固醇的檢測(cè)方法及臨床應(yīng)用
估。方法依據(jù)超速離心法、電泳法、化學(xué)沉淀法和均相測(cè)定法操作標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行HDL-C含量測(cè)定，以NECP標(biāo)準(zhǔn)比較四種檢測(cè)方法的精確度和變異系數(shù)。結(jié)果超速離心法耗時(shí)耗力，精密度較低；電泳法樣品用量少，不適用于大規(guī)模樣本檢測(cè)；沉淀法方便快捷且精密度最高，適用于臨床研究；均相法可完全自動(dòng)化檢測(cè)大規(guī)模樣本。結(jié)論四種方法精密度均在NECP允許誤差范圍內(nèi)。臨床檢驗(yàn)中，需根據(jù)樣本數(shù)量、專業(yè)水平和儀器試劑等多方面因素選擇最適宜的HDL-C檢測(cè)方法。HDL-C；檢測(cè)方法；臨床應(yīng)用流
中國醫(yī)藥指南 2016年33期2016-01-28
- 延邊黃牛血液Exosome的提取和鑒定
后取上清置于超速離心管中，放入超速離心機(jī)中，50 000 r/m離心1 h。離心后，棄上清，用0.01 mol/L PBS將沉淀吹下，吸入EP管中，使用移液器反復(fù)吹打，使其溶解。再次將溶液于超速離心管中，放入超速離心機(jī)中，50 000 r/min離心1 h。離心后棄上清，吸入小離中，加入0.01 mol/L PBS溶液，使用移液器將沉淀反復(fù)吹打，使其完全混勻即為Exosomes溶液。于4℃下短期保存，-20℃下長期保存。1.2.2 Exosome 的形態(tài)觀
安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年6期2015-12-24
- 心肌細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定及β3-AR蛋白提取方法的比較
用總蛋白法、超速離心法、試劑盒法提取心肌細(xì)胞β3-AR膜蛋白；BCA法進(jìn)行蛋白定量；Western blot法檢測(cè)蛋白樣品中β3-AR和GAPDH相對(duì)含量及提取蛋白的特異性。結(jié)果 優(yōu)化心肌細(xì)胞的培養(yǎng)方法可以使所得細(xì)胞產(chǎn)量大、濃度高，滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)。試劑盒法提取蛋白的濃度（8.26±0.29）g/L＞總蛋白法提取法的（5.12±0.47）g/L＞超速離心法的（3.20±0.37）g/L，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western blot檢測(cè)結(jié)果示，試劑盒提取法所得β
天津醫(yī)藥 2015年6期2015-08-24
- 高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定阿霉素/姜黃素載雙藥納米粒的藥物含量及包封率
性等，并結(jié)合超速離心法測(cè)定DOX/CUR-NPs的包封率。結(jié)果 成功制備了DOX/CUR-NPs；在建立的色譜條件下，DOX和CUR專屬性好，精密度、回收率、重復(fù)性等試驗(yàn)均符合方法學(xué)要求。兩藥在0.5～50.0μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999），納米粒中DOX與CUR的包封率分別為（58.9±1.11）%和（75.4±1.76）%。結(jié)論 HPLC法準(zhǔn)確可靠、簡(jiǎn)單快速，可用于DOX/CUR-NPs的藥物含量及包封率的同時(shí)測(cè)定。阿霉素 姜黃素
浙江醫(yī)學(xué) 2015年10期2015-01-19
- 優(yōu)化的密度梯度離心法提取質(zhì)粒DNA
1 儀器日立超速離心機(jī)，型號(hào)CP100WX，轉(zhuǎn)頭型號(hào)SRP83VT.1.2 方法1) 配制試劑：溶液I(50 mmol/L葡萄糖，25 mmol/L pH 8.0 Tris-Cl，10 mmol/L pH 8.0 EDTA)，溶液Ⅱ(0.2 mol/L NaOH, 1 g/L SDS)，溶液Ⅲ(294 g/L 醋酸鉀, 115 mL/L冰醋酸)，EB溶液(10 mg/mL)，10 × SSC(1.5 mol/L NaCl, 0.15 mol/L檸檬酸鈉).
衡水學(xué)院學(xué)報(bào) 2014年4期2014-11-23
- 不同等電點(diǎn)沉淀法和超速離心法提取牛奶乳清蛋白的雙向電泳分析
電點(diǎn)沉淀法和超速離心法提取牛奶乳清蛋白的雙向電泳分析陳靜廷1,2，卜登攀1,3,4,*，馬 露1，楊永新1，李發(fā)弟2（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070；3.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院-世界農(nóng)用林業(yè)中心，農(nóng)用林業(yè)與可持續(xù)畜牧業(yè)聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，北京 100193；4.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品安全與營養(yǎng)協(xié)同創(chuàng)新中心，黑龍江 哈爾濱 150030）為探索牛奶乳清蛋白提取的最適方
食品科學(xué) 2014年20期2014-01-18
- 不同逆轉(zhuǎn)錄載體系統(tǒng)應(yīng)用于水牛胎兒成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)基因的探索
縮本試驗(yàn)采用超速離心的方法對(duì)病毒進(jìn)行濃縮．由于pMSCV 和pMX 逆轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)所使用的包膜蛋白不同(分別是10A1 和VSV-G)，在超速離心力的作用下不會(huì)對(duì)VSV-G 所包裝出的病毒顆粒造成破損［5］．因此，本試驗(yàn)僅對(duì)pMX 逆轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)所產(chǎn)生的病毒上清液進(jìn)行超速離心濃縮．超速離心的參數(shù)是:12 000 r/min，4 ℃，120 min．離心后，去掉上清液，加入PBS 重懸底部的病毒顆粒，分裝備用．1．6 病毒滴度測(cè)定采用經(jīng)典的LaSRT 病毒滴
- 基于貝葉斯網(wǎng)絡(luò)的超速離心機(jī)故障診斷專家系統(tǒng)研究*
速旋轉(zhuǎn)機(jī)械，超速離心機(jī)是轉(zhuǎn)速大于30000r/min的高性能離心機(jī)。實(shí)際使用時(shí)，轉(zhuǎn)子在封閉的環(huán)境下高速旋轉(zhuǎn)，經(jīng)歷這樣的高負(fù)荷運(yùn)行，長時(shí)間后即會(huì)出現(xiàn)轉(zhuǎn)子不平衡、不對(duì)中和轉(zhuǎn)軸磨損等一系列機(jī)械故障，并由此引發(fā)異常振動(dòng)，使其故障率增高，影響生產(chǎn)和操作人員的安全性［1］。目前，國內(nèi)對(duì)于離心機(jī)的故障診斷主要采用人工感官和簡(jiǎn)單儀表診斷，存在診斷效果差、耗時(shí)長、準(zhǔn)確性低等問題。因此，研究一種超速離心機(jī)專用的故障診斷專家系統(tǒng)是十分必要的，可以有針對(duì)性的對(duì)超速離心機(jī)運(yùn)行過程中
傳感器與微系統(tǒng) 2012年2期2012-07-25
- 基于紅外技術(shù)的超速離心機(jī)測(cè)溫系統(tǒng)研究與設(shè)計(jì)*
離心機(jī)被稱為超速離心機(jī)。當(dāng)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時(shí)，與空氣摩擦生熱，轉(zhuǎn)子中被分離的樣品溫度也會(huì)隨之升高，將會(huì)造成樣品變質(zhì)。因此，需要正確地測(cè)量轉(zhuǎn)子的實(shí)際溫度，以保證分離完成后樣品的品質(zhì)。直接測(cè)量旋轉(zhuǎn)中的轉(zhuǎn)子的實(shí)際溫度比較困難，普通離心機(jī)通常是在離心室底部離轉(zhuǎn)子較近的地方安裝接觸式溫度傳感器來測(cè)量離心室溫度，從而間接測(cè)出轉(zhuǎn)子溫度。而超速離心機(jī)離心室則是處在高真空度環(huán)境中，傳統(tǒng)的接觸式測(cè)溫方法會(huì)造成較大的測(cè)量誤差。本文采用非接觸式的紅外傳感器來直接測(cè)量轉(zhuǎn)子的溫度。1 紅
傳感器與微系統(tǒng) 2012年3期2012-07-25
- 新生大鼠腦組織中線粒體的分離
生大鼠6只、超速離心機(jī)、電子顯微鏡、天平、動(dòng)物手術(shù)器械、勻漿器1.2 試劑 0.25M蔗糖、0.5 mM K+-EDTA、10 mM Tris-HCl、10mg/ml牛的血清白蛋白、用線粒體緩沖液稀釋的濃度分別為12%、26%、40%的Percoll、2.5%戊二醛、2%四氧化鋨、乙醇、丙烯氧化物、樹脂。1.3 方法1.3.1 線粒體的分離(1)迅速摘取新生大鼠的腦,稱重400-500 mg,移入冰冷的線粒體分離緩沖液(0.25 M蔗糖,0.5 mM K+
中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué) 2011年6期2011-05-30