劉　燕，張　軍，蒲強(qiáng)紅，鄧　瀟，于　超

(重慶醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)研究院,重慶　400016)

?

瑞舒伐他汀減輕ApoE-/-小鼠動(dòng)脈硬化形成與ST6Gal-Ⅰ表達(dá)相關(guān)性研究

劉燕，張軍，蒲強(qiáng)紅，鄧瀟，于超

(重慶醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)研究院,重慶400016)

摘要:目的探討瑞舒伐他汀抑制ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成是否與唾液酸轉(zhuǎn)移酶(ST6Gal-Ⅰ)的表達(dá)相關(guān)。方法取ApoE-/-小鼠，分別采用高脂喂養(yǎng)16周(基線模型組，baseline)、高脂喂養(yǎng)23周(對(duì)照組，control)及高脂喂養(yǎng)23周且瑞舒伐他汀灌胃7周(藥物組，rosuvastatin)構(gòu)建模型。分別測(cè)定3組ApoE-/-小鼠血清低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)的含量及主動(dòng)脈斑塊面積，分析動(dòng)脈粥樣形成的病理變化，確定高膽固醇血癥模型成立。通過(guò)免疫組織化學(xué)法分析主動(dòng)脈內(nèi)膜中ST6Gal-Ⅰ的表達(dá)。結(jié)果對(duì)照組與基線組相比，隨著高脂飼料喂養(yǎng)周數(shù)增加，小鼠血清中LDL-C、HDL-C、TC、TG均增加，其中LDL-C及TG變化差異具有顯著性(P<0.05)，其動(dòng)脈弓斑塊面積明顯增大(P<0.05)，管腔內(nèi)膜明顯增厚(P<0.05)，說(shuō)明高膽固醇血癥模型構(gòu)建成功。而瑞舒伐他汀處理藥物組與對(duì)照組比較，血脂四項(xiàng)指標(biāo)、斑塊面積均有所下降，且LDL-C、TG水平及斑塊面積變化差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。分別檢測(cè)3組ST6Gal-Ⅰ表達(dá)顯示對(duì)照組較基線組動(dòng)脈弓處表達(dá)上調(diào)，用藥后ST6Gal-Ⅰ表達(dá)明顯下調(diào)。結(jié)論瑞舒伐他汀預(yù)防小鼠動(dòng)脈粥樣硬化形成的機(jī)制可能與ST6Gal-Ⅰ表達(dá)密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞：動(dòng)脈粥樣硬化；高膽固醇血癥；ApoE-/-小鼠；斑塊；瑞舒伐他汀；唾液酸轉(zhuǎn)移酶

動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是嚴(yán)重危害人類健康的一種血管慢性炎癥性疾病[1-4]?；静∽冞^(guò)程是動(dòng)脈內(nèi)膜脂質(zhì)沉積，內(nèi)膜灶狀纖維化，粥樣斑塊形成，致血管壁變厚、管腔狹窄，并引起一系列繼發(fā)性病變，如引起冠心病、腦血管病和血栓性疾病等。到目前為止，AS的發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚。普遍認(rèn)為脂質(zhì)代謝紊亂引起的炎癥反應(yīng)與AS的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系[3，5-6]。炎癥反應(yīng)中，黏附分子如選擇素、選擇素配體、整合素等介導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細(xì)胞間的黏附在粥樣斑塊的發(fā)生發(fā)展中起了極其重要的作用[1]，是AS的早期特征和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。這些環(huán)節(jié)的調(diào)控與多種因素有關(guān)，蛋白質(zhì)翻譯后的調(diào)節(jié)是否參與其中還鮮為人知。我們團(tuán)隊(duì)以往的研究顯示，蛋白質(zhì)的糖基化對(duì)單核細(xì)胞-內(nèi)皮之間相互作用的調(diào)控發(fā)揮著重要的作用[7-8]。蛋白糖基化是由細(xì)胞中催化特殊氨基酸殘基聯(lián)接聚糖基團(tuán)的糖基轉(zhuǎn)移酶催化形成。其中β-半乳糖α2,6-唾液酸轉(zhuǎn)移酶1(ST6Gal-Ⅰ)是高爾基體上一個(gè)Ⅱ型跨膜蛋白, 可催化唾液酸以α-2,6糖苷鍵的形式連接到細(xì)胞膜表面功能蛋白的N-乙酰半乳糖胺上形成唾液酸化的糖蛋白，從而發(fā)揮生物學(xué)功能[9]。有研究表明，白細(xì)胞在PMA刺激分化成巨噬細(xì)胞過(guò)程中，ST6Gal-Ⅰ表達(dá)下調(diào)，膜上β1整合素的α2,6-唾液酸化明顯降低，從而增加了細(xì)胞的α4β1整合素與VCAM-1的黏附，說(shuō)明炎癥刺激下ST6Gal-Ⅰ確實(shí)參與細(xì)胞黏附調(diào)控[10]。既然糖基轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的糖基化修飾影響了細(xì)胞的生物學(xué)功能，那么本文中糖基轉(zhuǎn)移酶對(duì)AS過(guò)程中斑塊形成是否存在調(diào)控關(guān)系就成為我們關(guān)注的核心問(wèn)題。這對(duì)揭示AS的發(fā)生、發(fā)展具有重要意義。

目前，瑞舒伐他汀是有效防治AS的藥物。他汀類藥物主要通過(guò)減少內(nèi)源性膽固醇的合成，有效降低LDL-C、升高HLD-L，還可以通過(guò)上調(diào)內(nèi)皮eNOS的表達(dá)發(fā)揮抗炎作用[11]。但是瑞舒伐他汀發(fā)揮抗AS機(jī)制的深度認(rèn)識(shí)尚不全面?；贏S是在各種炎癥作用下發(fā)生的一系列病理改變，且炎癥與ST6Gal-Ⅰ的表達(dá)密切相關(guān)。探討藥物抗AS作用與ST6Gal-Ⅰ的表達(dá)關(guān)系，對(duì)于發(fā)現(xiàn)新靶點(diǎn)具有重要意義。已有文獻(xiàn)報(bào)道，AS病變與ST3Gal-Ⅳ密切相關(guān)[12]；在炎癥發(fā)生時(shí)血清中的α2,6-、α2,3-及α2,8-唾液酸化糖蛋白均發(fā)生差異表達(dá)[13]。而瑞舒伐他汀對(duì)AS的防治是否與唾液酸化糖蛋白表達(dá)有關(guān)尚未見報(bào)道。因此，本研究擬以ApoE-/-小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，高脂飼料喂養(yǎng)建立AS動(dòng)物模型，分析瑞舒伐他汀藥物對(duì)AS斑塊的作用，并觀察給藥前后ST6Gal-Ⅰ在ApoE-/-小鼠血管AS形成區(qū)域的表達(dá)。以期判斷瑞舒伐他汀治療AS機(jī)制是否與功能蛋白糖基化有關(guān)。

1材料與方法

1.1動(dòng)物和試劑健康♂載脂蛋白E基因敲除小鼠(ApoE knocked-out mice ，ApoE-/-)，6周齡，體質(zhì)量18～25 g,購(gòu)置于重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。瑞舒伐他汀(博騰精細(xì)化工股份有限公司，重慶)；油紅O(Sigma，USA)；蘇木精、伊紅、兔超敏二步法免疫組化檢測(cè)試劑盒、DAB染色試劑盒(中杉金橋，北京)；兔源多克隆ST6Gal-Ⅰ抗體(Sigma，USA)；熒光正置顯微鏡(Olympus，日本)；血糖試紙(羅氏，德國(guó))；高脂高膽固醇飼料(含20%脂肪，0.125%膽固醇)由北京科澳協(xié)力飼料有限公司制備。

1.2動(dòng)物模型的構(gòu)建及分組36只ApoE-/-小鼠于SPF級(jí)分籠喂養(yǎng)，應(yīng)用隨機(jī)表原則，將其分為3組，每組12只：① 基線模型組(baseline)：髙脂高膽固醇飼料喂養(yǎng)16周處死；② 空白對(duì)照組(control)：髙脂高膽固醇飼料喂養(yǎng)23周處死；③ 瑞舒伐他汀組(rosuvastatin)：高脂高膽固醇飼料喂養(yǎng)23周，并在后7周同時(shí)對(duì)小鼠給予瑞舒伐他汀灌胃處理，瑞舒伐他汀以PBS緩沖液配置，給藥劑量2.4 mg·kg-1·d-1[14]。處死前1 d晚上禁食不禁水。

1.3血樣的采集及生化指標(biāo)的測(cè)定ApoE-/-小鼠經(jīng)戊巴比妥麻醉后行眼眶采血，分離血清，測(cè)定血糖、血脂四項(xiàng)，即低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)的水平，于重慶醫(yī)科大學(xué)附屬大學(xué)城醫(yī)院檢驗(yàn)科測(cè)得。

1.4標(biāo)本的采集及主動(dòng)脈標(biāo)本的制備ApoE-/-小鼠麻醉采血后處死，剖開胸腹腔用生理鹽水沖洗干凈，分離心、肝、脾、肺、腎、小腸及心臟等重要臟器，取出心臟和主動(dòng)脈，從主動(dòng)脈根部開始取材，剪下1～1.5 cm連接心臟的血管放入4%的多聚甲醛中固定，經(jīng)洗滌、脫水、透明，進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，從主動(dòng)脈根部0.2 cm起間斷均勻切面，切片厚度為5 μm，用防脫玻片黏附切片。

1.5油紅O染色取主動(dòng)脈弓(1～2 mm)的心臟，剔除動(dòng)脈弓處多余脂肪，充分暴露主動(dòng)脈，橫切左右心房，是切面垂直主動(dòng)脈根部，用吸水紙將組織塊的固定液充分吸干，OCT包埋劑滴到樣品托盤上，是主動(dòng)脈垂直朝上將心房組織完全植入到包埋劑中。調(diào)整組織使主動(dòng)脈垂直向上，將樣品連同托盤放到速凍臺(tái)上迅速冰凍30 min。冰凍切片機(jī)切片，溫度-20℃左右，切片厚度8 μm，使用防脫玻片不同位置貼片，并在普通顯微鏡10倍視野下，觀察到主動(dòng)脈瓣結(jié)構(gòu)出現(xiàn)時(shí)，更換防脫玻片貼片，正式保留切片進(jìn)行染色。冷凍切片干燥后入60%異丙醇浸洗10min ，油紅O工作液染色10 min ，60%異丙醇分化3～10 s至間質(zhì)清晰，水洗，Mayer蘇木精復(fù)染1 min，自來(lái)水返藍(lán)， 用濾紙小心吸干水分，甘油明膠封片，Olympus倒置顯微鏡采集圖像。

1.6蘇木精-伊紅染色( hematoxylin-eosin, HE)取主動(dòng)脈根部石蠟切片于60℃烤箱中30 min，迅速放入二甲苯中及100%、95%、80%、70%濃度梯度無(wú)水乙醇脫蠟處理后，迅速放入雙蒸水中5 min，沖洗3次,蘇木素染色15 min，沖洗后0.5%的鹽酸乙醇3 s，沖洗后0.5%伊紅染色2 min，依次70%、80%、95%、100%乙醇中脫水，二甲苯中固定后中性樹膠封片。

1.7免疫組化取主動(dòng)脈根部石蠟切片于60℃烤箱中30 min，迅速放入二甲苯中及100%、95%、80%、70%濃度梯度無(wú)水乙醇脫蠟處理后，迅速放入雙蒸水中5 min，沖洗3次，將玻片放入檸檬酸鹽緩沖液中，微波爐中高火3 min，低火微沸10 min，進(jìn)行抗原修復(fù)，自然冷卻至室溫，PBS沖洗。用3%的H2O2去離子水孵育10 min，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，PBS沖洗，加入ST6Gal-Ⅰ一抗(1 ∶40稀釋)，4℃孵育過(guò)夜，PBS沖洗3次，滴加polymer helper室溫孵育20 min，PBS沖洗，滴加poly-HRP anti-Rabbit IgG室溫孵育20 min，PBS沖洗，DAB染色，蘇木精復(fù)染，于70%、80%、95%、100%乙醇中脫水，二甲苯固定，中性樹膠封片。

2結(jié)果

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中小鼠均無(wú)異常死亡，基線模型組(baseline)、空白對(duì)照組(control)和瑞舒伐他汀組(rosuvastatin)造模前后的體重及血糖變化差異均無(wú)顯著性，且3組小鼠的攝食量及重要臟器(心、肝、脾、肺、腎)的質(zhì)量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.1瑞舒伐他汀對(duì)小鼠各種血脂水平的影響血脂檢測(cè)結(jié)果顯示，基線模型組小鼠血清中LDL-C、HDL-C、TC、TG均高于正常值，表明模型構(gòu)建成功。23周高脂飼料飼養(yǎng)的對(duì)照組小鼠血清中LDL-C、TG和TC水平均高于基線模型組(Fig 1A～D)。但藥物組小鼠血清中上述三指標(biāo)均有所降低，表明瑞舒伐他汀的確具有降脂活性。

2.2瑞舒伐他汀降低主動(dòng)脈弓斑塊面積經(jīng)高脂喂養(yǎng)23周的對(duì)照組與16周的基線模型組比較，小鼠主動(dòng)脈管弓的動(dòng)脈斑塊面積明顯增加(P<0.05)。而藥物組與對(duì)照組比較，斑塊面積明顯減少(P<0.05)，見Fig 2。說(shuō)明瑞舒伐他汀具有預(yù)防斑塊形成的作用。

2.3瑞舒伐他汀明顯降低小鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜的厚度分析血管內(nèi)膜的變化情況，結(jié)果如Fig 3所示，可見基線模型組小鼠血管主要病理改變?yōu)椋簝?nèi)膜明顯增厚，內(nèi)皮排列紊亂且不連續(xù)，管壁厚度增加，平滑肌遷移內(nèi)膜，中膜平滑肌明顯萎縮變薄。表明模型構(gòu)建成功。增加高脂喂養(yǎng)時(shí)間的對(duì)照組與基線模型組比較，病變呈明顯的進(jìn)行性加重趨勢(shì)。動(dòng)脈內(nèi)膜連續(xù)性更弱，內(nèi)膜厚度進(jìn)一步增加，差異有顯著性(P<0.05)。瑞舒伐他汀藥物組與對(duì)照組相比，內(nèi)膜厚度明顯降低(P<0.05)。結(jié)果與上述油紅O染色斑塊面積變化趨勢(shì)一致。

2.4瑞舒伐他汀上調(diào)主動(dòng)脈弓內(nèi)膜中糖基轉(zhuǎn)移酶ST6Gal-Ⅰ為分析瑞舒伐他汀藥理作用是否與唾液酸轉(zhuǎn)移酶表達(dá)存在關(guān)聯(lián)。分別取3組小鼠主動(dòng)脈弓，制備石蠟切片，通過(guò)免疫組化分析唾液酸轉(zhuǎn)移酶表達(dá)分布情況。結(jié)果顯示，ST6Gal-Ⅰ在各組均有表達(dá)，3組血管內(nèi)皮細(xì)胞層均可見棕色顆?；蜃厣【€。表明ST6Gal-Ⅰ主要分布于內(nèi)膜下內(nèi)皮細(xì)胞層。表明ST6Gal-Ⅰ主要分布于內(nèi)膜、中膜平滑肌層。如Fig 4所示，對(duì)照組與基線模型組比較，血管內(nèi)皮層ST6Gal-Ⅰ的表達(dá)量隨著高脂飼料的長(zhǎng)期喂養(yǎng)而明顯降低。而瑞舒伐他汀藥物組與對(duì)照組相比，隨著AS的病理性變化減弱，血管內(nèi)皮中ST6Gal-Ⅰ蛋白表達(dá)量有所增加。提示在AS發(fā)生、發(fā)展的進(jìn)程中，α2,6-唾液酸轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)與之密切相關(guān)，且瑞舒伐他汀可以有效回復(fù)唾液酸轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)。瑞舒伐他汀可能通過(guò)影響糖基轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)來(lái)發(fā)揮治療AS的作用。α2,6-唾液酸轉(zhuǎn)移酶可能是個(gè)全新的藥物作用靶點(diǎn)。

3討論

動(dòng)脈粥樣硬化是心血管疾病中最常見的疾病，也是危害人類健康的常見病，已成為全球關(guān)注的熱點(diǎn)。其形成基礎(chǔ)是脂質(zhì)代謝異常導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷和功能紊亂，血管中膜平滑肌細(xì)胞表型發(fā)生轉(zhuǎn)換、由內(nèi)膜向中膜遷移、增殖并形成纖維帽以包裹泡沫細(xì)胞等粥樣物質(zhì)[15]，誘發(fā)慢性炎癥反應(yīng)[3]，從而形成動(dòng)脈粥樣斑塊。瑞舒伐他汀因有較好的降脂及抗炎作用，可逆轉(zhuǎn)粥樣斑塊形成，因此常用于抗動(dòng)脈粥樣硬化研究。近年來(lái)大量研究證實(shí)，瑞舒伐他汀除了調(diào)血脂作用外，還可通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)皮功能、抗血栓形成、穩(wěn)定斑塊、抑制血管炎癥等多種途徑治療和預(yù)防AS 的發(fā)生發(fā)展。

唾液酸是9碳單糖，通常以短鏈殘基的形式鏈接在糖蛋白、糖脂等糖綴合物的末端，如以α-2,3糖苷鍵連接到半乳糖(Gal)上,α-2,6糖苷鍵連接到半乳糖或N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)上,α-2,8糖苷鍵連接到其他唾液酸上。唾液酸是重要的生物信息傳遞分子,細(xì)胞表面糖蛋白和糖脂的唾液酸化修飾在許多生物過(guò)程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,包括細(xì)胞黏附、抗原識(shí)別和信號(hào)傳導(dǎo)等。唾液酸糖基轉(zhuǎn)移酶可以把胞苷一磷酸-β-N-乙酰神經(jīng)氨酸(CMP-β-N-acetylneuramic acid)中的唾液酸基轉(zhuǎn)移到糖蛋白和糖脂的鏈端，根據(jù)轉(zhuǎn)移唾液酸基后新形成的糖苷鍵的類型可以把唾液酸糖基轉(zhuǎn)移酶分為四類，其中ST6Gal-Ⅰ催化α-2,6糖苷鍵連接類型的糖蛋白形成，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞之間的相互作用的潛力。如在結(jié)腸直腸癌轉(zhuǎn)移灶中ST6Gal-Ⅰ的活性升高明顯，而在正常結(jié)腸黏膜細(xì)胞中ST6Gal-Ⅰ的活性很低或不存在[16-18]。表明與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。

本研究采用高脂飼養(yǎng)ApoE-/-小鼠構(gòu)建AS模型，通過(guò)血液指標(biāo)和組織形態(tài)分析，顯示瑞舒伐他汀干預(yù)7周后，小鼠血脂水平與對(duì)照組比較，LDL-C、TG均明顯下降(P<0.05)；油紅O染色結(jié)果顯示，瑞舒伐他汀干預(yù)組主動(dòng)脈弓部斑塊面積較對(duì)照組明顯減??；HE染色亦顯示瑞舒伐他汀組內(nèi)膜厚度較對(duì)照組明顯變薄，3組結(jié)果均說(shuō)明瑞舒伐他汀具有降脂及抑制斑塊形成的作用。免疫組化技術(shù)分析表明，對(duì)照組主動(dòng)脈弓部管腔內(nèi)皮層中ST6Gal-Ⅰ的表達(dá)明顯降低。給予瑞舒伐他汀處理后， ST6Gal-Ⅰ的表達(dá)上調(diào)，說(shuō)明動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)展與唾液酸轉(zhuǎn)移酶有密切關(guān)聯(lián)。以往研究顯示，AS是在各種炎癥作用下發(fā)生的一系列病理改變，而炎癥與糖基轉(zhuǎn)移酶的變化密切相關(guān)。Doring等[12]發(fā)現(xiàn)在敲除ST3Gal-Ⅳ的小鼠中動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生率明顯較低。Gracheva等[19-20]研究顯示動(dòng)脈粥樣硬化病人動(dòng)脈內(nèi)膜下和血清中唾液酸糖基轉(zhuǎn)移酶活性均明顯增加?；谏鲜鲅芯浚覀冋J(rèn)為糖基轉(zhuǎn)移酶與動(dòng)脈粥樣硬化病理過(guò)程存在的密切聯(lián)系是值得關(guān)注的， ST6Gal-Ⅰ表達(dá)變化可能是瑞舒伐他汀抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的機(jī)制之一。因此，進(jìn)一步揭示唾液酸轉(zhuǎn)移酶與治療動(dòng)脈粥樣硬化的分子機(jī)制，可以為臨床治療動(dòng)脈粥樣硬化提供新的靶點(diǎn)，但是更深層的作用機(jī)制還需進(jìn)一步的研究。

(致謝：本實(shí)驗(yàn)在重慶醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)研究院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室完成，感謝重慶醫(yī)科大學(xué)提供的科研平臺(tái)，感謝實(shí)驗(yàn)主要參與人員張軍老師、蒲強(qiáng)紅師兄、鄧瀟師兄的幫助，感謝導(dǎo)師于超教授對(duì)該實(shí)驗(yàn)及論文撰寫的悉心指導(dǎo)。)

參考文獻(xiàn):

[1]van Gils J M, Ramkhelawon B, Fernandes L,et al.Endothelial expression of guidance cues in vessel wall homeostasis dysregulation under proatherosclerotic conditions[J].ArteriosclerThrombVascBiol, 2013, 33(5): 911-19.

[2]Kriszbacher I, Koppan M, Bodis J.Inflammation, atherosclerosis, and coronary artery disease[J].NEnglJMed, 2005, 353(4): 429-30.

[3]Ross R.Atherosclerosis-an inflammatory disease[J].NEnglJMed, 1999, 340(2): 115-26.

[4]Gregersen I, Holm S, Dahl T B,et al.A focus on inflammation as a major risk factor for atherosclerotic cardiovascular diseases[J].ExpertRevCardiovascTher, 2016,14(3):391-403.

[5]Ross R, Glomset J A.The pathogenesis of atherosclerosis(first of two parts)[J].NEnglJMed, 1976, 295(7): 369-77.

[6]Ross R, Glomset J A.The pathogenesis of atherosclerosis (second of two parts)[J].NEnglJMed, 1976, 295(8): 420-25.

[7]Lusis A J.Atherosclerosis[J].Nature, 2000, 407(6801): 233-41.

[8]琚娜娜, 吳明軍, 趙德璋,等.白介素-1β通過(guò)上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞中FucT-Ⅶ及蛋白糖基化調(diào)控細(xì)胞間黏附作用[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2013,29(3): 337-42.

[8]Ju N N,Wu M J,Zhao D Z,et al.Interleukin-1β regulates cell adhesion via up-reulating FucT-Ⅶ and proteins glycolation in vascular endothelial cells[J].ChinPharmacolBull,2013,29(3):337-42.

[9]Zhuo Y, Bellis S L.Emerging role of alpha 2,6-sialic acid as a negative regulator of galectin binding and function[J].JBiolChem, 2011, 286(8): 5935-41.

[10]Woodard-Grice A V, McBrayer A C, Wakefield J K,et al.Proteolytic shedding of ST6Gal-Ⅰ by BACE1 regulates the glycosylation and function of alpha4beta1 integrins[J].JBiolChem, 2008, 283(39): 26364-73.

[11]Sacco R L, Liao J K.Drug Insight: statins and stroke[J].NatClinPractCardiovascMed, 2005, 2(11): 576-84.

[12]Doring Y, Noels H, Mandl M,et al.Deficiency of the sialyltransferase St3Gal4 reduces Ccl5-mediated myeloid cell recruitment and arrest: short communication[J].CircRes, 2014, 114(6): 976-81.

[13]Yasukawa Z, Sato C, Kitajima K.Inflammation-dependent changes in alpha 2,3-, alpha 2,6-, and alpha 2,8-sialic acid glycotopes on serum glycoproteins in mice[J].Glycobiology, 2005, 15(9): 827-37.

[14]Feig J E, Shang Y, Rotllan N,et al.Statins promote the regression of atherosclerosis via activation of the CCR7-dependent emigration pathway in macrophages[J].PlosOne, 2011, 6(12): e28534.

[15]Tedgui A, Mallat Z.Apoptosis as a determinant of atherothrombosis[J].ThrombHaemost, 2001, 86(1): 420-26.

[16]Le Marer N, Stehelin D.High alpha-2,6-sialylation of N-acetyllactosamine sequences in ras-transformed rat fibroblasts correlates with high invasive potential[J].Glycobiology, 1995, 5(2): 219-26.

[17]Ito H, Hiraiwa N, Sawada-Kasugai M,et al.Altered mRNA expression of specific molecular species of fucosyl-and sialyl-transferases in human colorectal cancer tissues[J].IntJCancer, 1997, 71(4): 556-64.

[18]Petretti T, Kemmner W, Schulze B,et al.Altered mRNA expression of glycosyltransferases in human colorectal carcinomas and liver metastases[J].GUT, 2000, 46(3): 359-66.

[19]Gracheva E V, Samovilova N N, Golovanova N K,et al.Sialyltransferase activity of human plasma and aortic intima is enhanced in atherosclerosis[J].BiochimBiophysActa, 2002, 1586(1): 123-28.

[20]Gracheva E V, Samovilova N N, Golovanova N K,et al.Sialyltransferase activity in normal and atherosclerotic human aorta intima[J].Biochemistry(Mosc), 2001, 66(4): 397-401.

12) and rosuvastatin group(n=12). Sixteen weeks later, control group was sacrificed. Serum and aortic intima were saved. Control group and rosuvastatin group were fed for seven weeks continually.Concentrations of serum lipids(TC, TG, LDL and HDL) were analyzed. Sections from the aortic root were examined by Hematoxylin-Eosin(HE) staining. The size of atherosclerotic lesion in each section was evaluated. Expression of ST6Gal-Ⅰ in aortic intima was detected by immunohistochemistry.ResultsPlasma TG and LDL-C, plaque areas and intimal thickness of control group were significant higher than those of baseline group(P<0.05).Those results indicated that the AS model was successfully constructed. After seven weeks,the plaque areas and concentrations of serum lipids of rosuvastatin group were obviously smaller than those of control group(P<0.05). The expression of ST6Gal-Ⅰ in aortic root was decreased in control group compared to the baseline, and which was increased in control group compared to the rosuvastatin group.ConclusionRosuvastatin could inhibit the progression of atherosclerosis, which might be related to the expression of ST6Gal-Ⅰ in aortic root.

Correlation of ST6Gal-Ⅰ expression and atherosclerotic plaque reduction induced by rosuvastatin in ApoE-/-mice

LIU Yan,ZHANG Jun,PU Qiang-hong,DENG Xiao,YU Chao

(InstituteofLifeSciences,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China)

Key words:atherosclerosis; hypercholestrolemia; ApoE-/-mice; plaque; rosuvastatin; ST6Gal-Ⅰ

Abstract:AimTo investigate whether rosuvastatin induced reduction of atherosclerotic plaque was related to the expression of Sialyltransferase(ST6Gal-Ⅰ)in ApoE-/-mice.MethodsSix-weeks old ApoE-/-mice fed with high fat were divided randomly into three groups: baseline group (n=12), control group (n=

收稿日期:2015-12-16,修回日期:2016-02-05

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No NSFC 81370403); 高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金資助課題(No 201255 03110008)

作者簡(jiǎn)介:劉燕(1991-)，女，碩士生，研究方向：心血管病炎癥機(jī)制，E-mail:liuyan_yanliu@163.com； 于超(1963-)，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：心血管病炎癥機(jī)制，通訊作者，E-mail:yuchaom@163.com

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.04.017

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-1978(2016)04-0525-06

中國(guó)圖書分類號(hào)：R-332；R322.12；R543.502.3；R589.22；R972.6

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-3-18 11:22網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160318.1122.034.html