?

長鏈非編碼RNA H19在泌尿系腫瘤中的研究進(jìn)展

田躍軍代宇郭琦王志平洪梅

(蘭州大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科研究所甘肅省泌尿系疾病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室甘肅省泌尿系統(tǒng)疾病臨床醫(yī)學(xué)中心，甘肅蘭州730030)

〔關(guān)鍵詞〕H19；IGF2；泌尿系腫瘤；DNA甲基化

長鏈非編碼RNA可在轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后等多個水平參與基因的表達(dá)調(diào)控，從而參與細(xì)胞的生長、發(fā)育、代謝、凋亡等生理過程。H19作為長鏈非編碼RNA的一員，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，其通過基因組印記、染色質(zhì)修飾等表觀遺傳學(xué)方式調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)，從而影響腫瘤的各種生物學(xué)活動。而最近研究發(fā)現(xiàn)，H19在泌尿系腫瘤中也扮演著重要的角色。本文著重從基因表達(dá)的表觀遺傳調(diào)控方面探討H19與泌尿系腫瘤的關(guān)系，希望為其臨床應(yīng)用提供一個新的標(biāo)志物和藥物靶點(diǎn)。

1H19的結(jié)構(gòu)和功能

H19定位于小鼠7號染色體末端，人染色體11p15.5，長約為2.6 kb，共含5個外顯子和4個內(nèi)含子，與人胰島素樣生長因子2(IGF2)基因是一對在正常人胚胎組織中表現(xiàn)為印跡特征的基因，正常情況下H19為母源基因表達(dá)，IGF2為父源基因表達(dá)。印跡基因是指來源于父母雙方的等位基因，在DNA或組蛋白修飾的影響下，只有來源于一方親本的基因表達(dá)。H19和IGF2兩基因在基因組中定位非常接近，而且其表達(dá)調(diào)控也相互關(guān)聯(lián)，在多種腫瘤中存在H19/IGF2的印跡異常。

H19在進(jìn)化上呈高度的保守性，在胚胎組織中高表達(dá)，在成年組織中僅少量表達(dá)于心肌和骨骼肌，但在組織再生及腫瘤發(fā)生時被異常激活，主要定位于胞質(zhì)內(nèi)〔1,2〕。長鏈非編碼RNA(lncRNA)可通過染色體重塑、組蛋白修飾、調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)活性、生成miRNA等多種方式影響人類疾病的發(fā)生發(fā)展〔3〕。H19基因的第一個外顯子編碼一個微小RNA(miRNA)分子，即miR-675，H19可通過miR-675的加工調(diào)控來發(fā)揮作用〔4〕。

最近有文獻(xiàn)報道，內(nèi)源性表達(dá)的lncRNA還可充當(dāng)miRNA的分子海綿，通過吸附miRNA控制其活性〔5〕。在未分化的骨骼肌細(xì)胞中過表達(dá)miR-106a時，H19的表達(dá)水平也顯著增高，miR-106a可能通過與H19結(jié)合提高lncRNA的穩(wěn)定性；用siRNA干擾H19的表達(dá)后，5個miR-106a靶mRNA的表達(dá)水平均明顯降低了，過表達(dá)野生型H19能夠提高miR-106a靶報告基因的表達(dá)，而miR-106a的結(jié)合序列被突變的H19則完全喪失了這種活性。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明H19在miR-106a相關(guān)的miRNA家族中扮演著一個分子海綿的角色〔6〕。

Let-7家族miRNA在發(fā)育、代謝和腫瘤中都有重要作用，過表達(dá)Let-7能夠誘導(dǎo)早熟性的肌肉分化。Kallen等〔7〕報道，H19敲減后能誘導(dǎo)同樣的表型，交聯(lián)免疫共沉淀測序技術(shù)也支持H19作為一種分子海綿調(diào)節(jié)Let-7的豐度。Let-7還是一個潛在的抑癌基因，能夠抑制細(xì)胞增殖和運(yùn)動相關(guān)癌基因的表達(dá)。Yan等〔8〕也報道，過表達(dá)H19促進(jìn)了卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系的運(yùn)動和轉(zhuǎn)移，這是由于H19干擾了Let-7對其靶基因的調(diào)控作用；同時，二甲雙胍能夠降低腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動和侵襲能力，其可能通過改變DNA甲基化狀態(tài)下調(diào)H19的表達(dá)。

2H19自身的表達(dá)調(diào)控

2.1DNA甲基化對H19的調(diào)控每個印記基因都有自己的調(diào)控區(qū)，稱為差異甲基化區(qū)域(DMR)或印記調(diào)控區(qū)(ICR)，印跡基因的表達(dá)受調(diào)控區(qū)DMR調(diào)控，甲基化發(fā)生在該區(qū)域。DNA的甲基化主要是DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT)發(fā)生催化，以S-腺苷甲硫氨酸(SAM)為供體發(fā)生反應(yīng)的過程。H19基因的DMR或ICR定位于H19基因上游-4到-2 kb處，H19/IGF基因位點(diǎn)的印記狀態(tài)主要取決于H19啟動子上游2.4 kb的印記調(diào)控中心，該調(diào)控區(qū)富含CpG，DNA的甲基化修飾就發(fā)生在CpG位點(diǎn)〔9,10〕。在小鼠中，精子H19 DMR甲基化異常不僅可降低IGF2基因的表達(dá)，也可導(dǎo)致小鼠胚胎著床后的再吸收〔11〕。對于母源等位基因，H19印記調(diào)控區(qū)DMR的去甲基化狀態(tài)使其與多功能轉(zhuǎn)錄因子鋅指蛋白(CTCF)結(jié)合，形成絕緣子(insulator)，阻礙增強(qiáng)子(enhancer)對IGF2的轉(zhuǎn)錄激活作用〔12〕。

2.2轉(zhuǎn)錄因子對H19的調(diào)控c-Myc能結(jié)合H19調(diào)控區(qū)DMR附近的增強(qiáng)盒E-boxes，而E-boxes是一段高度保守、具有蛋白結(jié)合位點(diǎn)的DNA序列，結(jié)合之后能促進(jìn)組蛋白乙?；约凹せ頗19發(fā)生轉(zhuǎn)錄；且進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證明c-Myc的過表達(dá)可上調(diào)H19，使IGF2下調(diào)，但不影響H19基因的印跡狀態(tài)〔13〕。在母源染色體上，轉(zhuǎn)錄因子CTCF可結(jié)合到H19調(diào)控區(qū)ICR上，通過黏連蛋白(cohesin)形成一個轉(zhuǎn)錄絕緣子〔14〕。這個轉(zhuǎn)錄絕緣子阻礙了增強(qiáng)子對IGF2的轉(zhuǎn)錄激活，使得母源H19等位基因獨(dú)立占據(jù)了增強(qiáng)子；而父源ICR的甲基化造成了H19啟動子的高甲基化和H19的表達(dá)抑制。H19/IGF2調(diào)控區(qū)ICR的絕緣子活性具有細(xì)胞類型特異性，除了依賴不同細(xì)胞的特異性增強(qiáng)子，也取決于絕緣子蛋白CTCF的翻譯后修飾狀態(tài)〔15〕。更進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)一些轉(zhuǎn)錄因子E2F〔16〕、Slug〔17〕、p53和HIF-1α〔18〕，在調(diào)控H19轉(zhuǎn)錄水平也發(fā)揮著重要作用。

3H19與膀胱癌

在我國，膀胱癌發(fā)病率隨年齡的增長而增加，在60歲以上人群中超過腎腫瘤，居泌尿系惡性腫瘤發(fā)病的首位〔19〕。臨床上以手術(shù)治療為主，輔助放療、化療、膀胱灌注等手段的綜合治療，但其療效難以令人滿意。目前已有報道H19促進(jìn)膀胱癌的發(fā)生發(fā)展，并作為一種潛在的治療靶點(diǎn)參與膀胱癌的治療。

Byun等〔20〕篩檢了41例膀胱癌和它們的癌旁黏膜組織，通過對其mRNA的等位基因進(jìn)行評估，發(fā)現(xiàn)膀胱癌病例中22.2%存在IGF2的印跡丟失(LOI)，12.5%存在H19的LOI。通過使用等位基因焦磷酸測序法對IGF2和H19的調(diào)控區(qū)DMR進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)膀胱癌70%在H19和IGF2的調(diào)控區(qū)DMR發(fā)生異常的DNA甲基化。H19表達(dá)升高是膀胱癌復(fù)發(fā)的早期分子標(biāo)志，H19表達(dá)升高是由于正常情況下啟動子被甲基化因而不表達(dá)的父源H19等位基因在腫瘤中出現(xiàn)了表達(dá)。進(jìn)一步研究膀胱癌中印記缺失和DNA甲基化之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)印記缺失與調(diào)控區(qū)DMR的DNA甲基化的改變無必然的聯(lián)系，同時DNA甲基化異常也可在不依靠基因組印記缺失的情況下獨(dú)立發(fā)生。由此認(rèn)為在膀胱癌中，H19和IGF2發(fā)生DNA甲基化異常是印跡缺失的一個必要環(huán)節(jié)，且先于LOI，DNA甲基化異常的發(fā)生雖然是印記缺失的一個必要環(huán)節(jié)，但不是印記缺失的充分條件。

Luo等〔21〕用RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)在膀胱癌組織和細(xì)胞株中，H19的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織和正常膀胱細(xì)胞株。當(dāng)沉默H19的表達(dá)時，ID2的表達(dá)水平降低，膀胱癌細(xì)胞株T24和253J的生長明顯受到抑制。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)ID2和H19之間存在一種正相關(guān)，而且H19對ID2有一個正性的調(diào)控作用，由此認(rèn)為在膀胱癌細(xì)胞中過表達(dá)的H19激活了ID2，從而促進(jìn)了膀胱癌細(xì)胞的增殖能力。Luo等〔22〕從另一方面證明了H19與膀胱癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移機(jī)制的關(guān)系，在膀胱癌中H19與EZH2基因的增強(qiáng)子結(jié)合，隨后激活Wnt/β-catenin信號通路，使E-cadherin的表達(dá)水平缺失，誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的發(fā)生，從而促進(jìn)了膀胱癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。既往研究證實(shí)Wnt信號通路與EMT關(guān)系密切，當(dāng)經(jīng)典的Wnt信號通路被激活時，誘導(dǎo)β-catenin向胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，進(jìn)而促使Slug表達(dá)升高，下調(diào)E-cadherin的表達(dá)水平，誘導(dǎo)EMT發(fā)生，最終促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移，證明H19在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展中起到了一個促癌基因的作用〔23〕。

Amit等〔24,25〕發(fā)現(xiàn)IGF2和H19兩者特異性地表達(dá)在高度惡性的腫瘤細(xì)胞中，不表達(dá)于正常細(xì)胞，當(dāng)限制IGF2或者H19的表達(dá)時，腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移能力受到顯著抑制。受IGF2-P4(IGF2第4啟動子) 或者H19 啟動子調(diào)控，表達(dá)白喉毒素A(DTA)的單啟動子載體，稱作IGF2-P4-DTA或者H19-DTA。將IGF2-P4和 H19兩者啟動子同時調(diào)控的DTA表達(dá)載體稱為雙啟動子白喉毒素A載體(H19-DTA-IGF2-P4-DTA)。他們進(jìn)一步建立膀胱腫瘤動物模型研究發(fā)現(xiàn)H19-DTA-IGF2-P4-DTA在抑制膀胱癌細(xì)胞生長方面明顯優(yōu)于單啟動子白喉毒素A載體(IGF2-P4-DTA 和 H19-DTA)，將雙啟動子白喉毒素A載體轉(zhuǎn)染入膀胱腫瘤細(xì)胞，其可在不影響正常膀胱組織細(xì)胞的前提下有效殺傷膀胱腫瘤細(xì)胞，提示H19有望在膀胱腫瘤的臨床治療方面有一個好的應(yīng)用前景。Gofrit等〔26〕在表淺性膀胱癌治療方案的Ⅱb期臨床實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DT A BC-819是H19啟動子序列調(diào)控的DNA質(zhì)粒，不僅抑制了2/3病人的新的腫瘤生長，同時使剩下1/3癌灶遭到徹底破壞,BC-819的安全性和有效性在治療膀胱癌中取得了一個好的效果，其有望成為治療膀胱癌的新藥物。

4H19與腎癌

腎癌約占人類惡性腫瘤的3%，位居發(fā)達(dá)國家惡性腫瘤前10位，在我國腎癌的發(fā)病率呈逐年增高趨勢。腎癌作為一種多基因相關(guān)腫瘤，發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜〔27〕。腎癌主要包括腎細(xì)胞癌和腎母細(xì)胞瘤。目前國內(nèi)外有關(guān)H19與腎癌關(guān)系的研究成果提示，H19有望成為腎癌早期診斷的標(biāo)志物以及治療的分子靶標(biāo)。

Cardoso等〔28〕通過焦磷酸測序法和多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)(MS-MLPA)發(fā)現(xiàn)腎母細(xì)胞瘤(Wilms瘤)的32個樣本中有28個樣本H19調(diào)控區(qū)DMR發(fā)生高甲基化，在血液樣本中H19調(diào)控區(qū)DMR高甲基化狀態(tài)也是一致的，有5個腫瘤樣本存在彌漫性或局灶性的間變(anaplasia)，其中4個檢出了H19調(diào)控區(qū)DMR的高甲基化，H19對Wilms瘤的發(fā)展起著抑制作用。Scott等〔29〕研究發(fā)現(xiàn)在腎母細(xì)胞瘤中定位于染色體11p15區(qū)域的基因可出現(xiàn)69%表觀遺傳異常，其中包括37%H19表突變(epimutation)和32%父源性單親源二體(pUPD)，當(dāng) H19表突變發(fā)生時，腎母細(xì)胞瘤有一個更高的發(fā)病風(fēng)險，這也預(yù)示其在腎母細(xì)胞瘤中扮演抑癌基因的角色。

Charlton等〔30,31〕研究發(fā)現(xiàn)Wilms瘤中腎臟的發(fā)育相關(guān)基因出現(xiàn)了一個低甲基化狀態(tài)，同時其腎臟組織的抑癌基因(CASP8、H19、MIR195、RB1、TSPAN32)被過甲基化而表達(dá)沉默。Wilms瘤患者13個樣本中11個樣本的H19的調(diào)控區(qū)DMR發(fā)生甲基化升高，其正常腎組織(NKs)的甲基化水平明顯低于腎源性殘余(NRs)的甲基化水平，NRs的甲基化水平明顯低于Wilms瘤的甲基化水平。而且隨著腎母細(xì)胞瘤惡性程度越高，腎臟組織的DNA甲基化水平越高，由此認(rèn)為通過對其甲基化狀態(tài)進(jìn)行分析為研究腎源性殘余向腎母細(xì)胞瘤的轉(zhuǎn)變提供了一個新的證據(jù)。

Wang等〔32〕用qRT-PCR分析發(fā)現(xiàn)在腎細(xì)胞癌3種細(xì)胞株786-O、ACHN、Caki-2和癌組織中，H19的表達(dá)量明顯高于正常腎細(xì)胞株HK-2和正常癌旁組織。當(dāng)沉默H19的表達(dá)時，Wound healing分析實(shí)驗(yàn)證明，腎細(xì)胞癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力明顯受到抑制，Kaplan-Meier分析發(fā)現(xiàn)，在腎細(xì)胞癌患者中，高表達(dá)H19的患者預(yù)后不良，而且H19的高表達(dá)與更多的臨床分期和更短的生存期成正相關(guān)，由此認(rèn)為H19在腎細(xì)胞癌中起到了促癌基因的作用。

5H19與前列腺癌

前列腺癌在歐美國家較為多見，中國近年來其發(fā)病率逐年增加，嚴(yán)重威脅著老年男性的健康〔33〕。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，有研究證明DNA甲基化等表觀遺傳學(xué)改變對前列腺癌的發(fā)生發(fā)展起著重要作用〔34〕。Dobosy等〔35〕給小鼠喂食膽堿和蛋氨酸缺乏(CMD)的飼料，造成小鼠甲基缺乏，將其前列腺組織與正常前列腺組織作對照，發(fā)現(xiàn)前者IGF2和H19的表達(dá)水平顯著高于后者。染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)顯示，在CMD前列腺組織中，H19和IGF2啟動子的抑制性組蛋白修飾(H3K9二甲基化)下降，而IGF2和H19啟動子的DNA甲基化無改變。他們認(rèn)為在CMD前列腺組織中，因?yàn)榻M蛋白修飾比DNA甲基化更容易發(fā)生改變，所以IGF2和H19的表達(dá)水平升高。

Paradowska等〔36〕發(fā)現(xiàn)在良性前列腺增生組織中H19 CpGs的甲基化大于80%；相反在惡性前列腺癌中，他們篩檢了30個樣本，發(fā)現(xiàn)其中的9個樣本的CpGs甲基化狀態(tài)只接近41%。通過對前列腺癌和良性前列腺增生組織作對比，證實(shí)H19的ICR或DMR調(diào)控區(qū)的甲基化狀態(tài)在統(tǒng)計學(xué)上顯著不同，前列腺癌出現(xiàn)明顯的甲基化缺失。染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)顯示在良性前列腺增生中IGF2/H19的調(diào)控區(qū)ICR發(fā)生了組蛋白H3K9二甲基化，而在前列腺癌中這種現(xiàn)象不發(fā)生。他們認(rèn)為在惡性前列腺癌和良性前列腺增生之間的IGF2/H19基因的多功能轉(zhuǎn)錄因子CTCF結(jié)合區(qū)域，其甲基化狀態(tài)顯著不同。通過對IGF2/H19的調(diào)控區(qū)ICR或DMR的DNA甲基化和組蛋白修飾狀態(tài)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)在前列腺癌中H19基因存在顯著甲基化缺失，將可能對前列腺癌的早期診斷和治療提供幫助。

Zhu等〔37〕分析發(fā)現(xiàn)H19和H19編碼的miR-675的表達(dá)量，在轉(zhuǎn)移性前列腺癌細(xì)胞株M12中的表達(dá)水平顯著低于非轉(zhuǎn)移性前列腺癌細(xì)胞株P(guān)69。伴隨H19的表達(dá)量在非轉(zhuǎn)移性前列腺癌細(xì)胞株P(guān)69和PC3中的上升，miR-675的表達(dá)量也得到提高，且癌細(xì)胞的遷移能力明顯受到抑制，說明H19與miR-675之間存在正相關(guān)。可是在轉(zhuǎn)移性前列腺癌細(xì)胞株M12中，過表達(dá)H19并不能提高miR-675的表達(dá)水平，也無法抑制癌細(xì)胞的遷移能力，說明前列腺癌細(xì)胞株M12的轉(zhuǎn)移能力可能只與miR-675的表達(dá)水平相關(guān)。更進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)H19或miR-675在前列腺癌細(xì)胞株P(guān)69中對TGFBI有負(fù)性調(diào)控作用，而以往研究證實(shí)TGFBI作為一種細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)蛋白，可誘導(dǎo)EMT的發(fā)生，促進(jìn)多種腫瘤的轉(zhuǎn)移能力〔38〕。雙熒光素酶分析顯示miR-675可直接結(jié)合TGFB1的mRNA 3′UTR抑制其翻譯活性，TGFBI是miR-675的一個潛在靶基因。他們認(rèn)為在前列腺癌中，H19-miR-675直接降低了TGFBI的表達(dá)水平，進(jìn)而在前列腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移機(jī)制中起到了主要作用。

Ribarska等〔39〕研究發(fā)現(xiàn)前列腺癌中H19表達(dá)降低，H19調(diào)控區(qū)DMR在良性前列腺組織和惡性前列腺癌組織中均存在DNA低甲基化或DNA高甲基化現(xiàn)象；同時他們還發(fā)現(xiàn)ZAC1轉(zhuǎn)錄因子可誘導(dǎo)印記基因H19、CDKN1C、IGF2的表達(dá)水平，通過觀察印記基因與前列腺癌基因EZH2、ERG、HOXC6之間的關(guān)系，證明一些轉(zhuǎn)錄因子在基因印記網(wǎng)絡(luò)中扮演著重要角色；但他們認(rèn)為H19、IGF2等印記基因可獨(dú)立依靠DNA的甲基化而在前列腺癌中異常表達(dá)，也為前列腺癌的臨床研究提供了一個新的方法。

6小結(jié)

隨著人們生活水平的提高，近年來泌尿系腫瘤的發(fā)病率和死亡率在我國呈現(xiàn)連續(xù)增長的趨勢，嚴(yán)重威脅人們健康。其中泌尿系腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是患者最重要的死亡原因，但目前臨床上缺乏有效的治療手段。所以，研究泌尿系腫瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，探索出一種新型有效的治療方法至關(guān)重要。目前對于H19的研究還處于起步階段，特別是在泌尿系統(tǒng)腫瘤中的報道還比較少，其影響泌尿系腫瘤的機(jī)制還有待進(jìn)一步探索。現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)H19在膀胱癌、前列腺癌和腎細(xì)胞癌中主要作為一種癌基因，在腎母細(xì)胞瘤中起著抑癌基因作用，其異常表達(dá)與這幾種泌尿系腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制密切相關(guān)，這也為下一步臨床治療打下了基礎(chǔ)。能否有效糾正其在腫瘤中的異常表達(dá)，是泌尿系腫瘤中的潛在治療策略，H19作為一種新的藥物靶點(diǎn)，在膀胱癌治療中已經(jīng)取得了較好的效果，我們相信隨著研究的不斷深入，其必將為腎癌、前列腺癌等泌尿系腫瘤乃至多種腫瘤的臨床研究提供一個新的策略和思路。

7參考文獻(xiàn)

1Gabory A,Jammes H,Dandolo L.The H19 locus:role of an imprinted non-coding RNA in growth and development〔J〕.Bioessays,2010;32(6):473-80.

2Matouk I,Raveh E,Ohana P,etal.The increasing complexity of the oncofetal H19 gene locus:functional dissection and therapeutic intervention〔J〕.Int J Mol Sci,2013;14(2):4298-316.

3Angrand PO,Vennin C,Le Bourhis X,etal.The role of long non-coding RNAs in genome formatting and expression〔J〕.Front Genet,2015;6:165.

4Keniry A,Oxley D,Monnier P,etal.The H19 lincRNA is a developmental reservoir of miR-675 that suppresses growth and Igf1r〔J〕.Nat Cell Biol,2012;14(7):659-65.

5Deng L,Yang SB,Xu FF,etal.Long noncoding RNA CCAT1 promotes hepatocellular carcinoma progression by functioning as let-7 sponge〔J〕.J Exp Clin Cancer Res,2015;34(1):18.

6Imig J,Brunschweiger A,Brummer A,etal.miR-CLIP capture of a miRNA targetome uncovers a lincRNA H19-miR-106a interaction〔J〕.Nat Chem Biol,2015;11(2):107-14.

7Kallen AN,Zhou XB,Xu J,etal.The imprinted H19 lncRNA antagonizes let-7 microRNAs〔J〕.Mol Cell,2013;52(1):101-12.

8Yan L,Zhou J,Gao Y,etal.Regulation of tumor cell migration and invasion by the H19/let-7 axis is antagonized by metformin-induced DNA methylation〔J〕.Oncogene,2015;34(23):3076-84.

9Bogdanovic O,Veenstra GJ.DNA methylation and methyl-CpG binding proteins:developmental requirements and function〔J〕.Chromosoma,2009;118(5):549-65.

10Eun B,Sampley ML,Van Winkle MT,etal.The Igf2/H19 muscle enhancer is an active transcriptional complex〔J〕.Nucleic Acids Res,2013;41(17):8126-34.

11Pathak S,Saxena M,D'Souza R,etal.Disrupted imprinting status at the H19 differentially methylated region is associated with the resorbed embryo phenotype in rats〔J〕.Reprod Fertil Dev,2010;22(6):939-48.

12Bartolomei MS.Genomic imprinting:employing and avoiding epigenetic processes〔J〕.Genes Dev,2009;23(18):2124-33.

13Barsyte-Lovejoy D,Lau SK,Boutros PC,etal.The c-Myc oncogene directly induces the H19 noncoding RNA by allele-specific binding to potentiate tumorigenesis〔J〕.Cancer Res,2006;66(10):5330-7.

14Nativio R,Wendt KS,Ito Y,etal.Cohesin is required for higher-order chromatin conformation at the imprinted IGF2-H19 locus〔J〕.PLoS Genet,2009;5(11):e1000739.

15Ideraabdullah FY,Thorvaldsen JL,Myers JA,etal.Tissue-specific insulator function at H19/Igf2 revealed by deletions at the imprinting control region〔J〕.Hum Mol Genet,2014;23(23):6246-59.

16Berteaux N,Lottin S,Monte D,etal.H19 mRNA-like noncoding RNA promotes breast cancer cell proliferation through positive control by E2F1〔J〕.J Biol Chem,2005;280(33):29625-36.

17Matouk IJ,Raveh E,Abu-lail R,etal.Oncofetal H19 RNA promotes tumor metastasis〔J〕.Biochim Biophys Acta,2014;1843(7):1414-26.

18Matouk IJ,Mezan S,Mizrahi A,etal.The oncofetal H19 RNA connection:hypoxia,p53 and cancer〔J〕.Biochim Biophys Acta,2010;1803(4):443-51.

19韓蘇軍,張思維,陳萬青,等.中國膀胱癌發(fā)病現(xiàn)狀及流行趨勢分析〔J〕.癌癥進(jìn)展,2013;11(1):89-95.

20Byun HM,Wong HL,Birnstein EA,etal.Examination of IGF2 and H19 loss of imprinting in bladder cancer〔J〕.Cancer Res,2007;67(22):10753-8.

21Luo M,Li Z,Wang W,etal.Upregulated H19 contributes to bladder cancer cell proliferation by regulating ID2 expression〔J〕.FEBS J,2013;280(7):1709-16.

22Luo M,Li Z,Wang W,etal.Long non-coding RNA H19 increases bladder cancer metastasis by associating with EZH2 and inhibiting E-cadherin expression〔J〕.Cancer Lett,2013;333(2):213-21.

23Howard S,Deroo T,Fujita Y,etal.A positive role of cadherin in Wnt/beta-catenin signalling during epithelial-mesenchymal transition〔J〕.PLoS One,2011;6(8):e23899.

24Amit D,Hochberg A.Development of targeted therapy for bladder cancer mediated by a double promoter plasmid expressing diphtheria toxin under the control of H19 and IGF2-P4 regulatory sequences〔J〕.J Transl Med,2010;8:134.

25Amit D,Gofrit ON,Matouk I,etal.Use of preclinical models to assess the therapeutic potential of new drug candidates for bladder cancer〔J〕.Semin Oncol,2012;39(5):534-42.

26Gofrit ON,Benjamin S,Halachmi S,etal.DNA based therapy with diphtheria toxin-A BC-819:a phase 2b marker lesion trial in patients with intermediate risk nonmuscle invasive bladder cancer〔J〕.J Urol,2014;191(6):1697-702.

27Torre LA,Bray F,Siegel RL,etal.Global cancer statistics,2012〔J〕.CA Cancer J Clin,2015;65(2):87-108.

28Cardoso LC,Tenorio Castano JA,Pereira HS,etal.Constitutional and somatic methylation status of DMRH19 and KvDMR in Wilms tumor patients〔J〕.Genet Mol Biol,2012;35(4):714-24.

29Scott RH,Murray A,Baskcomb L,etal.Stratification of Wilms tumor by genetic and epigenetic analysis〔J〕.Oncotarget,2012;3(3):327-35.

30Charlton J,Williams RD,Sebire NJ,etal.Comparative methylome analysis identifies new tumour subtypes and biomarkers for transformation of nephrogenic rests into Wilms tumour〔J〕.Genome Med,2015;7(1):11.

31Charlton J,Williams RD,Weeks M,etal.Methylome analysis identifies a Wilms tumor epigenetic biomarker detectable in blood〔J〕.Genome Biol,2014;15(8):434.

32Wang L,Cai Y,Zhao X,etal.Down-regulated long non-coding RNA H19 inhibits carcinogenesis of renal cell carcinoma〔J〕.Neoplasma,2015;62(3):412-8.

33闞秀芳,趙麗晶,李倩,等.前列腺癌診斷模式與發(fā)病率的研究進(jìn)展〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2013;33(23):6069-71.

34Friedlander TW,Roy R,Tomlins SA,etal.Common structural and epigenetic changes in the genome of castration-resistant prostate cancer〔J〕.Cancer Res,2012;72(3):616-25.

35Dobosy JR,Fu VX,Desotelle JA,etal.A methyl-deficient diet modifies histone methylation and alters Igf2 and H19 repression in the prostate〔J〕.Prostate,2008;68(11):1187-95.

36Paradowska A,Fenic I,Konrad L,etal.Aberrant epigenetic modifications in the CTCF binding domain of the IGF2/H19 gene in prostate cancer compared with benign prostate hyperplasia〔J〕.Int J Oncol,2009;35(1):87-96.

37Zhu M,Chen Q,Liu X,etal.lncRNA H19/miR-675 axis represses prostate cancer metastasis by targeting TGFBI〔J〕.FEBS J,2014;281(16):3766-75.

38Lee JM,Dedhar S,Kalluri R,etal.The epithelial-mesenchymal transition:new insights in signaling,development,and disease〔J〕.J Cell Biol,2006;172(7):973-81.

39Ribarska T,Goering W,Droop J,etal.Deregulation of an imprinted gene network in prostate cancer〔J〕.Epigenetics,2014;9(5):704-17.

〔2015-07-08修回〕

(編輯曲莉)

〔中圖分類號〕R737.11

〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)05-1234-04；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.099

通訊作者：洪梅(1973-)，女，博士，助理研究員，主要從事泌尿系腫瘤的基礎(chǔ)研究。

基金項目：國家自然科學(xué)基金(81302240)；蘭州大學(xué)中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)(lzujbky-2013-134，lzujbky-2014-165)；甘肅省科技計劃(145RJZA153)；甘肅省泌尿系疾病臨床醫(yī)學(xué)中心開放課題(mnlczxkf-23)

第一作者：田躍軍(1987-)，男，碩士在讀，主要從事泌尿系腫瘤的臨床與基礎(chǔ)研究。