鄭　末　姜忠敏

(天津市第五中心醫(yī)院病理科，天津　300450)

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皮層肌動(dòng)蛋白與磷酸化黏著斑激酶在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系

鄭末姜忠敏

(天津市第五中心醫(yī)院病理科，天津300450)

〔摘要〕目的探討皮層肌動(dòng)蛋白(Cortactin)與磷酸化黏著斑激酶(FAKPY397)在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中的表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系。方法選取2014年5月至2015年5月該院收治的行擇期手術(shù)的NSCLC患者120例，分別取患者肺癌組織和癌旁正常組織，并應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肺癌組織和癌旁正常組織中Cortactin和FAKPY397表達(dá)，分析兩者相關(guān)性。結(jié)果正常組織中Cortactin和FAKPY397表達(dá)陽(yáng)性率顯著低于肺癌組織(P<0.05)；Ⅲ期和Ⅳ期患者肺癌組織Cortactin和FAKPY397表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Cortactin和FAKPY397表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)；Speaman分析顯示：Cortactin表達(dá)與FAKPY397表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.532，P<0.05)。結(jié)論NSCLC組織中Cortactin和FAKPY397表達(dá)會(huì)顯著增高，兩者具有正相關(guān)關(guān)系，可能對(duì)NSCLC的發(fā)展具有促進(jìn)作用。

〔關(guān)鍵詞〕皮層肌動(dòng)蛋白；磷酸化黏著斑激酶；非小細(xì)胞肺癌

非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)早期臨床表現(xiàn)不明顯，確診時(shí)一般處于中晚期，發(fā)病與多種因素有關(guān)〔1〕。癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力高者預(yù)后往往較差，其惡性程度也較高。皮層肌動(dòng)蛋白(Cortactin)是一種廣泛存在于侵襲性偽足中的肌動(dòng)蛋白結(jié)核蛋白，與細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移存在較大關(guān)系。磷酸化黏著斑激酶(FAKPY397)與細(xì)胞增殖有關(guān)，有研究顯示〔2〕，F(xiàn)AKPY397與癌細(xì)胞的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和增殖具有較大關(guān)系。本研究旨在分析Cortactin與FAKPY397在NSCLC中的表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料選取2014年5月至2015年5月我院收治的行擇期手術(shù)的NSCLC患者120例，均經(jīng)病理確診，且均未經(jīng)過(guò)任何治療。其中男63例，女57例，年齡37~80〔平均(56.3±1.1)〕歲，其中鱗癌69例，腺癌51例。根據(jù)WHO制定的分期標(biāo)準(zhǔn)〔3〕：Ⅰ期者54例，Ⅱ期24例，Ⅲ期者25例，Ⅳ期者17例。根據(jù)是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移66例。研究經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均知情同意并簽訂知情同意書(shū)。

1.2方法取所有入選者NSCLC組織及癌旁正常組織，將其放置于甲醛溶液中固定，然后采用石蠟包埋，將其制備成厚度約4 μm的切片，然后進(jìn)行脫蠟、脫苯和水化待用。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)組織中Cortactin與FAKPY397表達(dá)情況，染色法根據(jù)鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶試劑說(shuō)明進(jìn)行操作，抗Cortactin和抗FAKPY397均經(jīng)高壓修復(fù)處理，抗原修復(fù)液緩沖液pH6.0，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為對(duì)照。

1.3結(jié)果判定細(xì)胞染色強(qiáng)度為4等級(jí)：0分表示無(wú)染色；1分表示淺黃色，2分表示棕黃色，3分表示棕褐色。細(xì)胞陽(yáng)性所占百分比分為5等級(jí)：0分表示<10%；1分表示10%~25%；2分表示26%~50%；3分表示51%~75%；4分表示>75%。總分=細(xì)胞染色強(qiáng)度等級(jí)×細(xì)胞陽(yáng)性占比例等級(jí)。其中0~2分表示陰性，>2分表示陽(yáng)性〔4〕。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和Spearman等級(jí)相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1正常與腫瘤組織比較正常組織中Cortactin和FAKPY397表達(dá)陽(yáng)性率分別為19.2%(23例)、24.2%(29例)，顯著低于肺癌組織的57.5%(69例)、52.5%(63例)(P<0.05)。

2.2不同分期比較Ⅲ期和Ⅳ期患者癌組織Cortactin和FAKPY397表達(dá)陽(yáng)性率78.6%(33例)、69.0%(29例)，顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期57.7%(45例)、44.9%(35例)(P<0.05)。

2.3不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Cortactin和FAKPY397表達(dá)陽(yáng)性率72.2%(39例)、64.8%(35例)，顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的43.9%(29例)、42.4%(39例)(P<0.05)。

2.4相關(guān)性分析Cortactin表達(dá)與FAKPY397表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.532，P=0.017)。

3討論

NSCLC是肺癌的主要類型，多數(shù)患者確診后處于中晚期，患者的預(yù)后較差，而癌組織的轉(zhuǎn)移和侵襲是導(dǎo)致患者預(yù)后差的最重要因素〔5〕。Cortactin的氨基端含有5或6個(gè)重復(fù)氨基酸序列，是Cortactin與纖維狀肌動(dòng)蛋白(F-actin)連接的橋梁。也有報(bào)道顯示，Cortactin在肝癌、肺癌、結(jié)腸癌等組織中高表達(dá)，其表達(dá)量顯著高于周?chē)＝M織，且轉(zhuǎn)移和侵襲病灶中Cortactin表達(dá)能力會(huì)顯著增強(qiáng)〔6〕。Cortactin與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的機(jī)制是：Cortactin可以和肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白(Arp2/3)復(fù)合體相互作用，進(jìn)而導(dǎo)致F-actin的骨架發(fā)生重構(gòu)，促使細(xì)胞之間的黏附能力降低，進(jìn)而腫瘤出現(xiàn)轉(zhuǎn)移〔7〕。有研究顯示，前列腺癌、結(jié)腸癌等腫瘤細(xì)胞中FAKPY397的表達(dá)能力會(huì)顯著增加，且多種腫瘤細(xì)胞中存在FAKPY397基因擴(kuò)增，在一定程度上說(shuō)明FAKPY397表達(dá)增強(qiáng)可能與基因擴(kuò)增存在較大關(guān)系〔8〕。有報(bào)道顯示，F(xiàn)AKPY397可以和多種含有SH2結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)分子進(jìn)行結(jié)合，如細(xì)胞信號(hào)抑制因子、Src家族、生長(zhǎng)相關(guān)蛋白(GAP)、生長(zhǎng)因子連接蛋白等，可以使下游相應(yīng)的事件被啟動(dòng)，進(jìn)而參與腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移〔9〕。本研究證實(shí)了Cortactin和FAKPY397表達(dá)與NSCLC進(jìn)展有關(guān)，Cortactin導(dǎo)致細(xì)胞黏附能力降低，骨架發(fā)生重組，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致腫瘤組織進(jìn)展。FAKPY397可能增強(qiáng)Cortactin表達(dá)。

有研究顯示，F(xiàn)AKPY397能夠通過(guò)PRR2與PRR3區(qū)域和Cortactin相連接，進(jìn)而增強(qiáng)Cortactin的表達(dá)能力〔10〕。也有研究顯示〔11〕，F(xiàn)AKPY397與相應(yīng)蛋白相結(jié)合以后，可以催化相應(yīng)的氨基酸位點(diǎn)，進(jìn)而使其發(fā)生磷酸化。Cortactin是FAKPY397的催化對(duì)象，可以催化Cortactin導(dǎo)致其構(gòu)象發(fā)生變化，致使其發(fā)生磷酸化，Cortactin發(fā)生磷酸化以后其表達(dá)能力會(huì)較前增強(qiáng)，使細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力顯著增強(qiáng)〔12〕。本研究充分說(shuō)明Cortactin表達(dá)與FAKPY397表達(dá)具有協(xié)同作用，共同促進(jìn)NSCLC組織的轉(zhuǎn)移和侵襲。分析其原因：Cortactin表達(dá)增強(qiáng)可以導(dǎo)致細(xì)胞骨架重組和黏附能力降低，細(xì)胞黏附能力降低會(huì)導(dǎo)致其轉(zhuǎn)移和侵襲能力增強(qiáng)。FAKPY397可以與Cortactin相連接，其表達(dá)能力增強(qiáng)可以促進(jìn)其與Cortactin的連接能力，而FAKPY397與Cortactin相連接會(huì)增強(qiáng)Cortactin的表達(dá)能力，如此兩組相協(xié)同增強(qiáng)細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。臨床可以通過(guò)抑制Cortactin與FAKPY397表達(dá)改善非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后。

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〔2015-12-20修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

〔中圖分類號(hào)〕R73

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)05-1132-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.051

第一作者：鄭末(1978-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事臨床病理學(xué)及腫瘤方面的研究。