從Agilent 1100到ACQUITY Arc

鹽酸甲氧氯普胺及相關(guān)物質(zhì)分析的HPLC方法轉(zhuǎn)換

本文將鹽酸甲氧氯普胺相關(guān)物質(zhì)分析的HPLC方法從Agilent 1100系統(tǒng)轉(zhuǎn)換到ACQUITY?ArcTM系統(tǒng)，此系統(tǒng)成功重現(xiàn)了Agilent 1100 LC的色譜分離，獲得了可靠、穩(wěn)定且準(zhǔn)確的結(jié)果。

用于測(cè)試制藥原料和最終產(chǎn)品的分析方法常常需要在機(jī)構(gòu)間轉(zhuǎn)換，或者轉(zhuǎn)換至使用不同供應(yīng)商儀器的合同實(shí)驗(yàn)室。因此對(duì)于分析實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)，成功實(shí)現(xiàn)方法轉(zhuǎn)換對(duì)于確保產(chǎn)品一致性和合規(guī)性來(lái)說(shuō)至關(guān)重要。有效的方法轉(zhuǎn)換能夠讓同一分析方法始終得出相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果，不受儀器、實(shí)驗(yàn)室或樣品來(lái)源的影響。這對(duì)于免去昂貴且耗時(shí)的方法重復(fù)驗(yàn)證步驟來(lái)說(shuō)也是非常重要。

本文介紹了從Agilent 1100系列LC系統(tǒng)到ACQUITY Arc系統(tǒng)的鹽酸甲氧氯普胺相關(guān)物質(zhì)分析的HPLC方法轉(zhuǎn)換。是否成功實(shí)現(xiàn)方法轉(zhuǎn)換的評(píng)判方法是通過(guò)檢驗(yàn)色譜分離結(jié)果是否相似以及驗(yàn)證系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果是否符合USP通用章節(jié)〈621〉色譜法1中定義的要求。

圖1.從Agilent 1100系列LC系統(tǒng)到ACQUITY Arc系統(tǒng)的方法轉(zhuǎn)換中，含1.0%相關(guān)物質(zhì)的0.5 mg/ml甲氧氯普胺API的色譜數(shù)據(jù)。

表1.梯度條件

表2.方法轉(zhuǎn)換中USP指定的鹽酸甲氧氯普胺相關(guān)物質(zhì)的列表

實(shí)驗(yàn)部分

儀器和試劑

LC 系統(tǒng)：配備四元泵和DAD檢測(cè)器的Agilent 1100系列LC系統(tǒng)配備2998 PDA和ACQUITY QDa檢測(cè)器、被動(dòng)預(yù)加熱器以及流路1的ACQUITY Arc系統(tǒng)。

色 譜 柱： XSelectTMCSH C18，4.6×150 mm，5 μm；柱溫：45℃；流速：2.9 ml/min；進(jìn)樣體積：10.0μl；流動(dòng)相：A：0.1%甲酸水溶液，B：0.1%甲酸的甲醇溶液；清洗專用沖洗液：水/甲醇（50：50），樣品清洗液：50：50，水/甲醇；密封清洗液：水/乙腈（90：10）；PDA檢測(cè)條件：λ范圍：210～400 nm，提取270 nm的譜圖；采樣速率：20 pt/ s；質(zhì)譜檢測(cè)：ACQUITY QDa檢測(cè)器(僅ACQUITY Arc系統(tǒng))；電離模式：ESI+、ESI-；采集范圍：100～440 m/z。

圖2.通過(guò)質(zhì)譜檢測(cè)，使用ACQUITY QDa檢測(cè)器獲得的質(zhì)譜數(shù)據(jù)確證峰。Empower 3軟件的質(zhì)譜分析窗口顯示了單個(gè)結(jié)果的UV和質(zhì)譜數(shù)據(jù)。

表3. 針對(duì)Agilent 1100 系列 LC系統(tǒng)和ACQUITY Arc系統(tǒng)間的方法轉(zhuǎn)換，使用系統(tǒng)適應(yīng)性溶液重復(fù)進(jìn)樣五次得到的系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果

結(jié)果與分析

本研究中使用的鹽酸甲氧氯普胺的相關(guān)化合物列于表2。分離儲(chǔ)液使用甲醇配制，濃度為1.0 mg/ml。用水將甲氧氯普胺儲(chǔ)液稀釋至0.5 mg/ml，相關(guān)物質(zhì)的加標(biāo)量為1.0%。系統(tǒng)適應(yīng)性測(cè)試制備溶液將各種儲(chǔ)液均移至一個(gè)樣品瓶中，用水稀釋，使每種分析物的濃度均為0.05 mg/ml。然后使用標(biāo)準(zhǔn)稀釋液(50：50,甲醇/水)將混合溶液稀釋至15 μg/ ml，以進(jìn)行系統(tǒng)適應(yīng)性測(cè)定。

首先在Agilent 1100系列LC系統(tǒng)上運(yùn)行HPLC方法，然后轉(zhuǎn)換至ACQUITY Arc系統(tǒng)。ACQUITY Arc系統(tǒng)采用了新型Multi-flow pathTM技術(shù)，該技術(shù)可高效轉(zhuǎn)換使用上一代LC儀器開發(fā)的傳統(tǒng)方法，用于HPLC方法轉(zhuǎn)換的儀器條件見上文。

Agilent 1100系 列 LC系 統(tǒng) 和ACQUITY Arc系統(tǒng)得到的樣品(含0.5 mg/ml的甲氧氯普胺API和1.0%相關(guān)物質(zhì))色譜數(shù)據(jù)如圖1所示。數(shù)據(jù)表明，ACQUITY Arc系統(tǒng)重現(xiàn)了Agilent 1100系列LC系統(tǒng)的色譜分離。采用質(zhì)譜檢測(cè)的方法，使用與ACQUITY Arc系統(tǒng)聯(lián)用的ACQUITY QDa檢測(cè)器得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)確證甲氧氯普胺及其相關(guān)物質(zhì)的鑒定結(jié)果。Empower?3軟件的質(zhì)譜分析窗口(圖2)展示了單個(gè)結(jié)果的UV和質(zhì)譜數(shù)據(jù)。輔以質(zhì)譜數(shù)據(jù)的UV檢測(cè)可快速確證樣品組分。

ACQUITY Arc系統(tǒng)上HPLC方法的性能表現(xiàn)是根據(jù)USP通用章節(jié)〈621〉色譜法1中的要求使用系統(tǒng)適應(yīng)性溶液重復(fù)進(jìn)樣五次所得的系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果進(jìn)行評(píng)判，同時(shí)按此要求與Agilent1100系列LC系統(tǒng)所得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)。

兩個(gè)系統(tǒng)所得的系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果均符合USP規(guī)定，結(jié)果匯總于表3。在ACQUITY Arc系統(tǒng)上運(yùn)行方法時(shí)的保留時(shí)間和峰面積重復(fù)性良好，RSD遠(yuǎn)低于小于2.0%的USP規(guī)定，并且與Agilent 1100系列LC系統(tǒng)相當(dāng)。兩個(gè)系統(tǒng)的結(jié)果中所有峰之間的USP分離度值相當(dāng)，表明方法轉(zhuǎn)換時(shí)無(wú)分離度損失。USP峰拖尾因子也相當(dāng)。

得益于獨(dú)有的Multi-fow path技術(shù)，ACQUITY Arc系統(tǒng)能夠從各種平臺(tái)輕松接受并重現(xiàn)方法且無(wú)需折中方法完整性。ACQUITY Arc系統(tǒng)具有強(qiáng)大的LC性能，能夠通過(guò)整合諸如ACQUITY QDa檢測(cè)器和Empower色譜數(shù)據(jù)系統(tǒng)(CDS)軟件等新技術(shù)來(lái)保障實(shí)驗(yàn)室投資。

小結(jié)

本文證明從Agilent 1100系列LC系統(tǒng)轉(zhuǎn)換到了ACQUITY Arc系統(tǒng)，能 夠成功重現(xiàn)Agilent1100系列LC系統(tǒng)的 色譜分離水平，并且其系統(tǒng)適應(yīng)性符合USP規(guī)定。滿足系統(tǒng)適應(yīng)性要求對(duì)于確 保實(shí)驗(yàn)室始終符合良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范來(lái)說(shuō) 至關(guān)重要。此外,與UV檢測(cè)配合使用 的ACQUITY QDa檢測(cè)器能夠通過(guò)質(zhì)譜 檢測(cè)快速確證峰。 LP

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