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紅曲黃酒傳統(tǒng)釀造過(guò)程中的細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu)及其動(dòng)態(tài)變化

2016-02-13 03:17賈瑞博潘雨陽(yáng)胡榮康周文斌蔣雅君郭偉靈朱風(fēng)風(fēng)吳林秀饒平凡呂旭聰
關(guān)鍵詞:紅曲文庫(kù)黃酒

賈瑞博,潘雨陽(yáng),胡榮康,周文斌,蔣雅君,郭偉靈,朱風(fēng)風(fēng),吳林秀,劉 斌,饒平凡,倪 莉,呂旭聰,*

(1.福建農(nóng)林大學(xué)國(guó)家菌草工程技術(shù)研究中心,福建 福州 350002; 2.福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院,福建 福州 350002; 3.福州大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院食品科技研究所,福建 福州 350108)

紅曲黃酒傳統(tǒng)釀造過(guò)程中的細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu)及其動(dòng)態(tài)變化

賈瑞博1,2,潘雨陽(yáng)1,2,胡榮康1,2,周文斌1,2,蔣雅君1,2,郭偉靈1,2,朱風(fēng)風(fēng)1,2,吳林秀1,2,劉 斌1,2,饒平凡3,倪 莉3,呂旭聰1,2,3*

(1.福建農(nóng)林大學(xué)國(guó)家菌草工程技術(shù)研究中心,福建 福州 350002; 2.福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院,福建 福州 350002; 3.福州大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院食品科技研究所,福建 福州 350108)

采用變性梯度凝膠電泳(DGGE)技術(shù)、克隆文庫(kù)技術(shù)和限制酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)等相結(jié)合的方法,探究了紅曲黃酒傳統(tǒng)釀造過(guò)程中的細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu)及其動(dòng)態(tài)變化。變性梯度凝膠電泳(DGGE)試驗(yàn)結(jié)果表明,在傳統(tǒng)釀造過(guò)程中的初期階段的優(yōu)勢(shì)菌株包括植物乳桿菌Lactobacillusplantarum、戊糖片球菌Pediococcuspentosaceus和短乳桿菌Lactobacillusbrevis,隨著釀造時(shí)間的增加,植物乳桿菌將逐漸占據(jù)絕對(duì)優(yōu)勢(shì);利用限制酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)技術(shù)對(duì)16S rDNA文庫(kù)中的克隆子進(jìn)行酶切分型,共得到19種RFLP圖譜類(lèi)型,測(cè)序鑒定結(jié)果與變性梯度凝膠電泳(DGGE)結(jié)果相似,但16S rDNA克隆文庫(kù)分析檢測(cè)到了戊糖片球菌Pediococcuspentosaceus,該菌未見(jiàn)于變性梯度凝膠電泳(DGGE)結(jié)果中。變性梯度凝膠電泳(DGGE)技術(shù)、克隆文庫(kù)技術(shù)和限制酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)等多種方法相結(jié)合,有助于更為全面、客觀地研究紅曲黃酒傳統(tǒng)釀造體系中的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)及多樣性。

紅曲黃酒;傳統(tǒng)釀造;細(xì)菌菌群

黃酒在世界釀造史上獨(dú)樹(shù)一幟,與啤酒、葡萄酒并稱(chēng)為世界三大古酒,是中華民族的文化瑰寶,有著5 000多年的悠久歷史,享有“國(guó)酒”之美譽(yù)[1-2]。黃酒是以谷物為原料,用曲釀造而成的,其營(yíng)養(yǎng)豐富、酒精度低且具有獨(dú)特的風(fēng)味和功效而深受廣大消費(fèi)者的喜愛(ài),加上近年來(lái)國(guó)家大力扶持黃酒產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,其市場(chǎng)需求量逐年穩(wěn)步上升。紅曲黃酒是以糯米為主要原料,添加紅曲和藥白曲作為糖化發(fā)酵劑,經(jīng)多種微生物釀造而成的一種低度黃酒,以色紅、味醇、香濃而著稱(chēng),不僅具有豐富營(yíng)養(yǎng)成分,還因添加了紅曲進(jìn)行釀造而具備多種與眾不同的生理功效,是中國(guó)黃酒中十分有特色的一類(lèi)黃酒[3-4]。

紅曲黃酒傳統(tǒng)釀造用曲中含有豐富的霉菌、酵母以及細(xì)菌[5], 在紅曲黃酒“雙邊發(fā)酵”過(guò)程中,微生物參與各種生物化學(xué)反應(yīng),對(duì)紅曲黃酒的產(chǎn)量和品質(zhì)起到至關(guān)重要的作用[6-7]。紅曲黃酒傳統(tǒng)釀造是“群微共酵”的過(guò)程,其產(chǎn)量和品質(zhì)與整個(gè)釀造過(guò)程中獨(dú)特的微生物群落結(jié)構(gòu)變化有著緊密的聯(lián)系。然而,目前有關(guān)紅曲黃酒中微生物菌群結(jié)構(gòu)及其功能研究較少,且長(zhǎng)期以來(lái)研究手段單一,未能進(jìn)一步系統(tǒng)地研究微生物菌群結(jié)構(gòu)與其功能的關(guān)系,尤其是釀造過(guò)程中菌群結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)。不能充分分析釀造系統(tǒng)微生物區(qū)系的結(jié)構(gòu)和功能,更不用說(shuō)充分利用微生物菌種資源。

紅曲黃酒傳統(tǒng)釀造體系是一個(gè)復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)[8],許多功能微生物可能處于“存活但不能培養(yǎng)”(VBNC)的狀態(tài),無(wú)法通過(guò)傳統(tǒng)純培養(yǎng)技術(shù)從菌群中分離獲得,使得紅曲黃酒獨(dú)特風(fēng)味組分的形成途徑變成“暗箱”。以分子生物學(xué)為基礎(chǔ)的免培養(yǎng)微生物分子生態(tài)學(xué)克服了傳統(tǒng)微生物純培養(yǎng)方法的不足,直接從基因水平上研究復(fù)雜體系中微生物菌群結(jié)構(gòu)與功能。為此,本研究采用變性梯度凝膠電泳(DGGE)技術(shù)、克隆文庫(kù)技術(shù)和限制酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)等相結(jié)合的免培養(yǎng)微生物分子生態(tài)學(xué)方法,跟蹤紅曲黃酒傳統(tǒng)釀造過(guò)程中細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)變化,研究結(jié)果不僅可以更為深刻地認(rèn)識(shí)紅曲黃酒釀造機(jī)理,也有利于快速篩選和鑒定出適用于紅曲黃酒釀造的細(xì)菌菌株。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

以糯米為原料,以烏衣紅曲和藥白曲為發(fā)酵曲,在釀造工藝實(shí)驗(yàn)室按照福州紅曲黃酒傳統(tǒng)釀造工藝進(jìn)行釀造[6,9],在3個(gè)酒壇中同時(shí)進(jìn)行釀造作為平行試驗(yàn),在傳統(tǒng)釀造的第1、2、3、5、7、10、20、46 d分別從3個(gè)酒壇中取酒醪樣品20 g進(jìn)行混合均勻,提取細(xì)菌總DNA進(jìn)行PCR-DGGE分析,取第1、20、46 d的樣品進(jìn)行細(xì)菌16S rDNA克隆文庫(kù)分析。

酵母提取物為OXOID產(chǎn)品; CTAB、N,N′-甲叉丙烯酰胺、TEMED、過(guò)硫酸銨、Tris、瓊脂糖、氨芐青霉素購(gòu)自上海生工有限公司;蛋白酶 K、dNTP、IPTG、X-gal、Loading Buffer、膠回收試劑盒為T(mén)aKaRa產(chǎn)品;DNA marker為MBI產(chǎn)品;限制性?xún)?nèi)切酶(Rsa、Msp)為Fermentas公司;用于轉(zhuǎn)化的菌株選用E.coliDH5α為福建農(nóng)林大學(xué)國(guó)家菌草工程技術(shù)研究中心保存;pMD19-T vector購(gòu)自TaKaRa公司;引物均由上海生工合成;其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

1.2 細(xì)菌DNA提取

采用溶菌酶-蛋白酶K-CTAB法[10]進(jìn)行樣品中細(xì)菌總DNA的提取,保存于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3 細(xì)菌16S rDNA基因的擴(kuò)增

細(xì)菌基因組16S rDNA的擴(kuò)增[11]:以提取的細(xì)菌基因組DNA為模板,采用細(xì)菌16S rDNA通用引物[7]1492R(5′-GGC TAC CTT GTT ACG ACT T-3′)和細(xì)菌特異引物27F(5′-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3′)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),EB染色,凝膠成像系統(tǒng)觀察和拍照。

1.4 細(xì)菌16S rDNA-V3區(qū)基因的擴(kuò)增

16S rDNA-V3區(qū)基因的擴(kuò)增:將純化后的16S rDNA為模板,采用細(xì)菌通用引物[8]338f+(5′-CGC CCG CCG CGC GCG GCG GGC GGG GCG GGG GCA CGG GGG GAC TCC TAC-3′)和518r(5′-ATT ACC GCG GCT GCT GG-3′)進(jìn)行巢式PCR擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),EB染色,凝膠成像系統(tǒng)觀察和拍照。

1.5 變性梯度凝膠電泳(DGGE)分析

對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行DGGE分析,DGGE變性膠濃度為8%(w/v),變性梯度為40%~60%電泳條件:1×TAE電泳緩沖液,60℃恒溫,65 V恒壓電泳16 h;EB染色,并用圖形分析軟件(Quantity One)對(duì)凝膠圖像進(jìn)行分析。用Coverage C、Evenness指數(shù)(E)、Shannon-Wierner指數(shù)(H′)、Simpson指數(shù)(D),Margalef指數(shù)(d)等指標(biāo)(表1)來(lái)分析細(xì)菌多樣性。

表1 多樣性指標(biāo)分析說(shuō)明Table 1 Description on diversity index analysis

1.6 DGGE條帶的序列測(cè)定

對(duì)細(xì)菌DGGE圖譜較為明顯的條帶進(jìn)行割膠后放入EP管中,去離子水重復(fù)沖洗3次后加入50 μL去離子水碾碎過(guò)夜保存,取上清液作為PCR模板擴(kuò)增,將純化后的PCR產(chǎn)物與pMD19-T 載體連接,轉(zhuǎn)化至E.coliDH5α細(xì)胞中,通過(guò)藍(lán)白篩選,隨機(jī)挑選白斑進(jìn)行菌落PCR驗(yàn)證。將經(jīng)驗(yàn)證的陽(yáng)性克隆子交由上海生工生物技術(shù)公司進(jìn)行測(cè)序;測(cè)序結(jié)果用DNAMAN軟件將16S rDNA-V3 高變區(qū)克隆子序列去除載體后,通過(guò)NCBI查找比對(duì)(BLAST分析),選取克隆子序列在GenBank中找尋最相似收錄序列進(jìn)行比對(duì)。

1.7 細(xì)菌16S rDNA基因的限制性?xún)?nèi)切酶酶切(RFLP)

瓊脂糖電泳驗(yàn)證成功的PCR樣品,分別用限制性?xún)?nèi)切酶Rsa和Msp進(jìn)行酶切,在37℃的恒溫水浴鍋中放置過(guò)夜進(jìn)行反應(yīng),酶切產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳;分析克隆子的RFLP譜型,計(jì)算每個(gè)譜型的出現(xiàn)頻率。將具有不同圖譜類(lèi)型的克隆挑出,液體擴(kuò)培后進(jìn)行測(cè)序,序列在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)上進(jìn)行比對(duì)鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 基于DGGE指紋圖譜技術(shù)的細(xì)菌菌群多樣性分析

對(duì)細(xì)菌16S rDNA-V3區(qū)PCR產(chǎn)物進(jìn)行DGGE分析,結(jié)果如圖1所示。

從克隆鑒定結(jié)果(表2)中可以發(fā)現(xiàn),所有序列均可以在GenBank中找到與其序列相似性很高(>98%)的菌株。結(jié)合細(xì)菌16S rDNA-V3區(qū)DGGE圖譜中發(fā)現(xiàn),條帶1、2和3相較其他條帶較亮,可認(rèn)為是釀造過(guò)程中的關(guān)鍵菌株,占有較大比例。經(jīng)鑒定其分別為植物乳桿菌Lactobacillusplantarum、短乳桿菌Lactobacillusbrevis和戊糖片球菌Pediococcuspentosaceus。在釀造初期(第1~10 d),優(yōu)勢(shì)菌株的結(jié)構(gòu)沒(méi)有發(fā)生很大變化,到了釀造中期(第20 d),戊糖片球菌基本檢測(cè)不到,而植物乳桿菌在釀造體系中的比例升高,到了釀造后期(第46 d),基本上只檢測(cè)到植物乳桿菌Lactobacillusplantarum。

2.2 基于16S rDNA克隆文庫(kù)技術(shù)的細(xì)菌菌群多樣性分析

2.2.1 16S rDNA克隆文庫(kù)的限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)分析 PCR-RFLP分析采用限制性?xún)?nèi)切酶MspI(C′CGG)和RsaI(GT’AC)。一共分析了262個(gè)克隆子(B1文庫(kù),77個(gè);B20文庫(kù),115個(gè);B46文庫(kù),70個(gè))。B1、B20和B46文庫(kù)分別獲得了15、12和4種RFLP帶型,這表明細(xì)菌的種類(lèi)隨著釀造時(shí)間的推移而在不斷減少。B1文庫(kù)中最豐富的RFLP帶型有16個(gè)克隆子(占總克隆子數(shù)的20.8%) (圖2-A),B20文庫(kù)中最豐富的帶型有42個(gè)克隆子(占總克隆子數(shù)的36.5%) (圖2-B),而B(niǎo)46文庫(kù)中最豐富的帶型有47個(gè)克隆子(占總克隆子數(shù)的67.1%) (圖2-C)。可以發(fā)現(xiàn),隨著釀造時(shí)間的增加,細(xì)菌種類(lèi)不斷減少;在每一個(gè)釀造時(shí)期,釀造體系中都有優(yōu)勢(shì)細(xì)菌,說(shuō)明在釀造的不同時(shí)期,細(xì)菌的分布是不均勻的。

表2 DGGE譜圖中相關(guān)電泳條帶的測(cè)序鑒定結(jié)果Table 2 DNA sequencing results associated electrophoretic bands of DGGE spectrum

2.2.2 細(xì)菌16S rDNA克隆文庫(kù)種群多樣性分析 根據(jù)其計(jì)算公式,若Coverage C得到的值很大或達(dá)到1,則說(shuō)明庫(kù)容已經(jīng)足夠。由表3中可知,3個(gè)文庫(kù)的Coverage C都很接近1,說(shuō)明3個(gè)文庫(kù)的庫(kù)容均滿足要求。從多樣性和均勻度指數(shù)來(lái)看,細(xì)菌的多樣性水平和均勻度隨著釀造的進(jìn)行呈現(xiàn)不斷下降的趨勢(shì),釀造初期的細(xì)菌種類(lèi)明顯高于釀造后期。這可能是由于在釀造后期,釀造體系中的酒精度不斷攀升和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不斷減少而造成細(xì)菌的多樣性不斷下降。

表3 16S rDNA克隆文庫(kù)種群多樣性分析Table 3 Species diversity analysis on 16S rDNA clone libraries

2.2.3 序列比對(duì)分析 將3個(gè)文庫(kù)中19種RFLP帶型,均挑選1個(gè)代表菌株進(jìn)行了測(cè)序,將鑒定結(jié)果結(jié)合柱狀圖整理出菌株名及其數(shù)量關(guān)系,匯總為16S rDNA克隆文庫(kù)菌株變化趨勢(shì)表(表4)。

表4 16S rDNA克隆文庫(kù)中不同細(xì)菌的變化趨勢(shì)Table 4 Composition and dynamic changes of bacteria community as revealed by analysis of 16 s rDNA clone library

從表4中可以看出,植物乳桿菌Lactobacillusplantarum在體系中的相對(duì)比例從釀造初期的28.6%上升到釀造后期的98.6%,戊糖片球菌Pediococcuspentosaceus在體系中的相對(duì)比例從釀造初期的71.4%下降到1.4%,這與細(xì)菌DGGE圖譜中的趨勢(shì)是吻合的。但16S rDNA克隆文庫(kù)在釀造中期檢測(cè)到短乳桿菌Lactobacillusbrevis,其相對(duì)比例占9.6%,而細(xì)菌DGGE圖譜中發(fā)現(xiàn)在釀造第1 d就檢測(cè)到了短乳桿菌Lactobacillusbrevis,并占有一定比例;16S rDNA克隆文庫(kù)在釀造中期還檢測(cè)到了戊糖乳桿菌Lactobacilluspentosus,這是細(xì)菌DGGE圖譜中所沒(méi)有檢測(cè)到的。造成兩種方法結(jié)果不同的原因可能是由于:(1)用于細(xì)菌DGGE所擴(kuò)增的16S rDNA-V3區(qū)的分辨率不夠;(2)使用RFLP方法分析細(xì)菌克隆文庫(kù),所選用的限制性?xún)?nèi)切酶在分析相似性較高的序列時(shí),可能無(wú)法根據(jù)酶切的帶型清晰地分辨出序列之間的差異,使得該方法低估了研究體系中的微生物多樣性。從這樣的結(jié)果可以看出,單一的分子生態(tài)學(xué)方法有一定的局限性,DGGE技術(shù)和克隆文庫(kù)技術(shù)的結(jié)合使用可以得到紅曲黃酒釀造過(guò)程中微生物結(jié)構(gòu)更完整的結(jié)果。

3 討論與結(jié)論

3.1變性梯度凝膠電泳(DGGE)結(jié)果顯示,在傳統(tǒng)釀造過(guò)程中的初期階段的優(yōu)勢(shì)菌株包括植物乳桿菌、戊糖片球菌和短乳桿菌;但隨著釀造的進(jìn)行,植物乳桿菌將逐漸占據(jù)絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。利用限制酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)技術(shù)對(duì)16S rDNA文庫(kù)中的克隆子進(jìn)行酶切分型,共得到19種RFLP圖譜類(lèi)型,通過(guò)測(cè)序鑒定結(jié)果顯示16S rDNA克隆文庫(kù)中包括植物乳桿菌、戊糖片球菌、短乳桿菌和戊糖乳桿菌。其中,戊糖片球菌的數(shù)量從釀造第1 d的71.4%下降至第46 d的1.4%,短乳桿菌在第1 d沒(méi)有檢測(cè)到,但在第20 d其數(shù)量達(dá)到13%,在釀造后期同樣沒(méi)有檢測(cè)到,植物乳桿菌隨著釀造過(guò)程的進(jìn)行,其數(shù)量從28.6%上升至98.6%,在釀造過(guò)程中,乳酸菌除產(chǎn)生乳酸外,還可能以乳酸為底物產(chǎn)生乙酸、琥珀酸、丙酸和丁酸等其他有機(jī)酸,這些有機(jī)酸在酯化酶的催化作用通過(guò)酯化反應(yīng)生成乳酸乙酯,乙酸乙酯等香氣組分,豐富了紅曲黃酒的風(fēng)味成分。陳寶良等[13]對(duì)傳統(tǒng)香雪酒(紹興酒中的一種高檔品種)發(fā)酵過(guò)程中的微生物變化規(guī)律及作用進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)香雪酒的發(fā)酵過(guò)程是曲(酒藥和麥曲)的糖化和以多品種、高密度的細(xì)菌與酵母協(xié)同糖化發(fā)酵并行的過(guò)程,到中后期是真正意義上的細(xì)菌為主的發(fā)酵,而酵母菌作用小。據(jù)此,在紅曲黃酒傳統(tǒng)釀造的過(guò)程中,可以推測(cè)細(xì)菌對(duì)酒的風(fēng)味有著很大的貢獻(xiàn),在解析紅曲黃酒傳統(tǒng)釀造過(guò)程細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上,后續(xù)研究將進(jìn)一步探明這些乳酸菌的產(chǎn)香特性,以及乳酸菌與酵母菌之間的相互作用及其對(duì)紅曲黃酒特征風(fēng)味物質(zhì)形成的影響,最終解決導(dǎo)致紅曲黃酒傳統(tǒng)釀造品質(zhì)不穩(wěn)定的瓶頸問(wèn)題,改進(jìn)工藝、提升品質(zhì)。

3.216S rDNA克隆文庫(kù)分析得到的結(jié)果與變性梯度凝膠電泳(DGGE)得到的結(jié)果相似,但16S rDNA克隆文庫(kù)分析檢測(cè)到了戊糖片球菌,該菌未見(jiàn)于變性梯度凝膠電泳(DGGE)結(jié)果中。研究結(jié)果說(shuō)明采用免培養(yǎng)微生物分子生態(tài)學(xué)方法研究細(xì)菌多樣性,雖然較傳統(tǒng)分離培養(yǎng)方法更為快速和準(zhǔn)確,但各個(gè)技術(shù)也存在的一定局限性和不足。因此,本研究采用DGGE結(jié)合文庫(kù)分析和RFLP等分子生物學(xué)方法對(duì)樣品進(jìn)行分析,使其相互補(bǔ)充,有利于獲得關(guān)于紅曲黃酒釀造過(guò)程中微生物生態(tài)更為客觀和準(zhǔn)確的信息。

[1]陳玉香, 葉汶坤, 何冬萍, 等. 酵母菌對(duì)紅曲黃酒風(fēng)味物質(zhì)形成的影響[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào), 2015, 15(7): 218-223.

[2]陳平. 紅曲代謝產(chǎn)物的研究現(xiàn)狀和前景[J]. 廣西輕工業(yè), 2009,(9): 4-5.

[3]Lü X C, WENG X, ZHANG W, et al. Microbial diversity of traditional fermentation starters for Hong Qu glutinous rice wine as determined by PCR-mediated DGGE[J]. Food Control, 2012, 28(2):426-434.

[4]呂旭聰, 翁星, 黃若蘭,等. 紅曲黃酒釀造用曲及傳統(tǒng)釀造過(guò)程中酵母菌的多樣性研究[J]. 中國(guó)食品學(xué)報(bào), 2012, 12(1):182-190.

[5]李艷, 董振玲, 李佳, 等. PCR-DGGE技術(shù)檢測(cè)羊羔美酒大曲中細(xì)菌多樣性[J]. 食品科學(xué), 2015,(12): 142-147.

[6]謝廣發(fā). 黃酒釀造技術(shù)[M].北京:中國(guó)輕工業(yè)出版社,2010.

[7]汪建國(guó), 沈玉根, 陸偉杰, 等. 我國(guó)黃酒研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì)[J]. 中國(guó)釀造, 2012, 31(11): 15-20.

[8]毛青鐘. 黃酒生產(chǎn)特點(diǎn)的探討[J]. 釀酒科技, 2005,(1):65-67.

[9]傅金泉. 黃酒生產(chǎn)技術(shù)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

[10]TAE-WOONKIM, JUN-HWALEE, SUNG-EONKIM. Analysis of microbial communities in doenjang, a Korean fermented soybean paste, nested PCR-denaturing gradient gel electrophoresis[J]. International Journal of Food Microbiology,2009, 131: 265-271.

[11]王海舟,張小波. 分子生物學(xué)在微生物生態(tài)學(xué)中的應(yīng)用[J]. 萍鄉(xiāng)高等專(zhuān)科學(xué)校學(xué)報(bào), 2009, 26(3): 72-74.

[12]劉紹雄, 王明月, 王娟, 等. 基于PCR-DGGE技術(shù)的劍湖濕地湖濱帶土壤微生物群落結(jié)構(gòu)多樣性分析[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào), 2013,(7): 1405-1412.

[13]陳寶良, 毛青鐘. 傳統(tǒng)香雪酒發(fā)酵過(guò)程微生物變化和作用研究[J]. 釀酒, 2010, 37(6): 59-62.

(責(zé)任編輯:黃愛(ài)萍)

Composition and Dynamic Changes of Bacterial Community During Traditional Hongqu Glutinous Rice Winemaking

JIA Rui-bo1,2,PAN Yu-yang1,2,HU Rong-kang1,2,ZHOU Wen-bin1,2,JIANG Ya-jun1,2,GUO Wei-ling1,2, ZHU Feng-feng1,2,WU Lin-xiu1,2, LIU Bin1,2,RAO Ping-fan3, NI Li3, Lü Xu-cong1,2,3*

(1.NationalEngineeringResearchCenterofJuncaoTechnology,FujianAgricultureandForestryUniversity,Fuzhou,Fujian350002,China; 2.CollegeofFoodScience,FujianAgricultureandForestryUniversity,Fuzhou,Fujian350002,China; 3.InstituteofFoodScienceandTechnology,CollegeofBiologicalScienceandTechnology,FuzchouUniversity,Fuzhou,Fujian350108)

Composition and dynamic changes of the bacterial community during the traditional Hong Qu glutinous rice winemaking were studied using PCR-denaturing gradient gel electropherisis (DGGE), clone library analysis and restriction fragment length polymorphisms (RFLP). Sequences of 9 bacteria strains were obtained by DGGE spectrogram. Through cloning and sequencing, it was found thatLactobacillusplantarum,PediococcuspentosaceuandLactobacillusbreviswere the dominant bacteria during the initial fermentation stage. The RFLP fingerprints showed that 16S rDNA clone libraries had 19 band patterns. Sequencing of different OTUs revealed thatL.plantarum,P.pentosaceus,L.brevisandLactobacilluspentosuspresented in the wine during the entire process, butL.plantarumprevailed at the end. By using various molecular biology methods simultaneously to examine the microbial community in winemaking, a comprehensive and objective profile was obtained.

hongqu glutinous rice wine; traditional brewing; bacterial community

2016-05-09初稿;2016-09-07修改稿

賈瑞博(1991-),男,碩士生,研究方向:食品生物技術(shù)(E-mail:13044599915@163.com) *通訊作者:呂旭聰(1984-),男,助理研究員,博士;研究方向:食品生物技術(shù)(E-mail:xucong1154@qq.com)

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31601466);中國(guó)博士后科學(xué)基金項(xiàng)目(2016T90591、2015M570549);福建農(nóng)林大學(xué)“校杰出青年科研人才”項(xiàng)目(XJQ201607);福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2016J01095)

TS 262.4

:A

:1008-0384(2016)11-1238-06

賈瑞博,潘雨陽(yáng),胡榮康,等.紅曲黃酒傳統(tǒng)釀造過(guò)程中的細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu)及其動(dòng)態(tài)變化[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2016,31(11):1238-1243.

JIA R-B,PAN Y-Y,HU R-K,et al.Composition and Dynamic Changes of Bacterial Community During Traditional Hongqu Glutinous Rice Winemaking[J].FujianJournalofAgriculturalSciences,2016,31(11):1238-1243.

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