徐 浩，王騰騰，齊曉鳳，王 瓊，張 利，邢聯(lián)平，施 杞，王擁軍，4，梁倩倩＊＊

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院 上海 200032；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)脊柱病研究所 上海 200032；3.美國羅切斯特大學(xué)醫(yī)學(xué)中心 美國 14623；4.上海中醫(yī)藥大學(xué)康復(fù)醫(yī)學(xué)院 上海 200120）

近紅外光譜吲哚菁綠成像系統(tǒng)在關(guān)節(jié)炎小鼠淋巴回流功能檢測中的應(yīng)用＊

徐 浩1，2，王騰騰1，2，齊曉鳳1，2，王 瓊1，2，張 利1，2，邢聯(lián)平3，施 杞1，2，王擁軍1，2，4，梁倩倩1，2＊＊

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院 上海 200032；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)脊柱病研究所 上海 200032；3.美國羅切斯特大學(xué)醫(yī)學(xué)中心 美國 14623；4.上海中醫(yī)藥大學(xué)康復(fù)醫(yī)學(xué)院 上海 200120）

目的：本文建立了近紅外光譜吲哚菁綠（Indocyanine Green，ICG）成像技術(shù)平臺，通過類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎TNF-Tg小鼠模型和手術(shù)誘導(dǎo)骨性關(guān)節(jié)炎小鼠模型，驗證了技術(shù)平臺檢測淋巴回流功能的成像質(zhì)量與穩(wěn)定性，為篩選中藥復(fù)方與中藥單體調(diào)控淋巴回流功能防治關(guān)節(jié)炎的動物體內(nèi)研究提供技術(shù)平臺。方法：采用TNF-tg小鼠和手術(shù)誘導(dǎo)骨性關(guān)節(jié)炎小鼠模型，采用近紅外光譜ICG成像系統(tǒng)檢測類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎小鼠模型的下肢淋巴回流功能，手術(shù)誘導(dǎo)骨性關(guān)節(jié)炎小鼠模型的膝關(guān)節(jié)淋巴回流功能。結(jié)果：淋巴回流功能檢測顯示，與Control組相比，TNF-Tg組的下肢淋巴回流清除率明顯下降；Control組小鼠下肢淋巴管收縮脈沖值為1.12±0.27個/min，與之相比，TNF-Tg組檢測不到明顯的收縮脈沖值；與Sham組相比，OA組的膝關(guān)節(jié)淋巴回流清除率明顯下降。結(jié)論：本文建立的近紅外光譜-ICG成像系統(tǒng)可以為評價動物體內(nèi)淋巴回流功能實驗研究，篩選治療關(guān)節(jié)炎有效的中藥復(fù)方，小分子化合物提供良好的工作平臺。

近紅外光譜成像 吲哚菁綠 淋巴回流系統(tǒng) 關(guān)節(jié)炎

ICG是一種帶負電，具有水溶性的三碳菁染料，分子量是776 Da[1,2]，在1957年美國梅奧診所將ICG這種青色染料引入到臨床醫(yī)學(xué)的診斷和治療過程中，它用來檢測心臟輸出功能[3]、眼部血管造影[4]、外科手術(shù)[5]、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷與療效評價[6]等方面。ICG在體內(nèi)不被腸粘膜吸收，只是經(jīng)由肝臟與膽管排出，生產(chǎn)廠商提供的數(shù)據(jù)說明ICG的過敏率非常低（1：10 000），被認為是安全低毒藥物[7,8]，體內(nèi)使用濃度是0.1-0.5 mg·kg-1[9]。ICG的激發(fā)光波長大概是780 nm，吸收光譜波長峰值在800-830 nm（水中810 nm，體液中830 nm）。這段波長可以被近紅外光譜儀檢測[10]。本文主要關(guān)注ICG在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷與療效評價中的應(yīng)用。

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種臨床常見以關(guān)節(jié)病變?yōu)橹鞯穆匀碜陨砻庖咝约膊。饕R床表現(xiàn)為：小關(guān)節(jié)滑膜所致的關(guān)節(jié)腫痛，繼而軟骨破壞、關(guān)節(jié)間隙變窄，晚期因嚴重骨質(zhì)破壞、吸收導(dǎo)致關(guān)節(jié)僵直、畸形、功能障礙，嚴重影響患者的工作能力和生活質(zhì)量[2]。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病理狀態(tài)下，過多的液體會從增生的血管中積流到組織間隙中[3]，而這些積液中又包含了大量的促進關(guān)節(jié)炎組織損傷的細胞因子和炎癥因子[4]，目前仍然缺乏有效的治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物[5]。

淋巴回流系統(tǒng)包括毛細淋巴管、集合淋巴管、淋巴結(jié)，具有回輸組織中蛋白與液體，運輸全身免疫細胞的作用，淋巴回流系統(tǒng)維持機體的正常生理功能。在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎回流的淋巴液中含有大量的與炎癥相關(guān)的細胞因子和化學(xué)因子[11]。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜組織中的淋巴管生成數(shù)量對比正常人滑膜組織增加明顯[12]，并且在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動物模型TNFTg轉(zhuǎn)基因小鼠中也發(fā)現(xiàn)了同樣的表現(xiàn)[13]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，關(guān)節(jié)局部的淋巴管形成和淋巴回流與關(guān)節(jié)病變呈正比關(guān)系[6]，關(guān)節(jié)內(nèi)注射血管內(nèi)皮生長因子C（Vascular Endothelial Growth Factor-C，VEGF-C）腺病毒相關(guān)載體（AAV-VEGF-C virus）可以促進類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎小鼠關(guān)節(jié)周圍淋巴管生成，促進淋巴回流功能，延緩關(guān)節(jié)退變，減少關(guān)節(jié)周圍炎癥反應(yīng)程度[7]，從而證明促進淋巴回流功能可以作為治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的手段與靶點。在后續(xù)的研究中，我們逐漸發(fā)現(xiàn)了淋巴回流系統(tǒng)參與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病理發(fā)展進程的機制：淋巴回流系統(tǒng)將炎癥關(guān)節(jié)周圍的細胞因子、化學(xué)因子等炎癥相關(guān)因子回輸集合淋巴管，以減輕由于炎癥因子蓄積關(guān)節(jié)腔中導(dǎo)致的關(guān)節(jié)病變加重；在這個過程中，腫瘤壞死因子與白細胞介素1引起淋巴管內(nèi)皮細胞炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)性一氧化氮合酶表達增加，并且產(chǎn)生大量的一氧化氮（Nitric Oxide，NO），NO降低了淋巴管平滑肌細胞功能相關(guān)蛋白的基因與蛋白表達，從而降低了淋巴管平滑肌的收縮功能，對于淋巴回流功能產(chǎn)生的負效應(yīng)[14]。

相繼發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方（獨活寄生湯等[14]）與中藥單體（阿魏酸[15]與三七總皂苷[16]等）可以通過促進淋巴回流功能延緩類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的病理進展過程[8,9]。

表1 ICG-近紅外光譜成像系統(tǒng)配件

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

ICG-近紅外光譜成像系統(tǒng)（如圖1A、1B）：儀器組裝配件清單如表1。微量注射器：美國Hamilton公司，貨號：80601（如圖1C）。注射用ICG（如圖1D）：美國Akorn公司，貨號：17478-701-02。組織提取與DNA抽提（美國Sigma公司，批號：051M8617V、SLBB1424V、041M6349），瓊脂糖（批 號：G-10111860），DNA Marker（美 國Promega公司），引物購自上海百力格生物技術(shù)有限公司。

1.2 實驗動物

C57BL/6Slac小鼠，SPF級，雄性，10周齡，上海斯萊克實驗動物公司購買。TNF轉(zhuǎn)基因小鼠（line 3647）攜帶一個人的TNF拷貝基因，自發(fā)慢性、進展性關(guān)節(jié)炎，及WT同窩對照小鼠，獲贈于美國羅切斯特大學(xué)醫(yī)學(xué)中心，飼養(yǎng)于上海模式動物中心。

1.3 方法

1.3.1 檢測小鼠足底ICG 24 h清除率

首先，利用Matrx麻醉機（圖1B）呼吸麻醉小鼠，使用VEET脫毛劑和溫水，清除小鼠下肢小腿部分的體毛，注意保護小鼠皮膚，將小鼠置于熱臺上，熱臺溫度保持在28℃，給予小鼠面罩氣體麻醉。用微量注射器，30G針頭，吸取10 μL 0.1 g·mL-1濃度的ICG，注射于小鼠足底皮下。注射后6 h拍攝足底照片，注射后24 h后再次拍攝足底照片，取足底ROI（Region of Interest，圖2A、2B），利用軟件Image J對ROI區(qū)域分析，得到數(shù)據(jù)代入公式（圖2C），得到的結(jié)果是小鼠足底ICG清除率，其代表淋巴回流功能。

1.3.2 檢測小鼠腘窩淋巴結(jié)到達ICG最大充盈度的時間（Tmax）與亮度值（Smax）

麻醉，脫毛，注射ICG操作如上，在注射后記錄影像1 h，選擇腘窩淋巴結(jié)作為ROI（圖2D、2E），利用軟件Image J對ROI區(qū)域分析，得到信號亮度最大值作為Smax，而此時的時間點作為信號強度達到最大值時的時間Tmax。Smax與Tmax均可作為淋巴系統(tǒng)回流功能的指標。

1.3.3 檢測小鼠足踝關(guān)節(jié)至腘窩淋巴結(jié)之間淋巴管傳輸ICG的脈沖頻率

麻醉，脫毛，注射ICG操作如“1.3.2”。在注射后記錄影像1 h，選擇小鼠足踝關(guān)節(jié)至腘窩淋巴結(jié)之間清晰的淋巴管作為ROI（圖2E，蘭色矩形），利用軟件Image J對ROI區(qū)域分析，得到ROI區(qū)域內(nèi)信號亮度500 s內(nèi)的數(shù)值波動變化，從而得到淋巴管收縮傳輸ICG的頻率，淋巴管收縮脈沖頻率是呈現(xiàn)淋巴系統(tǒng)回流功能非常重要的指標。

1.3.4 檢測小鼠膝關(guān)節(jié)內(nèi)ICG的清除率

開啟麻醉機Matrx麻醉小鼠，使用VEET脫毛劑和溫水，清除小鼠膝關(guān)節(jié)周圍的體毛，注意保護小鼠皮膚，將小鼠置于熱臺上，熱臺溫度保持在28℃，給予小鼠面罩氣體麻醉。用微量注射器，30G針頭，吸取6 μL 0.1 g·mL-1濃度的ICG，注射于小鼠膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)。注射后3 h拍攝膝關(guān)節(jié)照片（圖2F），注射后6 h后再次拍攝膝關(guān)節(jié)照片（圖2G），取膝關(guān)節(jié)ROI（Region of Interest），利用軟件Image J對ROI區(qū)域分析，得到數(shù)據(jù)代入公式（圖2H），得到的結(jié)果是小鼠膝關(guān)節(jié)的ICG清除率，其可以代表膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)的淋巴回流功能。1.3.5 TNF轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定方法

圖1 ICG-近紅外光譜檢測儀及相關(guān)實驗用品

圖2 近紅外光譜檢測方法與計算分析

對3周齡小鼠剪尾，進行基因組DNA抽提。每個樣本加入提取液25 μL，制備液6.25 μL，25℃ 5 min→ 95℃ 10 min→ 25℃ 5 min，加入25 μL中和液混勻，室溫放置5 min。引物序列 F：5’-TACCCCCTCCTTCAGACACC-3’；R：5’-GCCCTTCATAATATCCCCCA-3’。PCR反應(yīng)體系20 μL：Bioteke PCR mix 7 μL，水10 μL，DNA抽提產(chǎn)物1 μL，上下游引物各1 μL。94℃ 3 min，94℃30 s→60℃ 35 s→72℃ 1.5 min，30個循環(huán)，72℃7 min，4℃保存。配制2%的瓊脂糖膠，上樣10 μL，電壓110 V，40 min。陽性條帶200-300 bp之間。

1.3.6 骨性關(guān)節(jié)炎小鼠模型建立方法

腹腔注射氯胺酮麻醉小鼠（20 mg·kg-1），使用VEET脫毛膏清除小鼠雙側(cè)膝關(guān)節(jié)部位的體毛，碘伏酒精消毒。OA組：手術(shù)刀在右膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)中線處開1 cm切口，顯露內(nèi)側(cè)副韌帶，使用30G針頭切斷內(nèi)側(cè)副韌帶，打開內(nèi)側(cè)膝關(guān)節(jié)囊，顯露內(nèi)側(cè)半月板，使用顯微手術(shù)彈簧剪切去內(nèi)側(cè)半月板的內(nèi)側(cè)三分之一，直接縫合皮膚切口；Sham組：手術(shù)刀在左膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)中線處開1 cm切口，直接縫合皮膚切口。切口處涂些許新霉素眼膏，放回籠內(nèi)，等待小鼠蘇醒。

1.3.7 統(tǒng)計方法

采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析。統(tǒng)計結(jié)果用平均值±標準差描述，組間比較均用t檢驗，P＜0.05認為存在顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠足底部淋巴回流清除率檢測與分析

在小鼠足底部注射ICG，然后利用近紅外儀器分別在注射后1 h和24 h檢測，與Control組（77.4%±3.46%）相比，TNF-Tg類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型組小鼠的足底淋巴回流清除率明顯下降（36.80%±6.70%，P＜0.05）。詳見圖3。

2.2 小鼠膝關(guān)節(jié)淋巴回流清除率檢測與分析

在小鼠膝關(guān)節(jié)腔中注射ICG，然后利用近紅外儀器分別在注射后3 h和6 h檢測，與Sham組（71.60%±6.38%） 相比，膝骨性關(guān)節(jié)炎組膝關(guān)節(jié)的清除率明顯下降（47.84%±5.21%，P＜0.05）。詳見圖4。

2.3 小鼠下肢淋巴管Pulse檢測與分析

小鼠足底部注射ICG注射后1 h后，檢測500 s內(nèi)淋巴管的信號強度變化情況。我們把峰值與谷值的變化次數(shù)轉(zhuǎn)化為脈沖個數(shù)，如圖5。Control組小鼠脈沖為1.12±0.27個/min，與之相比，TNF-Tg組檢測不到明顯的脈沖。

圖3 小鼠足底淋巴回流清除率檢測與分析（n=8）

圖4 膝關(guān)節(jié)淋巴回流清除率檢測與分析（n=8）

圖5 小鼠下肢集合淋巴管收縮脈沖檢測與分析（n=8）

3 討論

3.1 ICG在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

ICG染料影像學(xué)屬性的優(yōu)勢是它在近紅外光譜檢測下具有很高的信號背景比，自發(fā)光較低，發(fā)射波長峰值較長，可以增加組織的“穿透力”，使目標組織的影像在觀察過程中顯得非常明亮。ICG是為數(shù)不多的已經(jīng)通過美國食品藥品監(jiān)督局（Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）認證的可以應(yīng)用于臨床治療過程的照影劑，因此它被廣泛地應(yīng)用在臨床各科，包括泌尿科[17,19]、眼科[20-22]、婦科[21,23]、兒科[24,25]等。目前ICG-近紅外光譜成像技術(shù)不但用于多個臨床?？频拈_放性腫瘤手術(shù)作為影像引導(dǎo)，還用于增強術(shù)野影像分辨率的一些內(nèi)鏡治療術(shù)[26,27]，醫(yī)生從而得以在高分辨率的影像引導(dǎo)下更加徹底地清除腫瘤組織，提高了腫瘤切除術(shù)后的預(yù)后效果。由于腫瘤的種類區(qū)別，ICG在用于腫瘤外科臨床治療過程中暴露出了它的局限性——ICG染料本身沒有靶向性。在這樣的背景下，具有改進光學(xué)性能的IRDye 800CW被開發(fā)出來，它是更加理想的具有靶向性的熒光探針；通過加工，它可以結(jié)合到不同的特定配體，然后與不同腫瘤的細胞表面靶標結(jié)合，達到對于腫瘤更加精準的治療效果，此研究已經(jīng)在動物體內(nèi)實驗成功實現(xiàn)[28-30]，但是將以上實驗結(jié)果轉(zhuǎn)化到臨床前研究需要很多基礎(chǔ)工作鋪墊。

3.2 ICG在基礎(chǔ)研究中的發(fā)展

對于ICG的應(yīng)用性研究，科學(xué)家們一方面在試圖改進ICG在體內(nèi)的成像效果和“穿透力”；一方面在試圖擴大它的適用性或者應(yīng)用范疇。Tan等[31]利用納米技術(shù)得到新的粒子結(jié)構(gòu)ICG-lactosomes，并將其應(yīng)用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎小鼠模型，他們將ICG-lactosomes經(jīng)由小鼠尾靜脈注射入模型體內(nèi)，通過Xenogen IVIS spectrum成像系統(tǒng)觀察，發(fā)現(xiàn)與對照組的正常小鼠關(guān)節(jié)相比，這種新的粒子可以在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)周圍蓄積，而且在體內(nèi)的蓄積時間延長，這個研究結(jié)果的創(chuàng)新性在于，這種可視化的新型粒子在結(jié)合相關(guān)治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物后，可以為此類藥物干預(yù)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療過程提供更精準的藥物療效分析數(shù)據(jù)，也可能為未來類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療提供更高效的遞藥體系。盡管ICG在近紅外光譜照射下具有很好的“穿透性”，但是在皮膚肌肉等較厚組織的遮擋下，其在用于動物體內(nèi)實驗檢測觀察時，仍就很難提供令人滿意的圖像效果。Watanabe等[32]將生物材料與有機材料整合，構(gòu)建了一種類似納米球結(jié)構(gòu)的病毒載體，這種載體中包裹了ICG染料，他們把這種含有ICG染料的載體輸入小鼠體內(nèi)，然后用激光與超聲相結(jié)合的光聲系統(tǒng)檢測，發(fā)現(xiàn)這種包裹了ICG染料的載體在小鼠體內(nèi)深層部位的成像信號強于單純的ICG染料。

3.3 建立近紅外光譜成像系統(tǒng)為開展小動物關(guān)節(jié)淋巴回流功能檢測，篩選治療關(guān)節(jié)炎有效的藥物提供技術(shù)平臺

目前，市售用于臨床研究的近外紅光譜檢測儀商品包括日本濱松光學(xué)公司的Photodynamic Eye（PDE），加拿大Novadaq科技公司的SPY system，法國Fluoptics公司的Fluobeam。但是，這些針對臨床研究開發(fā)的市售儀器設(shè)計的應(yīng)用對像是人群，對于小動物實驗研究具有一定的局限性，本課題組建立的近紅外光譜檢測儀器更適合小動物體內(nèi)實驗研究。奧林巴斯MVX10體式顯微鏡作為儀器的主要框架為檢測結(jié)果提供了更好的可重復(fù)性，連續(xù)性和穩(wěn)定性；Tokai Hit熱臺維持麻醉后小動物的正常體溫為得到穩(wěn)定的體內(nèi)實驗數(shù)據(jù)提供保障；圖像采集系統(tǒng)我們選用的是更加敏銳的EMCCD相機，它細膩高敏的成像效果保證淋巴管的成像更加清晰，檢測結(jié)果更加精準。近年來，中醫(yī)藥精準醫(yī)療理念為中醫(yī)藥科學(xué)研究指明了方向[33]，本課題組未來的研究主要聚焦于篩選治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎有效的中藥單體，為開啟類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎新藥研究奠定基礎(chǔ)。

綜上所述，我們建立的近紅外光譜-ICG成像系統(tǒng)可以為評價動物體內(nèi)淋巴回流功能實驗研究，篩選治療關(guān)節(jié)炎有效的中藥復(fù)方，小分子化合物提供良好的工作平臺。

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Application of Near Infrared-Indocyanine Green Imaging System to the Detection of Lymphatic Draining Function in Arthritic Mice

Xu Hao1,2, Wang Tengteng1,2, Qi Xiaofeng1,2, Wang Qiong1,2, Zhang Li1,2, Xing Lianping3, Shi Qi1,2, Wang Yongjun1,2,4, Liang Qianqian1,2
(1. Longhua Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200032, China; 2. Institute of Spine Disease, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200032, China; 3. University of Rochester Medical Center, New York 14623, U.S.A.; 4. School of Rehabilitation Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200120, China)

This study aimed at establishing near infrared (NIR)-indocyanine green (ICG) imaging system to validate the imaging quality and stability of the imaging system by testing the ICG clearance of the footpads of mice with rheumatoid arthritis (RA) and knee joints of those with osteoarthritis (OA). The joint clearances of TNF-Tg mice and surgery-induced knee osteoarthritis (KOA) mice were detected using the imaging system in this study. As a result, it was found that the ICG clearance of the footpads of TNF-Tg mice decreased (36.80%±6.70%) compared with those of the control group (77.4%±3.46%, P ＜ 0.05). The pulse number of lower limb lymphatic vessels in TNF-Tg mice was unavailable to detect, while the pulse number of the control group was 1.12±0.27 pulses per minute. The ICG clearance in the knee joints of the KOA mice alse decreased (47.84%±5.21%) compared with those of the sham group (71.60%±6.38%, P ＜ 0.05). In conclusion, the NIR-ICG imaging system provided desirable technology platform for evaluating in vivo lymphatic draining function and screening formula or monomer of traditional Chinese medicine as the administration of arthritis.

Near infrared imaging, indocyanine green, arthritis, lymphatic drainage function

10.11842/wst.2016.11.005

R274

A

（責(zé)任編輯：朱黎婷，責(zé)任譯審：朱黎婷）

2016-11-20

修回日期：2016-11-20

＊ 國家自然科學(xué)基金委重點項目（81330085）：痰瘀型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎與淋巴關(guān)系的基礎(chǔ)研究，負責(zé)人：施杞；國家自然科學(xué)基金委重大國際合作項目（81220108027）：益氣祛濕法調(diào)控淋巴系統(tǒng)對炎癥性關(guān)節(jié)炎的影響，負責(zé)人：王擁軍；教育部高等學(xué)校全國優(yōu)秀博士學(xué)位論文作者專項資金資助項目（201276）：負責(zé)人：梁倩倩；上海市龍華醫(yī)院龍醫(yī)創(chuàng)新團隊（LYCX-01）：祛瘀化瘀防治頸痛和炎性關(guān)節(jié)炎的基礎(chǔ)研究，負責(zé)人：梁倩倩；國家自然科學(xué)基金委青年基金項目（81403418）：TNF-α介導(dǎo)NF-κB信號通路活化在骨性關(guān)節(jié)炎形成中的作用及蠲痹湯防治的機制研究，負責(zé)人：徐浩；上海市長寧區(qū)衛(wèi)生與計劃生育委員會“光華卓越PI工程”項目（2016-01），負責(zé)人：施杞；筋骨理論與治法教育部重點實驗室，負責(zé)人：王擁軍。

＊＊ 通訊作者：梁倩倩，副研究員，碩士生導(dǎo)師，主要研究方向：中醫(yī)藥防治慢性骨與關(guān)節(jié)疾病。