申明莉王玉華
?
SAT技術(shù)用于快速檢測肺結(jié)核的臨床意義
申明莉1王玉華2
【摘要】目的 探討RNA恒溫擴增實時熒光檢測技術(shù)(SAT)快速檢測肺結(jié)核的效果。方法 對2015年9月~2016年4月在我院臨床確診100例肺結(jié)核患者和100例疑似肺結(jié)核的患者的痰液分別用SAT法,并與其他方法進行對比。結(jié)果 100例BD-960陽性患者中TB-SAT陽性例數(shù)為98例;100例BD-960陰性患者中TB-SAT陽性例數(shù)為13例。結(jié)論 SAT技術(shù)用于實驗室檢測結(jié)核分枝桿菌臨床價值較高。
【關(guān)鍵詞】SAT;PCR;肺結(jié)核;肺診斷
中國是全球結(jié)核病高發(fā)的國家之一,2010年全國第5次結(jié)核病流行病學調(diào)查顯示,我國活動性肺結(jié)核患病率為459/100 000,其中傳染性肺結(jié)核患病率為66/100 000[1-2]。其傳染性、潛伏性、難清除性、再活動性、致病復雜性等防治難點使結(jié)核病防治成為首要任務(wù)[3]。防治結(jié)核病必須要控制活動性結(jié)核病,以達到控制傳染源,保護易感人群,切斷傳播途徑。其檢測方法成為關(guān)鍵[4]。SAT-RNA法檢測操作簡便,可鑒定結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌,活菌檢測,最快2 h出結(jié)果[5]??杀苊忮e檢、漏檢,為臨床對肺結(jié)核早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療、早預防提供重要依據(jù)。
1.1 病例來源
選取2015年9月~2016年4月在我院住院患者200例。200例患者中100例為確診病例,男性69例,年齡17~77歲,平均(49.5±6.9)歲;女性31例,年齡17~86歲,平均(35.4±5.2)歲,臨床癥狀和影像學診斷符合結(jié)核病的診斷標準。100為疑似病例,表現(xiàn)不明原因發(fā)熱、咳嗽、肺CT顯示肺部有陰影。男性59例,年齡12~85歲,平均(58.5±7.1)歲,女性41例,年齡19~84歲,平均(46.7±5.6)歲。
1.2 試劑與方法
患者的痰標本均采用抗酸染色法染色和L-J羅氏培養(yǎng),染色液試劑盒和培養(yǎng)試劑盒由臺灣貝索生物有限公司提供;BD-960快速培養(yǎng)由美國BD公司提供的MGIT液體培養(yǎng)基進行培養(yǎng);T-spot. TB由上海復興長征醫(yī)學科學有限公司提供;SAT-TB由上海仁度生物科技有限公司提供;PCR反向雜交法菌種鑒定試劑由深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供。痰標本留取,囑患者清晨漱口后,咳出的深部痰置于無菌痰盒內(nèi),留取4盒3~5 ml。血樣采集抽取足量的外周靜脈血,加至含有肝素抗凝劑的采血管中。
SAT檢測在肺結(jié)核的快速準確診斷中優(yōu)于痰涂片、痰培養(yǎng)和T-spot.TB等方法,具體結(jié)果如下:
100例BD-960陽性標本中,SAT陽性率為98%,涂片陽性率為31%、羅氏培養(yǎng)陽性率為65%、T-spot.TB陽性率為98%。
TB-SAT報告時間最快24 h,羅氏培養(yǎng)報告時間最快為4~6周,涂片為24~48 h,TB-tspot報告時間最快為24~48 h。
100例BD960快培陰性中,TB-SAT陽性13例,陰性87例,陽性率為13%,羅氏培養(yǎng)陽性率為3%,涂片陽性率為4%,TB-tspot陽性率為86%。
100例BD-960培養(yǎng)陽性病例中,SAT檢測陰性2例,經(jīng)過菌種鑒定后1例為鳥分枝桿菌,1例為淺黃分枝桿菌。
結(jié)核分枝桿菌是引起人類結(jié)核病的病原菌,可侵犯全身各器官,但以肺結(jié)核多見,我國是僅次于印度的結(jié)核病高負擔國家,疫情嚴重[6]。近年結(jié)核病呈明顯上升趨勢,全球所有傳染性疾病中,結(jié)核病成為成年人的首位死因。對于感染結(jié)核的患者進行早期診斷和治療是改善患者預后的關(guān)鍵,也是控制結(jié)核播散的重要環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的結(jié)核桿菌檢測方法存在諸多弊端,不能實現(xiàn)對結(jié)核患者的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。因此,發(fā)展能用于診斷結(jié)核的快速敏感的實驗室技術(shù)十分重要。
SAT熒光定量恒溫檢測技術(shù)是利用靶標RNA被帶有特異性核酸序列組合的含T7啟動子的上游引物特異性結(jié)合,在逆轉(zhuǎn)錄酶(RT酶)的作用下合成一條RNA和帶有T7啟動子引物的DNA單鏈的雜合體雙鏈,雜合體雙鏈上的RNA單鏈被具有活性的核糖核酸酶H(RNA水解酶)水解,留下一條帶有T7啟動子引物的DNA單鏈(cDNA),此條DNA單鏈與反轉(zhuǎn)引物結(jié)合,在RT酶的作用下形成都帶有T7啟動子的DNA雙鏈,T7RNA聚合酶可以特異性識別此帶有T7啟動子的雙鏈DNA,在T7酶的作用下可以此DNA雙鏈為模版,不斷復制出100 ~ 1 000條RNA拷貝(受到整體檢測時間限制),復制出的RNA和帶有特異性核酸序列的帶有熒光標記的分子信標結(jié)合,發(fā)出熒光,在熒光檢測儀上被實時捕獲,直觀反映擴增產(chǎn)物的產(chǎn)生,同時,也有部分復制出的RNA被帶有特異性核酸序列組合的含T7啟動子的上游引物特異性結(jié)合,再次進入擴增過程,從而實現(xiàn)對TB-RNA的檢測。
SAT-RNA法檢測操作簡便,可檢出人型、牛型、非洲型結(jié)核分枝桿菌,不能檢出非結(jié)核分枝桿菌和呼吸道病菌感染,具有很高的特異性,可用于臨床鑒別診斷,靈敏度好,陽性檢出率高,活菌檢測,最快2 h出結(jié)果??杀苊忮e檢、漏檢。其活菌檢測技術(shù)對臨床及時判愈,提高醫(yī)院診療水平,降低患者診治成本具有重要意義[7]。
以病原體RNA為擴增靶標的核酸恒溫擴增檢測(SAT)技術(shù)開始應(yīng)用于病原體的核酸診斷[8]。這是結(jié)核病診斷技術(shù)跨時代的飛躍,也是實驗室檢測水平的提高,更是廣大臨床患者的福音。
參考文獻
[1]張娟,孫炳奇,李瑩,等. 實時熒光核酸恒溫擴增檢測技術(shù)在肺結(jié)核臨床診斷中的價值研究[A]. 中國防癆協(xié)會80周年紀念暨2013年全國學術(shù)大會論文集[C]. 北京:中國防癆協(xié)會,2013:61-63.
[2]李莉. 徐州市涂陽肺結(jié)核患者發(fā)現(xiàn)及流行病學分析[J]. 實用預防醫(yī)學,2015,22(12):1489-1491.
[3]謝春雨,李蓬. 2011-2013年河南省肺結(jié)核流行特征分析[J]. 河南預防醫(yī)學雜志,2015,26(6):461-462.
[4]倪麗麗,羅柳林,景玲杰,等. 恒溫擴增實時熒光檢測技術(shù)在肺結(jié)核診斷中的臨床價值[J]. 中華檢驗醫(yī)學雜志,2012,35(8):702-705.
[5]崔振玲,沙巍,黃曉辰,等. RNA恒溫擴增技術(shù)快速檢測痰標本中結(jié)核分枝桿菌的研究[J]. 中華結(jié)核和呼吸雜志,2011,34 (12):894-897.
[6]沙巍,何婭,蔣瑞華,等. 實時熒光核酸恒溫放大檢測(SAT)法對肺結(jié)核診斷價值的研究[J]. 中國防癆雜志,2012,34(6):377-379.
[7]蔡杏珊,馬品云,張院良,等. 實時熒光核酸恒溫擴增檢測技術(shù)在結(jié)核病診斷中的臨床應(yīng)用[J]. 中國防癆雜志,2014,36(6):458-461.
[8]王永忠,張宏宇,劉小琴,等. 痰液標本結(jié)核分支桿菌RNA恒溫擴增檢測及臨床應(yīng)用[J]. 山東醫(yī)藥,2011,51(41):83-84.
【中圖分類號】R521
【文獻標識碼】A
【文章編號】1674-9308(2016)09-0018-03
doi:10.3969/j.issn.1674-9308.2016.09.012
作者單位:1 黑龍江省牡丹江市康安醫(yī)院檢驗科,黑龍江 牡丹江157011;2 牡丹江市第二人民醫(yī)院檢驗科,黑龍江 牡丹江 157011
The Clinical Significance of SAT Technique for Rapid Detection of Pulmonary Tuberculosis
SHEN Mingli1WANG Yuhua2, 1 Department of clinical laboratory, Kang’an hospital of Mudanjiang, Mudanjiang Heilongjiang 157011, China, 2 Department of clinical laboratory, Second People's Hospital of Mudanjiang, Mudanjiang Heilongjiang 157011, China
[Abstract]Objective To study the RNA thermostatic expansion real-time fluorescence detection technology (SAT) rapid detection of tuberculosis.Methods 100 cases of tuberculosis patients and 100 cases of patients with suspected tuberculosis sputum in the SAT method respectively were compared from September 2015 to April 2016 in our hospital, and compared with other methods. Results 100 cases of BD-960 in patients with positive TB-SAT positive cases of 98 cases. in 100 patients with BD-960 negative TB-SAT positive cases for 13 patients. Conclusion The SAT technology used in laboratory detection of mycobacterium tuberculosis high clinical value.
[Key words]SAT, PCR, Tuberculosis, Pulmonary diagnosis