易檢祥

湘鄉(xiāng)市的生豬人工授精工作始于20世紀(jì)80年代中期，經(jīng)過(guò)三十多年的發(fā)展，特別是近幾年，由于設(shè)備的更新、養(yǎng)豬優(yōu)惠政策的加大和人們觀念的改變等因素，該項(xiàng)技術(shù)迅速得到普及推廣。豬人工授精技術(shù)是養(yǎng)豬生產(chǎn)規(guī)模化、現(xiàn)代化的重要手段，不僅可以減少公豬的飼養(yǎng)頭數(shù)，有利于優(yōu)良種公豬跨年度、跨地域使用，獲得大量?jī)?yōu)良后代，還能減少疾病傳播。為此，筆者通過(guò)總結(jié)湘江市豬人工授精的一些關(guān)鍵技術(shù)，旨在為貫徹執(zhí)行好國(guó)家農(nóng)業(yè)部、財(cái)政部（農(nóng)辦財(cái)2014年60號(hào)）和湖南省湘牧漁發(fā)（2014年71號(hào)文件）關(guān)于“菜籃子”工程項(xiàng)目服務(wù)，更想為廣大養(yǎng)豬場(chǎng)（戶）提供參考。

一、豬人工授精必備設(shè)施

1. 實(shí)驗(yàn)室

面積15～20米2，通電、通水，有工作臺(tái)等。

2. 假豬臺(tái)

要求公豬爬跨舒服，易于清洗消毒，高低、寬窄能自由調(diào)節(jié)。

3. 顯微鏡

用于評(píng)定精子活率、密度、畸形率等。

4. 精子密度測(cè)定儀

要求1～2分鐘可出檢測(cè)結(jié)果，以減少對(duì)原精的影響。

5. 電子臺(tái)稱

用于稱量精液質(zhì)量（1克相當(dāng)于1毫升），以測(cè)量精液體積。

6. 數(shù)顯恒溫水浴鍋

用于加熱精液稀釋液、控制精液稀釋液的溫度和解凍冷凍精液。

7. 數(shù)顯恒溫精液保存箱

用于精液的保存，要求溫度波動(dòng)范圍在±1℃。

8. 量筒或燒杯

容積1升、2升的各2個(gè)，用于準(zhǔn)備稀釋液、稀釋精液以及將精液分裝到輸精瓶。

9. 保溫瓶

用于采精，能保溫隔熱。

10. pH計(jì)或pH試紙

用于測(cè)量精液的pH值。

11. 溫度計(jì)

需要2支校正好的溫度計(jì)，分別用于測(cè)量精液和稀釋液的溫度。

12. 其他

采精杯、消毒外科用紗布、輸精瓶（100毫升）、微量可調(diào)移液器及吸頭、精子計(jì)數(shù)器、玻璃棒、一次性乳膠手套、一次性采精袋、蒸餾水、紙巾、浴巾（保溫用）、市售成品稀釋粉或一些配制精液稀釋液所用的藥品等。

二、精液采集前的準(zhǔn)備工作

1. 實(shí)驗(yàn)室和采精人員準(zhǔn)備

實(shí)驗(yàn)室墻面、地面和室內(nèi)空氣保持無(wú)灰塵，室溫控制在22～25℃。采精人員要穿工作服，用70%酒精擦凈工作臺(tái)。

2. 精液稀釋液準(zhǔn)備

在采精前1小時(shí)將精液稀釋粉放入定量的雙蒸水（兩次蒸餾得到的水）中混勻，充分溶解，置于37℃恒溫水浴鍋中預(yù)熱備用。

3. 精液處理設(shè)備準(zhǔn)備

用于精液處理的所有設(shè)備都應(yīng)清潔、滅菌、干燥和保溫。采精前保溫瓶、采精杯等要放入37℃恒溫箱中預(yù)熱，還要準(zhǔn)備好精液分裝器、精液瓶、紗布等。

4. 儀器準(zhǔn)備

包括電子天平、恒溫載物臺(tái)、顯微鏡、精子計(jì)數(shù)器、100～500微升移液器及其配套吸頭、簽字筆、記錄本、載玻片和蓋玻片等。

5. 種公豬的準(zhǔn)備

剪去公豬包皮部的長(zhǎng)毛，沖洗干凈豬體后擦干。

三、豬的人工采精方法

生產(chǎn)中常采用手握采精法，具體操作方法是：采精人員一手帶雙層手套，用溫?zé)岬纳睇}水清洗種公豬腹部和包皮，待其爬跨假豬臺(tái)并伸出陰莖時(shí)，脫去外層手套，用手緊握伸出的公豬陰莖螺旋狀龜頭，順其向前沖力將陰莖的“S”狀彎曲拉直，握緊陰莖龜頭防止其旋轉(zhuǎn)。待公豬射精時(shí)，用集精杯收集精液于保溫杯內(nèi)的一次性采精袋中，最初射出的少量精清（5毫升左右）不接取。由于公豬的射精反應(yīng)對(duì)壓力比對(duì)溫度更為敏感，只要采精人員掌握適當(dāng)?shù)膲毫?，?jīng)過(guò)訓(xùn)練的公豬都可以采到精液。

四、精液的品質(zhì)檢查

1. 精液的外觀檢查

①顏色。正常的精液為乳白色或淺灰色，呈云霧狀，精子密度越高，色澤越濃，其透明度越低。綠色或黃色的精液?；煊心撘夯蚰蛞?，淺紅色或紅褐色的精液常帶有血液，這樣的精液都應(yīng)舍棄不用，并會(huì)同獸醫(yī)尋找原因、及時(shí)治療。

②氣味。正常的精液略帶腥味，如有異常氣味，應(yīng)廢棄不用。

③pH值。正常的精液pH值為7.0～7.8，呈中性或弱堿性。

④采精量的測(cè)定。豬的射精量因品種、年齡、使用頻率不同有較大的差異，一般一次射精量為200～500毫升。

2. 精液的顯微檢查

①精子活率檢查。精子活率是指精液在37℃條件下呈直線運(yùn)動(dòng)的精子占全部精子數(shù)的百分率，一般要求在每次采精后、精液稀釋后和輸精前均應(yīng)進(jìn)行活率檢查。精子活率一般采用0.1～1.0十級(jí)評(píng)分法進(jìn)行評(píng)估，在37℃條件下檢測(cè)，要求載玻片和蓋玻片都要預(yù)熱。鮮精活率在0.7以上才可進(jìn)行稀釋，保存24小時(shí)以上的精子活率達(dá)到0.6以上才可使用。

②精子密度檢查。正常公豬的精子密度為2億～3億/毫升，有的可高達(dá)5億/毫升。檢測(cè)精子密度的方法主要有估測(cè)法、精子密度儀法和血細(xì)胞計(jì)數(shù)法等，目前生產(chǎn)上常用的是精子密度儀法。

③精子畸形率檢查。取1滴原精液做抹片（也可用稀釋后精液），自然干燥；用福爾馬林磷酸鹽固定液固定15～20分鐘，再用Giemsa染液染色90分鐘，水洗后自然風(fēng)干。在顯微鏡下放大400～1000倍檢查，要求鏡檢計(jì)數(shù)300個(gè)以上精子，記錄觀察到的畸形精子數(shù)和精子總數(shù)之比，即可得出畸形精子百分率。在檢查精液時(shí)如發(fā)現(xiàn)精子畸形率超過(guò)15%且某一種畸形精子占優(yōu)勢(shì)，就需及時(shí)查找原因；如果沒(méi)有任何一種畸形精子占優(yōu)勢(shì)，即使總畸形率達(dá)20%，也不會(huì)影響受胎率，但一般要求精子畸形率以不超過(guò)18%為宜。

3. 填寫精液品質(zhì)檢查登記表

精液品質(zhì)檢查后應(yīng)做好詳細(xì)記錄，包括公豬品種、耳號(hào)、采精時(shí)間、采精量、精子活率、精子密度和畸形率等。endprint

五、精液的稀釋

1. 精液稀釋液的配制

精液稀釋液要求在使用前配制，這樣才會(huì)有較穩(wěn)定的酸堿度，并貼好標(biāo)簽和注明品名、配制時(shí)間、配制人等，然后放入4℃冰箱保存?zhèn)溆?。稀釋液根?jù)保存時(shí)間的長(zhǎng)短可分為短效、中效和長(zhǎng)效稀釋液。多數(shù)精液稀釋液含有緩沖物質(zhì)（檸檬酸鈉等）和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（糖類等），緩沖物質(zhì)用于避免pH值的改變，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)可被精子吸收。

2. 精液稀釋

稀釋精液時(shí)，要求使用容器都必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格消毒處理，并用少量同溫稀釋液沖洗1遍。具體要求如下：一是未經(jīng)品質(zhì)檢查或檢查不合格（活率<0.7）的精液不能稀釋。二是精液采集后應(yīng)盡快稀釋，原精儲(chǔ)存時(shí)間不宜超過(guò)30分鐘。三是稀釋時(shí)應(yīng)于較暗處操作，嚴(yán)禁太陽(yáng)光直射精液。四是精液與稀釋液的溫差不能超過(guò)1℃，以精液溫度為標(biāo)準(zhǔn)來(lái)調(diào)節(jié)精液稀釋液的溫度。五是將稀釋液沿杯（瓶）壁緩慢加入到精液中，然后輕輕搖動(dòng)或用消毒玻璃棒沿一個(gè)方向緩慢攪拌，使其混合均勻。高倍稀釋前，應(yīng)先進(jìn)行低倍稀釋（1∶1～2），稍待片刻后再將余下的稀釋液沿容器壁緩慢加入，以防造成“稀釋打擊”。六是精液稀釋的比例應(yīng)根據(jù)原精液的品質(zhì)、輸精量、配種母豬的頭數(shù)以及是否需要運(yùn)輸和儲(chǔ)存而定。一般以每次輸精量80～100毫升、含有效精子40億個(gè)以上來(lái)確定稀釋倍數(shù)。例如：某頭公豬一次采精量是200毫升，活率為0.8，密度為2億/毫升，含40億個(gè)有效精子，則總精子數(shù)為200毫升×2億/毫升=400億，稀釋倍數(shù)為400億×0.8÷40億=8倍，加入稀釋液的量則為8×100毫升-200毫升=600毫升。七是稀釋后要求靜置片刻再進(jìn)行精子活率檢查。如果稀釋前后精子活率無(wú)太大變化，即可進(jìn)行分裝與保存，如果活率下降過(guò)快，說(shuō)明稀釋液的配制或稀釋操作有問(wèn)題，不宜使用且應(yīng)查明原因加以改進(jìn)。

六、精液的分裝

精液分裝可采用對(duì)精子無(wú)毒害作用的塑料瓶（管或袋），以采用塑料瓶較為常用。塑料瓶上一般有刻度，容量為80～100毫升，瓶上要標(biāo)明公豬品種、耳號(hào)、生產(chǎn)日期和稀釋液名稱等。

七、精液的保存

精液保存分為常溫（17℃）、低溫（4℃）和冷凍（-196℃）保存，目前國(guó)內(nèi)常采用的是常溫保存。

精液常溫保存的要求如下：一是將分裝完的精液置于22～25℃的室溫中1～2小時(shí)后，放入17℃恒溫箱儲(chǔ)存，也可將精液瓶用幾層紗布或干毛巾包好后直接放置于17℃冰箱中，讓其溫度緩慢下降，避免因溫度下降過(guò)快造成死精數(shù)增多。二是在保存過(guò)程中要求每12小時(shí)將精液搖勻1次，防止精子沉淀引起死亡，每次搖動(dòng)時(shí)動(dòng)作要輕緩均勻，同時(shí)觀察精液的色澤并做好記錄，發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)處理。三是盡量減少精液保存箱開關(guān)次數(shù)，以降低對(duì)精子的影響。四是切實(shí)注意恒溫箱內(nèi)溫度的變化（通過(guò)溫度計(jì)顯示的數(shù)據(jù)判斷），避免出現(xiàn)溫度升高或降低的現(xiàn)象。五是用短效稀釋液稀釋的精液可保存3天，用中效稀釋液稀釋的精液可保存4～6天，用長(zhǎng)效稀釋液稀釋的精液可保存7天以上。但無(wú)論用何種稀釋液保存精液都應(yīng)盡快用完，否則會(huì)影響使用效果。使用前要對(duì)保存的精液要進(jìn)行活率檢查，活率低于0.6的應(yīng)棄用。

八、精液的運(yùn)輸

精液運(yùn)輸成敗的關(guān)鍵在于保溫和防震是否做得充分。在運(yùn)輸過(guò)程中，精液應(yīng)置于保溫較好的裝置內(nèi)，溫度保持在16～18℃，并避免強(qiáng)烈震動(dòng)。

精液運(yùn)輸?shù)淖⒁馐马?xiàng)如下：一是運(yùn)輸前必須嚴(yán)格檢查精液，活率低于0.7的嚴(yán)禁調(diào)出；二是盡量排出包裝瓶或包裝袋中的空氣，以減少運(yùn)輸過(guò)程中的震蕩；三是在運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格避光；四是精液運(yùn)達(dá)目的地后，再次檢查精子活率，合格后方可接收。

九、輸精

1. 輸精時(shí)間

發(fā)情母豬陰部紅腫，用手按壓背部出現(xiàn)靜立反射后8～12小時(shí)為最佳輸精時(shí)間。此時(shí)發(fā)情母豬有爬跨其他母豬或允許其他母豬爬跨的表現(xiàn)，也可利用公豬進(jìn)行試情，母豬接受公豬爬跨則表明發(fā)情。發(fā)情母豬第一次輸精后8～12小時(shí)進(jìn)行第二次輸精。

2. 輸精方法

輸精方法有子宮頸輸精法、子宮內(nèi)輸精法和子宮角輸精法，其中子宮內(nèi)輸精法、子宮角輸精法精液使用量小，適用于冷凍精液、性控精液等，但操作相對(duì)復(fù)雜，需特殊的輸精管。目前生產(chǎn)上子宮頸輸精法較常用，其操作簡(jiǎn)單、易掌握，具體操作方法如下：操作人員清潔消毒雙手后戴上消毒手套，清潔母豬外陰、尾根和臀部周圍，再用溫水浸濕毛巾，擦凈外陰部；從密封袋中取出滅菌后的輸精管，手不應(yīng)接觸輸精管前 2/3 部分，在其前端涂上潤(rùn)滑液；將輸精管以45°角向上插入母豬生殖道內(nèi)，當(dāng)感覺(jué)有阻力時(shí)緩慢逆時(shí)針?lè)较蛐D(zhuǎn)同時(shí)前后移動(dòng)，使輸精管進(jìn)入子宮深部10～15厘米，直到感覺(jué)輸精管前端被子宮頸鎖定（輕輕回拉不動(dòng)）后從精液保存箱取出品質(zhì)合格的精液，核對(duì)公豬品種、耳號(hào)；緩慢顛倒輸精瓶（管、袋）搖勻精液后連接輸精管，并輕輕按壓確保精液能夠順利流出；當(dāng)輸精瓶（管、袋）內(nèi)精液排空后放低輸精管約15秒，觀察精液是否回流到輸精瓶，若回流要將其再次輸入。

3. 填寫輸精記錄

輸精后應(yīng)做好詳細(xì)記錄，包括公、母豬品種，耳號(hào)，輸精時(shí)間，輸精量，精子活率，輸精次數(shù)和輸精操作者等。

（作者聯(lián)系地址：湖南省湘鄉(xiāng)市畜牧水產(chǎn)局 郵編：411400）endprint