梁慧敏，歐 妮

（廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 梧州 543002）

高效液相色譜－電噴霧檢測(cè)器法測(cè)定貞芪扶正顆粒中黃芪甲苷含量

梁慧敏，歐 妮

（廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 梧州 543002）

目的建立測(cè)定貞芪扶正顆粒中黃芪甲苷含量的高效液相色譜－電噴霧檢測(cè)器(HPLC－CAD)法。方法采用ZORBAX Eclipse Plus C18柱（100 mm×4．6 mm，3．5 m），檢測(cè)器為電噴霧檢測(cè)器，霧化溫度為35℃，載氣N2，壓力63．6 psi，柱溫40℃。結(jié)果黃芪甲苷進(jìn)樣量在0．286～2．86 g范圍內(nèi)與峰面積對(duì)數(shù)值線性關(guān)系良好（r＝0．999 8），平均回收率為99．14%，RSD為0．42%（n＝9)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，方法可靠，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可作為貞芪扶正顆粒質(zhì)量控制的方法。

貞芪扶正顆粒；黃芪甲苷；高效液相色譜－電噴霧檢測(cè)器法

貞芪扶正顆粒的主要成分為黃芪、女貞子，藥理作用是提高人體免疫功能，保護(hù)骨髓和腎上腺皮質(zhì)功能，可用于各種疾病引起的虛損，配合手術(shù)、放射、化學(xué)治療時(shí)促進(jìn)正常功能的恢復(fù)。衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)貞芪扶正顆粒的質(zhì)量控制以黃芪甲苷為指標(biāo)，采用薄層掃描法測(cè)定含量，其前處理步驟繁雜，方法耗時(shí)，重復(fù)性差，可行性不佳。為了更好地控制其質(zhì)量，保證該品種的臨床療效，本研究中采用高效液相色譜－電噴霧檢測(cè)器(HPLC－CAD)法同時(shí)對(duì)制劑中黃芪甲苷進(jìn)行了含量測(cè)定，簡(jiǎn)化了提取條件，方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速。

1 儀器與試藥

液相雙三元Thermo－U3000，BP211D型電子分析天平。黃芪甲苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110781－200613，含量為95．8%）；貞芪扶正顆粒(通化神源藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20140220，規(guī)格為每袋5 g)；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18柱（100 mm× 4．6 mm，3．5 μm）；流動(dòng)相：乙腈－水（32∶68）[1]；流速：1．0 mL／min；檢測(cè)器為電噴霧檢測(cè)器，霧化溫度為35℃；載氣：N2，壓力63．6 psi；柱溫：40℃。在此條件下，黃芪甲苷峰與鄰峰基線分離良好，理論板數(shù)不低于8 000[2]。在對(duì)照品溶液色譜主峰位置上，供試品溶液具有保留時(shí)間相同的色譜峰，陰性對(duì)照品溶液則無(wú)此峰，表明樣品中其他成分對(duì)黃芪甲苷的測(cè)定無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖1。

2．2 溶液制備

稱取黃芪甲苷對(duì)照品18．66 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成黃芪甲苷對(duì)照品貯備溶液（質(zhì)量濃度為1．787 6 g／L）；再精密量取2 mL，置25 mL容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，制成對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為0．143 0 g／L）。

取貞芪扶正顆粒10袋，研成細(xì)粉，稱取樣品約5 g，加水40 mL溶解，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇溶液振搖提取3次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，用氨試液提取2次，每次20 mL，棄去氨試液，正丁醇液蒸干[3－5]，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0．22 μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

按處方工藝制得不含黃芪的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取黃芪甲苷對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為0．143 0 g／L）2，5，10，15，20 μL進(jìn)樣，以進(jìn)樣量對(duì)數(shù)值（X）為橫坐標(biāo)、對(duì)照品平均峰面積對(duì)數(shù)值（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y＝1．505 21 X＋5．586 95，r＝0．999 8（n＝5）。結(jié)果表明，黃芪甲苷進(jìn)樣量在0．286～2．86 μg范圍內(nèi)與峰面積對(duì)數(shù)值呈良好線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn)：精密量取同一對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次依法測(cè)定。結(jié)果的 RSD為1．1%（n＝5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，于配制后0，2，4，6，8 h時(shí)分別量取10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD分別為1．1%，0．95%（n＝5），表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：稱取貞芪扶正顆粒細(xì)粉，照2．2項(xiàng)下方法共制備6份供試品溶液，分別取10 μL注入液相色譜儀，以峰面積外標(biāo)法測(cè)定含量。結(jié)果黃芪甲苷平均含量為0．444 mg／g，RSD為1．5%（n＝6）。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取已知含量的貞芪扶正顆粒細(xì)粉(黃芪甲苷含量為0．444 mg／g)共6份，加入黃芪甲苷對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為0．143 0 g／L）7．5 mL，照2．2項(xiàng)下方法處理后，各取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積外標(biāo)法測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 黃芪甲苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2．4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，依法測(cè)定含量。結(jié)果批號(hào)為20140220，20140322，20140510的樣品中黃芪甲苷含量分別為每袋2．3，2．2，2．1 mg。

3 討論

本試驗(yàn)中提取方法所用到的氨試液，主要是去除到顆粒劑中的極性成分如糖類等，減少基質(zhì)干擾，增加了系統(tǒng)分離能力。關(guān)于正丁醇提取次數(shù)的選擇，供試品在其他相同條件下，用水飽和的正丁醇振搖提取2，3，4次，結(jié)果表明，用供試品提取2次與3，4次有較大差異，而3，4次時(shí)黃芪甲苷含量無(wú)明顯差異，故選擇用水飽和的正丁醇溶液振搖提取3次。

關(guān)于流動(dòng)相的選擇，參考2010年版《中國(guó)藥典（一部）》黃芪中黃芪甲苷項(xiàng)下的溶劑，經(jīng)過(guò)試驗(yàn)不同流動(dòng)相的比例(30∶70，32∶68，35∶65)，結(jié)果流動(dòng)相為乙腈 －水（32∶68）可同時(shí)將黃芪甲苷峰和其他雜質(zhì)峰分離，且分離效果較好，無(wú)干擾，故選用該流動(dòng)相。

本試驗(yàn)中采用的電噴霧式檢測(cè)器（CAD）是一款通用檢測(cè)器，可檢測(cè)任何非揮發(fā)性和部分半揮發(fā)性物質(zhì)，重復(fù)性好，回收率高，結(jié)果可靠，可作為黃芪制劑的質(zhì)量控制方法[6－9]。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：283．

[2]李效寬，張艷海，馮天輝，等．在線固相萃取法結(jié)合電霧式檢測(cè)器測(cè)定黃茂及其復(fù)方中黃茂甲普的含量[J]．分析化學(xué)，2014，42（12）：1 791－1 796．

[3]董紅紅，張麗增，郭小青，等．HPLC－蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定貞芪扶正顆粒中黃芪甲苷的含量[J]．中國(guó)藥房，2008，19（6）：444－446．

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[5]仝立國(guó)，梁瑞敏，馮瑪莉，等．HPLC－ELSD測(cè)定芪苓益肝顆粒中黃芪甲苷[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（13）：72－74．

[6]王 平，梁逸曾．HPLC－DAD－MS研究黃芪的化學(xué)成分[J]．中草藥，2011，42（2）：226－229．

[7]趙國(guó)英，袁秀榮，李 玲，等．鹿紅顆粒中黃芪甲苷和羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20（6）：40－43．

[8]張 彤，黃順旺．HPLC－ELSD測(cè)定前列舒樂(lè)顆粒中的黃芪甲苷[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（7）：82－83．

[9]涂 波，汪志勇．當(dāng)歸補(bǔ)血湯顆粒中黃芪甲苷和黃芪多糖的含量測(cè)定[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（18）：115－117．

Content Determination of Stachydrine Hydrochloride in Zhengqifuzheng Granules by HPLC－CAD

Liang Huimin,Ou Ni
(Guangxi Wuzhou Institute for Food and Drug Control,Wuzhou,Guangxi,China 543002)

Objective To establish an HPLC－CAD method for the determination of Stachydrine Hydrochloride in Zhengqifuzheng Granules．M ethods A ZORBAX Eclipse Plus C18Column(100 mm×4．6 mm,3．5 μm)was used．Detector was CAD,with evaporation temperature at 35℃,N2as Carrier gas,pressure at 63．6 psi,Column temperature at 40℃．Results Stachydrine Hydrochloride showed good linear range within 0．286－2．86 μg(r＝0．999 8)．The average recovery was 99．14%,RSD＝0．42%(n＝9)．The negative sample had no interference．Conclusion s This method is simple,feasible and reproducible．The result was reliable and accurate．It can be used for the quality control of Zhengqifuzheng Granules．

Zhengqifuzheng Granules;stachydrine hydrochloride;HPLC－CAD

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)05－0055－03

梁慧敏（1981－），大學(xué)本科，主管藥師，主要從事藥品檢驗(yàn)工作，（電話）0774－3823896（電子信箱）13637823＠qq．com。

2015－10－14；

2015－11－20)