姜旭東

（山東省煙臺市牟平區(qū)畜牧獸醫(yī)工作站，山東 煙臺 264100）

牛副結(jié)核病的流行和診療措施

姜旭東

（山東省煙臺市牟平區(qū)畜牧獸醫(yī)工作站，山東 煙臺 264100）

副結(jié)核病，又叫副結(jié)核性腸炎，是由分支桿菌屬中的副結(jié)核分支桿菌引起的反芻動物（主要是牛）的一種慢性消耗性傳染病。牛副結(jié)核病以頑固性腹瀉、進行性消瘦、腸黏膜增厚并形成皺襞為特征。

本病1895年首次被發(fā)現(xiàn)，1906年人工感染犢牛成功，1961年獲得本菌的培養(yǎng)物。目前本病已廣泛流行于世界各國，特別是奶牛飼養(yǎng)量較大的一些國家均有發(fā)生。據(jù)報道，自1972年以來，我國一些地區(qū)的奶牛牧場、種公牛場等均有本病發(fā)生，嚴重危害養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展，且有日漸增多的趨勢。

1 流行特點

本病的病原體是副結(jié)核桿菌。本菌主要存在于病畜體內(nèi)腸系膜淋巴結(jié)和腸黏膜。從公牛的性腺也曾發(fā)現(xiàn)過牛副結(jié)核桿菌。當母牛患副結(jié)核病時，子宮感染率達50%以上；有人從有臨床癥狀的牛的胎兒組織（肝、脾、腎、小腸）分離到了副結(jié)核桿菌，從而證實了本病可通過母牛子宮傳染給犢牛。由于病原菌對外界的抵抗力較強，因此可以存活數(shù)月。副結(jié)核桿菌主要導(dǎo)致奶牛發(fā)病，其中犢牛最易感，除牛外其他動物也可罹患。本病的主要傳染源是病?；驇Ь鷦游?。病原菌污染飲水、草料等，通過消化道而侵入健康牛體內(nèi)。病?？蓮募S便排出大量病原菌。一部分病例病菌經(jīng)血流或牛乳、尿液排出體外。試驗證明，皮下或靜脈接種也可使犢牛感染。

雖然幼齡牛對本病最為易感，但潛伏期甚長，可達半年到1年，甚至更長。一般在2～5歲時才表現(xiàn)出臨床癥狀，特別是在母牛開始懷孕、分娩以及泌乳時，易于出現(xiàn)臨床癥狀。高產(chǎn)奶牛的癥狀較低產(chǎn)牛為嚴重；公牛和閹牛比母牛發(fā)病少。飼料中缺乏無機鹽、礦物質(zhì)，可促進本病的發(fā)展。此外，品種不同對本病的易感性也有明顯的差異。

2 臨床癥狀

本病的潛伏期較長，一般為6個月、1年以上或更長些，在2～5歲時才表現(xiàn)臨床癥狀。體溫常無變化。食欲起初正常，精神良好，逐漸食欲減退，漸進消瘦，眼窩下陷，精神萎靡，經(jīng)常倒臥。泌乳量逐漸減少，最后停止。副結(jié)核桿菌到達腸道后，侵入腸黏膜和黏膜下層，在其中繁殖，引起腸道的損害，最初在小腸，以后逐漸蔓延到大腸。腸黏膜及黏膜下層產(chǎn)生大量上皮樣細胞逐漸變厚，形成皺襞。同時腸黏膜腺體受到壓迫而導(dǎo)致萎縮，影響消化、吸收等正常活動。早期癥狀為間斷性腹瀉，以后逐漸變?yōu)榻?jīng)常性的反復(fù)出現(xiàn)的頑固性拉稀。排泄物稀薄、惡臭、有氣泡，混有黏液和血液凝塊。當排便呈水樣時，可出現(xiàn)皮膚粗糙，被毛粗亂，下頜及垂皮可見水腫等癥狀。腹瀉有時可暫時停止，排泄物恢復(fù)常態(tài)，體重有所增加，但再度發(fā)生嚴重腹瀉而不止時，一般經(jīng)3～4個月因機體過度衰竭而亡。感染本病的牛群每年死亡率可達10%以上。對病牛血象研究表明，患本病后血紅蛋白減少，血鈣和血鎂下降。若有牛在數(shù)月至1年以上呈慢性下痢或呈反復(fù)而頑固性下痢，機體漸進性消瘦時，則應(yīng)首先懷疑本病。

3 病理學診斷

3.1 病理剖檢變化尸體外觀表現(xiàn)營養(yǎng)不良、極度消瘦。主要病變部位在消化道和腸系膜淋巴結(jié)上。消化道的損害常限于空腸、回腸和結(jié)腸前段，回腸損害尤為明顯。腸腔內(nèi)容物甚少。有時腸外表無大變化，但淋巴結(jié)腫大，腸壁常增厚，漿膜下淋巴管和腸系膜淋巴管常腫大，呈索狀。漿膜和腸系膜都有顯著水腫。黏膜色黃白或灰黃色，皺褶突起處常呈充血狀態(tài)，黏膜上面緊附有黏液，稠而混濁，但無結(jié)節(jié)和壞死，也無潰瘍。腸黏膜常增厚3～20倍，并產(chǎn)生硬而彎曲的皺襞。腸系膜淋巴結(jié)腫大而變軟，切面濕潤，上有黃白色病灶，但無干酪樣病變。

3.2 病理組織學變化腸黏膜固有層和腸黏膜下層有大量的淋巴細胞和上皮樣細胞增生。小腸病變輕時，增生的主要是淋巴細胞，有少量的上皮樣細胞，主要出現(xiàn)在黏膜固有層。嚴重病例，增生更為廣泛，除黏膜固有層以外，在黏膜下層也有厚厚的一層增生的細胞，其中以上皮樣細胞占大多數(shù)，僅在黏膜肌層有薄薄的一層淋巴細胞。上皮樣細胞排列非常緊密，偶爾可見巨噬細胞。此外，在黏膜肌層和漿膜層血管的外圍，也有數(shù)量不等的淋巴細胞和上皮樣細胞浸潤。

腸絨毛變粗呈棒狀，或消失。腸腺受壓萎縮、變性或消失。在黏膜下層，水腫十分明顯。黏膜肌層同樣水腫，實質(zhì)結(jié)構(gòu)疏松，由于水腫液的積聚呈現(xiàn)大量空隙。大腸變化和小腸基本相仿。病情較輕者，小腸黏膜固有層出現(xiàn)較明顯的增生反應(yīng)。增生細胞以淋巴細胞為主。大腸的黏膜固有層增生反應(yīng)不及小腸明顯，并以漿細胞增生占優(yōu)勢。重癥病例，腸黏膜固有層增生反應(yīng)不如黏膜下層明顯，增生細胞以上皮樣細胞為主。腸壁上的淋巴濾泡，仍保持固有結(jié)構(gòu)，細胞成分仍以淋巴細胞為主，中間混有極少數(shù)吞噬病菌的上皮樣細胞。腸系膜淋巴結(jié)、淋巴竇內(nèi)上皮樣細胞大量增生，有時出現(xiàn)少量巨噬細胞。在淋巴結(jié)輸入淋巴管一側(cè)的皮質(zhì)竇和髓質(zhì)竇內(nèi)上皮樣細胞較多，并吞噬有病原菌。還可見到壞死和鈣化病灶。其他器官特別是肝臟中常有由巨噬細胞構(gòu)成的小肉芽腫，有時有巨噬細胞。

4 病原學診斷

4.1 病料采集和處理取病腸段或回盲瓣、病腸淋巴結(jié)，將腸段剪開，用自來水沖洗，再用刀刮取黏膜約10～20g。腸淋巴結(jié)可先除去周邊脂肪，切取10～20g并剪碎。刮取和剪碎的組織放入消毒的帶銅紗網(wǎng)的乳缽中研磨，邊磨邊加0.5%胰酶水溶液40mL，使成混懸液，用1mo1/L NaOH溶液調(diào)pH為9.0，放在燒杯中，在磁力攪拌器上于室溫下攪拌1h進行消化。然后以5000轉(zhuǎn)/min離心30min，去上清，沉淀物加20mL生理鹽水，再加等量10%草酸和0.02%孔雀綠水溶液，置37℃水浴中30min，不時搖振。再離心（5000轉(zhuǎn)/min）30min，去上清，取沉淀物供分離培養(yǎng)及制成抹片，待抗酸性染色后鏡檢用。取糞便樣品（選帶黏膜及血塊的）2g，加生理鹽水40mL，搖振使之充分散開。取糞水4.5mL加7.5%氯化十六烷基吡啶0.5mL，使藥液濃度為0.75%，4℃下過夜。取出棄上清，不用離心，取沉淀物供培養(yǎng)和鏡檢用。

4.2 細菌學檢查對可疑病牛于生前取直腸刮取物（于肛門內(nèi)30cm左右處）或取經(jīng)上述方法處理的糞便以及病料的沉淀物制成涂片標本，經(jīng)抗酸性染色后在顯微鏡下進行檢查。鏡下可見到成叢、成團排列的特征抗酸性菌具有診斷意義。

4.3 分離培養(yǎng)本菌初代培養(yǎng)較為困難。在含有蛋白質(zhì)的4%甘油及10%結(jié)核分支桿菌素或已死的結(jié)核分支桿菌、草分支桿菌浸液等培養(yǎng)基有利于初代培養(yǎng)生長。初代分離培養(yǎng)時，可采用改良Dubos氏培養(yǎng)基。菌種傳代可用Wastou Reid（W.R）培養(yǎng)基和改良Herro1d培養(yǎng)基。分離培養(yǎng)時，將處理過的病料接種于改良的Dubos培養(yǎng)基上，每份病料接種3～5管，接種后，先將試管斜放于37℃恒溫箱內(nèi)數(shù)日，然后再立起來進行培養(yǎng)。每周觀察發(fā)育情況1～2次。初代分離培養(yǎng)于培養(yǎng)后5～6周可長出細小灰白色菌落。鉤取菌落做涂片鏡檢，可見成叢、成團排列的抗酸性染色陽性（紅色）短桿菌。

4.4 分離菌的鑒別可將初代分離的培養(yǎng)物，接種于含有草分支桿菌素的改良Dubos培養(yǎng)基一管，另設(shè)不含草分支桿菌素的一管為對照，培養(yǎng)3～4周，如前者生長，后者不生長時，則初步認為是副結(jié)核分支桿菌（少數(shù)菌株也有例外，即在后者也能輕度生長）。為進一步鑒別，可試做生長溫度鑒別試驗，即在W.R馬鈴薯培養(yǎng)基上副結(jié)核分支桿菌于43～44℃下可生長，而牛分支桿菌及結(jié)核分支桿菌不生長；在谷氨酸鈉葡萄糖瓊脂上副結(jié)核分支桿菌不生長，但在牛體內(nèi)有時可分出的胞內(nèi)分支桿菌可以生長。

5 預(yù)防措施

堅持自繁自養(yǎng)。若必須引進外場牛，則引入前應(yīng)作必要的流行病學調(diào)查及牛體檢查，確認健康后再混群飼養(yǎng)。注意合理搭配日糧，尤其是在犢牛及育成牛階段，更應(yīng)合理飼喂，保證牛只健康，提高抗病力。一旦牛場中出現(xiàn)消瘦、頑固性腹瀉病牛，應(yīng)進行實驗室檢查。確診的陽性牛，應(yīng)撲殺。對病牛的廄舍、用具、墊草及糞尿殘留物應(yīng)進行徹底消毒，防止病原體的擴散。

6 治療方法

本病尚無特效治療藥物，一般采用對癥療法。若腹瀉嚴重，可補充葡萄糖生理鹽水，2000～3000mL/次，靜脈注射。止瀉可內(nèi)服鞣酸、次硝酸鉍等，可使病牛有好轉(zhuǎn)趨向。為防治中毒，可用5%碳酸氫鈉液500～1000mL或40%烏洛托品50～100mL，靜注。病牛應(yīng)單獨飼養(yǎng)，給以優(yōu)質(zhì)干草，并適當增加骨粉，以改善體況，緩解腹瀉。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．05.039