徐紅超　陶靜莉　許成杰　方　琦

廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)外科　廣州　524001

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MGMT VEGF在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義分析

徐紅超陶靜莉許成杰方琦

廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)外科廣州524001

【摘要】目的分析MGMT、VEGF在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義。方法270例腦膠質(zhì)瘤患者為腫瘤組，行顱腦外傷手術(shù)治療的250例患者為對(duì)照組。取腫瘤組患者腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本及對(duì)照組正常腦組織標(biāo)本，檢測(cè)MGMT、VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率。同時(shí)，統(tǒng)計(jì)并對(duì)比分析腫瘤組患者不同病理分級(jí)、腫瘤類型生存質(zhì)量及預(yù)后下MGMT和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率。結(jié)果腫瘤組患者M(jìn)GMT和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率依次為68.52%、77.78%，對(duì)照組依次為12%、28%，2組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。腫瘤組患者在MGMT和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率上，高級(jí)別膠質(zhì)瘤組患者高于低級(jí)別膠質(zhì)瘤組(P<0.05)；KPS≤70分組患者高于KPS≤70分組(P<0.05)；術(shù)后12個(gè)月內(nèi)死亡組患者高于術(shù)后12個(gè)月后存活組(P<0.05)。而不同類型膠質(zhì)瘤組患者中，MGMT和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論MGMT、VEGF的表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可作為腦膠質(zhì)瘤治療效果評(píng)價(jià)、病情判斷及生存質(zhì)量、預(yù)后評(píng)估的重要參考依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】腦膠質(zhì)瘤；MGMT；VEGF

腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤類型，占40%～60%，因具有侵襲性生長(zhǎng)、無(wú)控性增值等特點(diǎn)而成為人類腫瘤死亡的重要原因[1]。近年來(lái)，盡管在手術(shù)聯(lián)合放化療等綜合治療措施下，腦膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后仍未得到明顯的改善。而隨著臨床腫瘤醫(yī)學(xué)對(duì)腫瘤疾病發(fā)病機(jī)制研究的不斷深入以及分子生物學(xué)研究的顯著進(jìn)展，一些新型細(xì)胞因子及生物標(biāo)志物的不斷研發(fā)，為腫瘤疾病的治療及預(yù)后評(píng)估提供了新的參考依據(jù)。據(jù)相關(guān)研究報(bào)道指出，DNA修復(fù)酶——O(6)-甲基鳥(niǎo)嘌呤- DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)與膠質(zhì)瘤的發(fā)生密切相關(guān)，且在膠質(zhì)瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)是造成腫瘤耐藥性升高的重要原因[2]。因此，該指標(biāo)可能是預(yù)測(cè)腫瘤治療效果及患者預(yù)后的重要參考指標(biāo)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)則在腫瘤疾病的發(fā)生、發(fā)展中機(jī)制中發(fā)揮了重要的參與作用，同樣是評(píng)估腫瘤患者病情及預(yù)后的有效指標(biāo)。本文主要探討MGMT、VEGF在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義，以期為該病的治療、病情及預(yù)后評(píng)估提供參考依據(jù)。

1資料和方法

1.1臨床資料選擇我院2010-01-2013-10收治的270例腦膠質(zhì)瘤患者為腫瘤組，所有患者均經(jīng)手術(shù)病理確診。男160例，女110例；年齡30～75歲，平均(53.5±6.2)歲；WHO病理分級(jí)Ⅰ級(jí)30例，Ⅱ級(jí)80例，Ⅲ級(jí)100例，Ⅳ級(jí)60例；腫瘤類型：星形細(xì)胞瘤110例，少枝膠質(zhì)細(xì)胞瘤80例，少枝星形細(xì)胞瘤50例，多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤30例。另選擇于我院行顱腦外傷手術(shù)治療的250例患者為對(duì)照組，男150例，女100例；年齡30～75歲，平均(54.7±5.8)歲。所有研究對(duì)象均自愿簽署倫理學(xué)知情同意書(shū)。2組性別、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2方法(1)主要儀器及試劑：主要儀器：石蠟切片機(jī)，石蠟自動(dòng)脫水機(jī)，光學(xué)顯微鏡及其成像系統(tǒng)，烤箱，孵箱；主要試劑：濃縮型鼠抗人MGMT單克隆抗體，兔抗人VEGF單克隆抗體，通用型SP廣譜試劑盒，PBS緩沖溶液，DAB顯色試劑盒。(2)標(biāo)本采集：腫瘤組患者組織標(biāo)本為手術(shù)切除的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本，對(duì)照組患者組織標(biāo)本為顱腦外傷手術(shù)切除的正常腦組織標(biāo)本。(3)MGMT、VEGF表達(dá)檢測(cè)：MGMT、VEGF表達(dá)的檢測(cè)采用免疫組織化學(xué)染色法。首先，腫瘤組患者腫瘤組織和對(duì)照組正常腦組織切除后，采用10%中性甲醛組織將標(biāo)本用固定，常規(guī)石蠟包埋。4 μm切片連續(xù)5張，烘烤、脫蠟、脫水后，放置于枸櫞酸鹽緩沖液中予以組織抗原修復(fù)，PBS沖洗3次。滴加一抗，孵育過(guò)夜；再滴加二抗，3%雙氧水室溫孵育。再次予以PBS沖洗3次，每張切片予以DAB顯色液滴加，蘇木精對(duì)比復(fù)染，酒精脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)脂封固。用PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照，采用結(jié)腸癌的組織切片作陽(yáng)性對(duì)照。

1.3免疫組化染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)MGMT以光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞漿或細(xì)胞核呈棕褐色為陽(yáng)性細(xì)胞判斷標(biāo)準(zhǔn)，VEGF以細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞判斷標(biāo)準(zhǔn)。參照Krajewska法進(jìn)行半定量分析：高倍鏡(×400)下隨機(jī)抽取5個(gè)視野進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率，并予以分級(jí)：0級(jí)：比率<5%；1級(jí)：比率5%～25%；2級(jí)：比率25%～50%；3級(jí)：比率50%～75%；4級(jí)：比率>75%。然后，染色強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：陰性：0級(jí)；1級(jí)：弱陽(yáng)性；2級(jí)：陽(yáng)性；3級(jí)：強(qiáng)陽(yáng)性。最后，以陽(yáng)性細(xì)胞率級(jí)別×軟色強(qiáng)度級(jí)別/2≥0.5判斷MGMT及VEGF為陽(yáng)性表達(dá)[3]。

1.4觀察指標(biāo)

1.4.12組患者腦組織標(biāo)本MGMT和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率：根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，統(tǒng)計(jì)2組患者腦組織標(biāo)本MGMT和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率。

1.4.2腫瘤組患者不同病理分級(jí)及腫瘤類型下MGMT和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率：根據(jù)腫瘤組270例患者的WHO病理分級(jí)及腫瘤類型，統(tǒng)計(jì)不同病理分級(jí)及腫瘤類型下MGMT和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率。

1.4.3腫瘤組患者不同生存質(zhì)量及預(yù)后下MGMT和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率：術(shù)后觀察隨訪12個(gè)月，采用生存質(zhì)量評(píng)分量表(KPS)進(jìn)行評(píng)分。KPS>70分，提示患者可正常生活；KPS≤70分，提示患者缺乏正常生活能力。同時(shí)，觀察術(shù)后12個(gè)月后患者的預(yù)后情況。統(tǒng)計(jì)不同生存質(zhì)量及預(yù)后下MGMT和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)檢測(cè)數(shù)據(jù)以率的形式表示，2組間比較采用用χ2檢驗(yàn)，多組間比較采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.12組患者腦組織標(biāo)本MGMT和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率比較腫瘤組患者M(jìn)GMT和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率依次為68.52%(185例)、77.78%(210例)，對(duì)照組依次為12%(30例)、28%(70例)，2組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2腫瘤組患者不同病理分級(jí)、腫瘤類型生存質(zhì)量及預(yù)后下MGMT和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率比較表1可以看出，在MGMT和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率上，高級(jí)別膠質(zhì)瘤組患者高于低級(jí)別膠質(zhì)瘤組(P<0.05)；KPS≤70分組患者高于KPS≤70分組(P<0.05)；術(shù)后12個(gè)月內(nèi)死亡組患者高于術(shù)后12個(gè)月后存活組(P<0.05)。而不同類型膠質(zhì)瘤組患者中，MGMT和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1　腫瘤組患者不同病理分級(jí)、腫瘤類型生存質(zhì)量及

3討論

3.1MGMT在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義目前，烷化劑類化療藥物是腦膠質(zhì)瘤臨床治療的有效藥物之一，尤其是替莫唑胺，作為一種新型烷化劑，能夠在體內(nèi)經(jīng)代謝與DNA鳥(niǎo)嘌呤形成六氧-甲基鳥(niǎo)嘌呤(O6-MeG)，造成DNA蓄積性損傷，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡而發(fā)揮抗腫瘤作用，為NCCN指南所推薦的治療膠質(zhì)瘤的一線化療藥物[4]。而MGMT為一種獨(dú)特的DNA修復(fù)酶，在DNA的損傷修復(fù)中發(fā)揮著獨(dú)特的作用。據(jù)相關(guān)臨床研究報(bào)道證實(shí)，因MGMT在腫瘤細(xì)胞的中過(guò)表達(dá)，可將細(xì)胞DNA上的O6-MeG移去，對(duì)腫瘤細(xì)胞起到保護(hù)作用而免受烷化劑的損害，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)替莫唑胺產(chǎn)生耐藥，成為制約膠質(zhì)瘤化療治療效果的重要因素[5]。本研究中，腫瘤組患者M(jìn)GMT的陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[6]。提示MGMT可能在腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生機(jī)制中發(fā)揮了重要的作用，而這一具體作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。同時(shí)，本研究結(jié)果顯示，在MGMT的陽(yáng)性表達(dá)率上，高級(jí)別膠質(zhì)瘤組患者高于低級(jí)別膠質(zhì)瘤組，KPS≤70分組患者高于KPS≤70分組，術(shù)后12個(gè)月內(nèi)死亡組患者高于術(shù)后12個(gè)月后存活組。提示MGMT的陽(yáng)性表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤的病理分級(jí)、生存質(zhì)量及預(yù)后密切相關(guān)，可作為患者臨床治療效果評(píng)價(jià)、病情判斷及預(yù)后評(píng)估的重要參考依據(jù)[7]。

3.2VEGF在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義VEGF作為最重要的血管生長(zhǎng)刺激因子，通過(guò)增加微血管通透性，能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，進(jìn)而為腫瘤組織的生長(zhǎng)提供養(yǎng)分，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要的促進(jìn)作用[8]。本研究中，腫瘤組患者VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組，與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致[9]。同時(shí)，在VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率上，高級(jí)別膠質(zhì)瘤組患者高于低級(jí)別膠質(zhì)瘤組，KPS≤70分組患者高于KPS≤70分組，術(shù)后12個(gè)月內(nèi)死亡組患者高于術(shù)后12個(gè)月后存活組。表明VEGF的表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)，VEGF的高表達(dá)反映了腦膠質(zhì)瘤不良的生物學(xué)行為，陽(yáng)性表達(dá)率越高，提示腦膠質(zhì)瘤侵襲性強(qiáng)、破壞性大，患者病情越嚴(yán)重，預(yù)后越差，可為患者病情的判斷及預(yù)后的評(píng)估提供指導(dǎo)意義。

綜上，MGMT、VEGF的表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可作為腦膠質(zhì)瘤治療效果評(píng)價(jià)、病情判斷及生存質(zhì)量、預(yù)后評(píng)估的重要參考依據(jù)。

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(收稿2015-03-12)

【中圖分類號(hào)】R739.4

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1673-5110(2016)02-0041-03