王超奇　侯建全　歐陽(yáng)駿　袁和興

(蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院，江蘇　蘇州　215006)

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蛋白P27、Survivin和骨橋蛋白在前列腺癌組織中的表達(dá)和意義

王超奇侯建全歐陽(yáng)駿袁和興

(蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院，江蘇蘇州215006)

〔摘要〕目的探討蛋白P27、Survivin和骨橋蛋白(OPN)在前列腺癌(PCa)組織中的表達(dá)及意義。方法采用免疫組織化技術(shù)對(duì)PCa和癌旁組織標(biāo)本中的蛋白P27、Survivin和OPN進(jìn)行分析。結(jié)果80例PCa組織中，蛋白P27、Survivin、OPN陽(yáng)性表達(dá)率與癌旁組織，差異顯著(P=0.015)；P27表達(dá)與PCa病理分期(P=0.026)、臨床分期(P=0.037)和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.033)有關(guān)，；Survivin表達(dá)與PCa病理分期(P=0.041)、臨床分期(P=0.039)和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.031)有關(guān)，OPN表達(dá)與PCa病理分期(P=0.023)、臨床分期(P=0.034)和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.027)有關(guān)；P27和Survivin，P27和OPN在PCa組織中表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.001)。結(jié)論臨床中聯(lián)合檢測(cè)蛋白P27、Survivin和OPN為前列腺癌的防治和治療提供一種治療策略。

〔關(guān)鍵詞〕前列腺癌；蛋白P27；蛋白Survivin；骨橋蛋白(OPN)

第一作者：王超奇(1978-)，男，主治醫(yī)師，博士在讀，主要從事泌尿系腫瘤基礎(chǔ)與臨床研究。

美國(guó)一家科研機(jī)構(gòu)在對(duì)一些老年男性患者(50周歲以上)死亡的尸體解剖中得出，前列腺癌(PCa)的患病率為10%～45%〔1〕，患者的年齡越大，發(fā)病概率就越高；其中，80周歲以上的老年男性有一大部分存在著PCa，在全球約有26萬(wàn)人每年因?yàn)檫@種腫瘤而喪生。PCa在男性患者全身系統(tǒng)腫瘤中其死亡率達(dá)到第2位，與肺部惡性腫瘤幾乎等同〔2〕。近來(lái)隨著我們生活環(huán)境和飲食結(jié)構(gòu)的變化，一些高危因素的增加，PCa的發(fā)病率和死亡率呈逐年上升趨勢(shì)，與西方國(guó)家的PCa患病率逐步接近。本文探討蛋白P27、Survivin和骨橋蛋白(OPN)在PCa組織的表達(dá)情況和三者之間的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料收集蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院2007年9月至2012年2月泌尿外科采取根治手術(shù)切除PCa組織標(biāo)本共計(jì)80例，病人手術(shù)前未接受其他方式治療，年齡55～85歲，中位年齡73歲。腫瘤組織采取2003年WHO標(biāo)準(zhǔn)：27例高分化PCa，53例中、低分化PCa。臨床分期采用Whitmore法A期28例、B期15例、C期27例、D期10例，同時(shí)相應(yīng)收集80例PCa患者癌旁組織為對(duì)照組，其組織取自腫瘤切線遠(yuǎn)離腫瘤組織2 cm。

1.2試劑來(lái)源P27抗體為美國(guó)Santa Cruz Biotechnology公司產(chǎn)品，抗Survivin 兔抗人北京中杉生物技術(shù)有限公司，骨橋蛋白OPN一抗購(gòu)自Chemicon公司，SP試劑盒為美國(guó)Zymed公司產(chǎn)品，TRizol購(gòu)自Invitrogen公司，RT-PCR 試劑盒購(gòu)自上海中生公司。

1.3免疫組化方法選用Zymed公司S-P試劑盒，采用免疫組化 SP法操作，EnVision 染色，按照說(shuō)明書進(jìn)行如下操作。①切片脫蠟水化，續(xù)切片的制作；②抗原熱修復(fù)處理，入Citrate 緩沖液(0.01 mol/L，pH6.0)，微波(MW)中火煮沸10 min；③蒸餾水沖洗后，入30 mol/L 過(guò)氧化氫5 min；④蒸餾水沖洗后，再經(jīng)TBS緩沖液洗，加入一抗體 P27、OPN孵育 30 min；⑤TBS 緩沖液沖洗3次，每次 2 min加入 EnVision 孵育 30 min；⑥TBS液沖洗 3 次，每次 2 min，加 DAB 顯色；⑦蒸餾水沖洗后，蘇木素復(fù)染，TBS代替一抗作陰性對(duì)照，以已知陽(yáng)性組織作陽(yáng)性對(duì)照。

1.4蛋白P27、Survivin和OPN組織表達(dá)對(duì)蛋白P27、Survivin和OPN在PCa和癌旁組織的表達(dá)進(jìn)行測(cè)定，按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行試驗(yàn)操作，腫瘤組織細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色或棕褐色為蛋白P27、Survivin和OPN陽(yáng)性表達(dá)。參考文獻(xiàn)〔3〕：0分表示為不著色，1分表示為淡黃色，2分表示為黃色，3分表示為棕褐色；顯色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞的百分率<15%表示為0分，15%～25%表示為1分，25%～55%表示為2分，>55%表示為3分，再把每一張切片平均著色程度評(píng)分與平均著色細(xì)胞百分率評(píng)分各自相乘為其最后得分：≤1分采用(-)表示為陰性，3～4分采用(+)表示為弱陽(yáng)性，5～7分采用()表示為陽(yáng)性，>7分采用()表示為強(qiáng)陽(yáng)性〔4〕，其中一個(gè)“+”號(hào)至“”號(hào)都有臨床意義。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS19.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和Spearman相關(guān)系數(shù)分析。

2結(jié)果

2.1蛋白P27，Survivin和OPN在PCa組織和癌旁組織陽(yáng)性表達(dá)情況80例PCa組織中，蛋白P27陽(yáng)性表達(dá)率為46.2%(37/80)，癌旁組織的陽(yáng)性表達(dá)率為86.3%(69/80)，差異顯著(P=0.015)；Survivin陽(yáng)性表達(dá)率為66.3%(53/80)，癌旁組織為0.0%(0/80)，差異顯著(P=0.000)。OPN陽(yáng)性表達(dá)率為76.3%(61/80)，癌旁組織為0.0%(0/80)，差異顯著(P=0.000)，見圖1。P27表達(dá)與PCa病理分期(P=0.026)、臨床分期(P=0.037)和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.033)有關(guān)；Survivin表達(dá)與PCa病理分期(P=0.041)、臨床分期(P=0.039)和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.031)有關(guān)，OPN表達(dá)與PCa病理分期(P=0.023)、臨床分期(P=0.034)和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.027)有關(guān)，見表 1。

2.2蛋白P27和Survivin，P27和OPN在PCa組織的相關(guān)性Spearman相關(guān)系數(shù)分析顯示P27與Survivin、P27與OPN表達(dá)顯負(fù)相關(guān)(r=-0.143,r=-0.185,P<0.001)。

圖1　P27、Survivin及OPN在PCa組織中的陽(yáng)性表達(dá)(DAB，×200)

組別nP27陽(yáng)性P值χ2值Survivin陽(yáng)性P值χ2值OPN陽(yáng)性P值χ2值病理分期 高分化27200.0264.941270.0414.573260.0235.583 中和低分化53172635臨床分期 A期28160.0378.387110.0399.465180.0349.447 B期1571515 C期27101420 D期104138淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況 無(wú)35100.0334.540290.0315.927240.0278.943 有45272437

3討論

本世紀(jì)初由科學(xué)家Conti等〔5〕發(fā)現(xiàn)了一種物質(zhì)，它的主要功能就是調(diào)控腫瘤細(xì)胞周期同時(shí)它能抑制腫瘤細(xì)胞的分裂，這物質(zhì)就是蛋白P27，這種因子主要對(duì)細(xì)胞周期起到負(fù)性調(diào)節(jié)的作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞外負(fù)性殖信號(hào)增強(qiáng)，再向細(xì)胞內(nèi)信息傳遞，抑癌基因的一種，細(xì)胞的增殖能力通過(guò)其高低表達(dá)反應(yīng)，如果某個(gè)時(shí)期機(jī)體細(xì)胞被破壞的信息所影響，蛋白P27在這時(shí)候表達(dá)水平就表現(xiàn)為下降趨勢(shì)，細(xì)胞周期的轉(zhuǎn)換得以完成，組織內(nèi)沒(méi)有其他方式去阻止腫瘤組織細(xì)胞進(jìn)行增殖、分裂，最后到惡性病變的產(chǎn)生。PCa組織中的蛋白P27的基因定位于12p12～13上。細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的活性被蛋白P27所抑制，在G1期細(xì)胞就會(huì)停滯增殖，使惡性腫瘤組織的增殖被停止，進(jìn)而進(jìn)入S期阻斷，細(xì)胞增殖被抑制，這樣就給機(jī)體細(xì)胞一定的時(shí)間去修復(fù)損傷的DNA或者DNA復(fù)制中產(chǎn)生的錯(cuò)誤。細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶活性就被抑制時(shí)，蛋白P27表達(dá)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，使組織細(xì)胞能夠順利地完成細(xì)胞周期期的轉(zhuǎn)化，加速機(jī)體細(xì)胞增殖，使機(jī)體惡性組織增殖，而Survivin蛋白是20世紀(jì)初由Ambrosini等〔6〕在人類基因庫(kù)的雜交篩選中用效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體-1(EPR-1)cDNA分離出來(lái)的，Survivin蛋白是凋亡抑制蛋白家族新的一員。到目前為止人類找到的最強(qiáng)的凋亡抑制因子是蛋白Survivin，蛋白Survivin僅在胚胎和腫瘤組織中有它的表達(dá)，胸腺組織、分泌期子宮、睪丸器官除外，在正常成人分化組織中Survivin蛋白不能被發(fā)現(xiàn)。在腫瘤組織中正常的細(xì)胞凋亡過(guò)程的能夠被Survivin蛋白抑制，在腫瘤細(xì)胞中Survivin蛋白的表達(dá)越高，癌細(xì)胞凋亡被抑制的能力也就隨之增強(qiáng)，腫瘤侵襲性隨之加強(qiáng)，臨近組織容易被惡性細(xì)胞侵及，最后腫瘤轉(zhuǎn)移，病人的生存周期就會(huì)減少，即病人癌組織中的Survivin蛋白的高陽(yáng)性表達(dá)，則預(yù)示患者預(yù)后不佳，惡性細(xì)胞凋亡能力被Survivin 蛋白抑制，和前列腺癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有一定的聯(lián)系〔7〕。腫瘤標(biāo)志物Survivin有一定潛在的臨床診斷價(jià)值，而OPN是近幾年來(lái)醫(yī)學(xué)專家來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種蛋白，也就是我們所說(shuō)的分泌型磷酸化糖蛋白，參與人體各種代謝，如：骨質(zhì)代謝、機(jī)體免疫應(yīng)答，血管反應(yīng)等過(guò)程〔8~10〕。近幾年發(fā)現(xiàn)，OPN的表達(dá)與惡性腫瘤的生長(zhǎng)機(jī)制與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移都有一定聯(lián)系〔11〕。對(duì)于患者患有晚期的前列腺癌，臨床醫(yī)師采取內(nèi)分泌治療，這樣癌組織大小趨于減小，但如果患者所患腫瘤不是內(nèi)分泌依賴型的，腫瘤在晚期出現(xiàn)臨床轉(zhuǎn)移，擴(kuò)散到遠(yuǎn)處，前列腺癌晚期最經(jīng)常的轉(zhuǎn)移的組織是骨組織，OPN對(duì)腫瘤細(xì)胞的理化性質(zhì)具有一定的影響。OPN不一定局限在骨骼組織中表達(dá)。蛋白OPN是一種非膠原性骨質(zhì)蛋白，可以通過(guò)CD44整合及細(xì)胞的趨化作用、移動(dòng)和黏著，這樣對(duì)抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡和惡性組織細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)都產(chǎn)生一定作用，人體許多腫瘤臨床轉(zhuǎn)移機(jī)制OPN都發(fā)揮一定作用〔12〕。本文結(jié)果說(shuō)明在PCa組織中蛋白P27、Survivin和OPN可能起到相互的協(xié)同作用，但對(duì)于三者是否參與信號(hào)通路和免疫調(diào)節(jié)等很多方面尚不十分清楚，今后還需進(jìn)一步研究。

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〔2015-11-07修回〕

(編輯苑云杰/曹夢(mèng)園)

通訊作者：侯建全(1960-)，男，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，主要從事泌尿系腫瘤基礎(chǔ)與臨床研究。

基金項(xiàng)目：內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.2015M30877)

〔中圖分類號(hào)〕R737.25

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)04-0806-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.04.016