阮鋒 袁冰 劉平李賀偉 韋卓

紅花注射液關(guān)節(jié)內(nèi)注射預(yù)防膝關(guān)節(jié)術(shù)后粘連的實驗研究*

阮鋒 袁冰 劉平*李賀偉 韋卓

目的 探索紅花注射液關(guān)節(jié)內(nèi)注射對預(yù)防膝關(guān)節(jié)術(shù)后粘連的效果，為膝關(guān)節(jié)術(shù)后粘連的臨床治療提供參考。方法 選擇成年健康的雄性日本大耳白兔24只，體重3.5～4.0kg，隨機(jī)分成3組：A組（透明質(zhì)酸鈉對照組）、B（紅花注射液實驗組）組和 C組（鹽水空白對照組），每組8只，所有動物均行右側(cè)膝關(guān)節(jié)滑膜切除術(shù)，術(shù)后右下肢管型石膏伸直位固定4周，分組予生理鹽水、透明質(zhì)酸鈉、紅花注射液關(guān)節(jié)內(nèi)重復(fù)注射每周1次，每組每只共4次，對每組動物進(jìn)行膝關(guān)節(jié)視覺計分、生物力學(xué)分析、組織學(xué)觀察及膝關(guān)節(jié)滑膜平均膠原含量分析。結(jié)果生物力學(xué)實驗表明A、B組大于C組（＜0.01），A、B組之間無顯著差異（＞0.05）；膝關(guān)節(jié)視覺計分A、B組均于小C組（＜0.01），A、B組之間無顯著差異（＞0.05）；組織學(xué)觀察A、B組均小于C組（＜0.01），A、B組之間無顯著差異（＞0.05）；膝關(guān)節(jié)滑膜平均膠原含量測定 A、B組小于 C組（＜0.01），B組小于 A組（＜0.01）。結(jié)論紅花注射液關(guān)節(jié)內(nèi)注射可很好的防止膝關(guān)節(jié)術(shù)后粘連的發(fā)生，效果與透明質(zhì)酸鈉無顯著差異。

膝關(guān)節(jié)粘連；紅花注射液；透明質(zhì)酸

[Keywors]Joint adhesions;Safflor injection;Hyaluronic acid

膝關(guān)節(jié)手術(shù)后粘連所引發(fā)的關(guān)節(jié)僵硬在骨科發(fā)生率較高，術(shù)后往往因為出血、血腫機(jī)化、瘢痕增生而發(fā)生粘連，術(shù)后患者常因疼痛致使功能鍛煉無法順利開展，為避免粘連的發(fā)生，臨床上普遍以關(guān)節(jié)內(nèi)注射透明質(zhì)酸鈉的方法來防止粘連，且效果明確[1,2]。本次實驗通過對比透明質(zhì)酸鈉，驗證紅花注射液防止膝關(guān)節(jié)術(shù)后粘連的效果。

1 材料與方法

1.1 動物與分組

選擇成年健康雄性日本大耳白兔，實驗地點為梨園醫(yī)院老年病研究所，實驗過程中對動物的處置符合倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。共24只，體重3.5～4.0kg，隨機(jī)分成3組：A組（透明質(zhì)酸鈉對照組）、B（紅花注射液實驗組）組和C組（鹽水空白對照組），每組8只。

1.2 膝關(guān)節(jié)粘連造模

選用化學(xué)純氨基甲酸乙酯作為麻醉劑，注射劑量為 4mL/kg體重，取兔耳緣靜脈內(nèi)注射麻醉，按 Fukui等[3]的造模形式，先將兔右膝范圍內(nèi)10cm備皮，活力碘棉球消毒，再取右膝關(guān)節(jié)內(nèi)緣做一長約3.5cm切口，依層次切開皮膚至關(guān)節(jié)囊，將髕骨翻轉(zhuǎn)至外側(cè)緣，剔除髕上囊后壁和髕下脂肪墊以及前壁滑膜組織，止血后依層次縫合，抽除關(guān)節(jié)腔積血，再將藥物刺注入。

1.3 實驗方法

術(shù)后3組均將膝關(guān)節(jié)用管型石膏伸直位固定，石膏內(nèi)側(cè)開口約2cm×2cm用以后期注藥。后每周注入藥物1次，共4周。藥物注射劑量及品種分別為：透明質(zhì)酸鈉0.4mL（A組）、紅花注射液0.4mL（B組）、生理鹽水0.4mL（C組）。石膏于4周后拆除，麻醉后依次行膝關(guān)節(jié)視覺觀察計分、組織學(xué)觀察、生物力學(xué)分析及膝關(guān)節(jié)滑膜平均膠原含量分析。1.4觀察指標(biāo)

1.4.1 膝關(guān)節(jié)視覺觀察計分

參照 Rothkopf等[4]的標(biāo)準(zhǔn)，將粘連程度定為4級：0級無粘連，計0分；1級有輕度粘連，粘連膜較薄可輕松剝離，計1分；2級中度粘連，粘連膜厚度適中使用一定的力量能夠剝開，計2分；3級重度粘連，粘連膜很厚，無法用手剝離必須手術(shù)切除，計3分。

1.4.2 光鏡下組織學(xué)觀察

取膝關(guān)節(jié)粘連膜。標(biāo)本固定、脫水后，石蠟包埋、切片。HE染色、在400倍光鏡下行組織學(xué)觀察。根據(jù)粘連膜病損程度可分為4級，每級0～3分。0級：粘連膜較完整，無炎性細(xì)胞及水腫，細(xì)胞排列整齊，計0分；Ⅰ級：粘連膜內(nèi)有細(xì)胞增生，組織水腫，計1分；Ⅱ級：粘連膜內(nèi)肉芽組織增生，細(xì)胞呈乳頭狀排列，計2分；Ⅲ級：粘連膜內(nèi)有炎性細(xì)胞，疤痕增生，計3分。

1.4.3 生物力學(xué)分析

參照改良 Clarke-weeknesser檢測法[5]，在恒定伸膝外力作用下測量膝關(guān)節(jié)屈曲角度，將兔右大腿固定，于膝關(guān)節(jié)下10cm綁住右小腿，550g砝碼牽拉關(guān)節(jié)至屈曲，再使用高精度角度測量儀測量膝關(guān)節(jié)屈曲角度，即為關(guān)節(jié)活動度。每個關(guān)節(jié)測3次，取平均值。

1.4.4 膝關(guān)節(jié)滑膜平均膠原含量測定

以上步驟完成后，切取粘連組織，標(biāo)本凍干離析沉淀物，儲存于—20℃冰箱中。取3mg標(biāo)本，參照羥脯氨酸試劑盒說明書方法測量標(biāo)本中羥脯氨酸的含量，依照羥脯氨酸在膠原中的含量約占13.4%，計算膝關(guān)節(jié)滑膜中的膠原含量。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 膝關(guān)節(jié)視覺觀察計分

各組視覺評分見表1。A、B組的關(guān)節(jié)粘連計分均小于C組，說明A、B組滑膜粘連程度較C組輕（＜0.01），而A組和B組之間無明顯差異（＞0.05）。

2.2 組織學(xué)觀察

各組組織學(xué)評分見表1。A、B組的滑膜病變計分均小于C組，說明A、B組滑膜病變程度較C組輕（＜0.01），而A組和B組之間無明顯差異（＞0.05）。

2.3 生物力學(xué)分析

各組生物力學(xué)分析見表1。A、B組的關(guān)節(jié)活動度大于C組，說明A、B組滑膜粘連程度較對照組輕（＜0.01），而A組和B組之間無明顯差異（＞0.05）。

2.4 膝關(guān)節(jié)滑膜平均膠原含量測定

各組滑膜平均膠原含量見表1。A、B組的平均膠原含量小于C組，說明A、B組用藥能夠有效減低滑膜膠原的含量，降低疤痕增生，減輕粘連（＜0.01），而A組和B組之間差異顯著（＜0.05）。

表1 各組膝關(guān)節(jié)視覺觀察計分、組織學(xué)觀察、生物力學(xué)分析及膠原含量測定（n=8）

3 討論

膝關(guān)節(jié)粘連是膝關(guān)節(jié)手術(shù)或外傷后的主要并發(fā)癥之一，其臨床表現(xiàn)為膝關(guān)節(jié)主動及被動伸屈功能障礙。關(guān)節(jié)長期石膏固定，淋巴液及血液循環(huán)障礙，會形成粘連；另外炎性反應(yīng)生成的蛋白酶，也會對關(guān)節(jié)面造成破壞，引起關(guān)節(jié)退行性病變[6]，導(dǎo)致關(guān)節(jié)粘連。膝關(guān)節(jié)松解手術(shù)盡管可以從一定程度上改善關(guān)節(jié)粘連，但術(shù)后可能再次粘連[7]，因此關(guān)節(jié)粘連重在預(yù)防。目前預(yù)防和減輕關(guān)節(jié)粘連的方法很多，如關(guān)節(jié)內(nèi)應(yīng)用皮質(zhì)激素、殼聚糖、FGF-2抗體等[8]。

膝關(guān)節(jié)粘連屬于炎癥反應(yīng)的一種，包括炎性細(xì)胞浸潤、巨噬細(xì)胞游走，成纖維細(xì)胞增生，肉芽組織形成、膠原沉積，最終形成粘連的病理改變。紅花注射液主要有效成分為紅花黃素，具有潰散毒邪、活血化瘀，通經(jīng)疏絡(luò)等作用[9]，以往研究表明，紅花注射液具有減輕炎性反應(yīng)，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，改善微循環(huán)，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞等作用。

本實驗表明，紅花注射液能有效保護(hù)膝關(guān)節(jié)滑膜，抑制病變后期疤痕增生及肉芽組織形成，這些研究結(jié)果同查朱清研究發(fā)現(xiàn)紅花注射液能夠預(yù)防肌腱損傷后肌腱黏黏結(jié)果相似[10]。紅花注射液的抗炎作用[11]可能是其減少滑膜病變計分的原因。炎癥反應(yīng)后期，成纖維細(xì)胞聚集，在PDGF、TGF-的刺激下形成膠原[12]，膠原內(nèi)的羥脯氨酸含量是評估粘連程度的一個重要素，Ozogul等[13]實驗研究中發(fā)現(xiàn)粘連程度分級與組織羥脯氨酸水平是線性正相關(guān)。本研究表明，紅花注射液組的平均膠原含量小于對照組及透明質(zhì)酸鈉組，能夠有效降低組織膠原含量，進(jìn)一步證實了紅花注射液在預(yù)防關(guān)節(jié)粘連中的作用。其原因尚不明確，可能與紅花注射液能夠有效降低腫瘤壞死因子（TNF-）、白介素-8（IL-8）、白介素-6（IL-6）等促炎因子，等急性炎癥的相關(guān)指標(biāo)，減輕局部及全身炎癥反應(yīng)，從而延緩成纖維細(xì)胞的凋亡過程，減少膠原的沉積[14]有關(guān)。另外，紅花注射液能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和分化，在血管再生中產(chǎn)生作用[15]，促進(jìn)受損創(chuàng)面的修復(fù)，從而減少膠原沉積量,減輕粘連。

綜上所述，紅花注射液能減少關(guān)節(jié)腔粘連計分，改善兔膝關(guān)節(jié)粘連的關(guān)節(jié)活動度，有效降低滑膜組織內(nèi)的膠原含量，預(yù)防膝關(guān)節(jié)術(shù)后粘連發(fā)生，改善關(guān)節(jié)粘連的程度，與透明質(zhì)酸鈉具有相似的效果，對術(shù)后膝關(guān)節(jié)的功能恢復(fù)具有積極作用。

[1]郭德全，羊國民.中西醫(yī)結(jié)合治療膝骨關(guān)節(jié)炎[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2014，29（6）:1074-1075.

[2]周建林，鄧爽，方洪松，等.關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射透明質(zhì)酸鈉可以延緩創(chuàng)傷性骨關(guān)節(jié)炎的軟骨退變(英文)[J].中國組織工程研究，2015（33）:5295-5300.

[3]Fukui N,Fukuda A,Kojima K,et al.Suppression of fbrous adhesion by proteo-glycan decorin[J].Orthop Res,2001,19(3):456-462.

[4]D M Rothkopf,S Webb,R M Szabo,et al.An experimental model for the study of canine flexor tendon adhesions[J].Hand Surg Am, 1991,16(4):694-700.

[5]黃崇博，葉勇光，向孝兵，等.舒筋活絡(luò)方對創(chuàng)傷性膝關(guān)節(jié)粘連家兔模型局部組織的影響[J].新中醫(yī)，2010，42(8):133-135.

[6]金鳴，高子淳，王繼峰.羥基紅花黃色素A抑制PAF誘發(fā)的家兔血小板活化的研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2004，27（5）: 32-35.

[7]盧華定，蔡道章，王昆，等.關(guān)節(jié)鏡下粘連松解結(jié)合透明質(zhì)酸鈉注射治療膝關(guān)節(jié)強(qiáng)直[J].中國內(nèi)鏡雜志，2005，11（3）：260-262.

[8]Riccio M,Battiston B,Pajardi G,et al.Efficiency of Hyaloglide in the prevention of the recurrence of adhesions aftertenolysis of flexortendons in zone II:a randomized,controlled,multicentreclinical trial[J].Hand Surg Eur,2010,35(2):130-138.

[9]陳利新，莫衛(wèi)海，卜晗.紅花注射液關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療膝骨性關(guān)節(jié)炎56例[J].新中醫(yī)，2006，38(6):79.

[10]查朱青，程春生，趙治偉，等.紅花注射液預(yù)防屈指肌腱損傷術(shù)后肌腱粘連的臨床觀察[J].安徽醫(yī)學(xué)，2013，34(3):295-297.

[11]隋吉生，吳小濤，徐小彬.紅花注射液對脊髓損傷早期自由基影響的實驗研究[J].中國骨傷，2007，20(2):94-96.

[12]段戡，袁長深，姚弘毅等.丹參注射液關(guān)節(jié)內(nèi)注射預(yù)防關(guān)節(jié)粘連的實驗研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2009，20(7):1722-1723.

[13]OzogulY,Baykal A,Onat R,et al An experimental study of die effect of apmtinin on intestinal adhesion fomation[J].Am J Smg, 1998,175(2):137.

[14]金曉東，張鳴.紅花注射液對兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨組織學(xué)及關(guān)節(jié)滑液PGE2、IL28的影響[J].中國中醫(yī)骨傷科雜志，2009，17（3）: 18-19.

[15]張志華，王肅生，梁剛.紅花注射液對兔小腿骨筋膜間隔綜合征的作用[J].武漢大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2015，36（03）：344-348.

The prophylactic effects of safflor injection of salvia miltiorrhiza on jiont adhesions in rabbit knee joints

Ruan Feng,Yuan Bing,Liu Ping,et al.
Department of Orthopaedic Surgery,Afflilated Liyuan Hospital of TongJi Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan Hubei,430077,China

Objective To explore the intra-articular injections of safflower injection effect on knee joint of postoperative adhesion prevention,provide reference for clinicaltreatment of knee joint of postoperative adhesion.Methods Adult healthy maleJapanesebigear rabbit24,3.5to4.0kgweight,randomly dividedinto3groups:groupA(sodium hyaluronate group)and B (safflower injection group)group and C group (saline blank control group),each group of eight,all animals are on the right side of the knee joint synovial resection,postoperative 4 weeks right leg tube type gypsum was fixed,the group to the physiological saline,sodium hyaluronate,safflower injection intra-articular repeated injection once A week,each group A total of 4 times each knee visual score on each group of animals,biomechanics analysis, histologic observationandkneejointsynovialaveragecollagen content analysis.Results Biomechanicalexperiments showed A and group B than in group C(＜0.01),there was no significant difference between A and B group(＞0.05）; Knee visual points A and B were in small C group(＜0.01),there were no significant difference between A and B group (＞0.05）;HistologicalobservationofAandBgroup werelessthan groupC(＜0.01),there was no significantdifference between A and B group(＞0.05);Knee joint synovial average collagen content determination of A and B is less than C group(＜0.01),group B is less than group A(＜0.01).Conclusion Intra-articular injections of safflower injection can well prevent knee postoperative adhesion,there was no significant difference effect with sodium hyaluronate.

R684

B

10.3969/j.issn.1672-5972.2016.03.002

swgk2015-11-00216

阮鋒（1981-）男，碩士，主治醫(yī)師。研究方向：創(chuàng)傷骨科。

*[通訊作者]劉平（1979-）男，本科，副主任醫(yī)師。研究方向：關(guān)節(jié)、脊柱外科。

2015-11-01）

華中科技大學(xué)自主創(chuàng)新研究基金（NO.2014QN071）

華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院梨園醫(yī)院骨科，湖北武漢430077