葉新星，康欣梅

(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 內(nèi)三科，黑龍江 哈爾濱 150081)

?

·綜 述·

二代測序技術(shù)在乳腺癌分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用及進(jìn)展

葉新星，康欣梅

(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 內(nèi)三科，黑龍江 哈爾濱 150081)

二代測序研究較為全面系統(tǒng)地檢測了乳腺癌基因組，推進(jìn)了對乳腺癌發(fā)生發(fā)展的認(rèn)識。研究發(fā)現(xiàn)了新的驅(qū)動突變，總結(jié)了突變過程及機(jī)制，揭示了乳腺癌的瘤內(nèi)異質(zhì)性，并促進(jìn)了個體化醫(yī)療的進(jìn)展。本文作者綜述二代測序技術(shù)在乳腺癌分子生物學(xué)領(lǐng)域的最新研究成果。

乳腺癌；二代測序；瘤內(nèi)異質(zhì)性；驅(qū)動基因；個體化醫(yī)療；綜述

癌癥的特點(diǎn)是積累的基因組異常，導(dǎo)致活化癌基因和滅活腫瘤抑制基因，這些差異表達(dá)基因被稱為“驅(qū)動基因”。因此發(fā)現(xiàn)具有顯著突變意義的基因?qū)τ诿鞔_癌癥的成因、進(jìn)展過程以及開發(fā)新的抗腫瘤治療方法有著重要意義。二代測序技術(shù)使我們對乳腺癌分子生物學(xué)研究有了進(jìn)一步認(rèn)識，具體可以概括為3個方面：(1) 識別新的突變基因；(2) 了解基因突變過程及機(jī)制；(3) 探索腫瘤異質(zhì)性并促進(jìn)個體化醫(yī)學(xué)發(fā)展。

1 顯著突變基因的識別

在大量的基因突變中只有一小部分使得正常的細(xì)胞轉(zhuǎn)化為有癥狀的癌細(xì)胞，這部分突變稱為驅(qū)動突變。而大部分突變不賦予克隆增長的優(yōu)勢，并不為癌癥發(fā)展貢獻(xiàn)[1]，這些突變被稱為“乘客”突變。通過二代測序技術(shù)對乳腺癌大量數(shù)據(jù)的分析已成功區(qū)分驅(qū)動突變和乘客突變，并確定了顯著突變的基因[2]。這些癌癥相關(guān)基因及其基因結(jié)構(gòu)的改變可能有助于腫瘤的發(fā)生。

2012年二代測序技術(shù)的應(yīng)用以及一系列具有里程碑意義的研究解開了乳腺疾病的突變景觀，乳腺癌基因組學(xué)取得重大突破。Stephens等[3]通過對100例ER陽性和ER陰性的原發(fā)乳腺腫瘤患者進(jìn)行外顯子測序識別了7 241個體細(xì)胞突變點(diǎn)。Forbes等[4]證實(shí)了驅(qū)動基因的突變與乳腺癌的發(fā)展相關(guān)聯(lián)，如AKT1、BRCA1、CDH1和GATA3、PIK3CA、PTEN、RB1、TP53、APC基因。與許多腫瘤相關(guān)的一些癌基因也存在窩藏驅(qū)動突變，更重要的是9個新的癌基因(AKT2、ARID1B、CASP8、CDKN1B、MAP3K1、MAP3K13、NCOR1、SMARCD1、TBX3)被確定，其中7個(除了AKT2和TBX3)是潛在的隱性癌易感基因[3]。AKT2基因被認(rèn)為是激活的、顯性作用的癌基因，而Tbx3基因突變對其功能的影響尚不清楚[3]。所有這些基因在細(xì)胞主要功能方面都扮演著重要的角色，如細(xì)胞增殖、DNA修復(fù)和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)。這項(xiàng)研究的一個有趣的發(fā)現(xiàn)是，幾個不同的突變過程的出現(xiàn)導(dǎo)致乳腺癌JNK信號的失活，多功能激酶JNK參與許多生理過程，包括細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)和細(xì)胞凋亡[5-6]。JNK通常作為JUN激酶的活化劑，JNK信號可以直接被MAP3K1、MAP2K4和MAP3K13的突變失活或廢除[5]。此外，PIK3CA和PTEN突變可能導(dǎo)致通過激活A(yù)kt抑制JNK信號，也可以磷酸化和抑制MAP2K4[7]。這項(xiàng)研究的另一有意義的發(fā)現(xiàn)是不同的患者表現(xiàn)出不同的突變模式(體細(xì)胞突變的數(shù)量和類型)；這種多種分子機(jī)制的概念會引發(fā)乳腺癌在不同個體的發(fā)展，不同的乳腺癌患者呈現(xiàn)出多樣化的臨床表現(xiàn)，然而，在樣本測試中沒有突變總數(shù)和診斷年齡之間的相關(guān)性，這項(xiàng)研究表明啟動驅(qū)動程序事件后乳腺癌基因組發(fā)生大量的基因突變[3]。

乳腺癌以雌激素受體(ER)、PR和Her-2受體的表達(dá)水平為依據(jù)分為管狀A(yù)/B型(Luminal A/B)、基底樣癌(basal-like)、正常樣癌(normal-like)和Her-2過表達(dá)型[8]。這4種類型具有不同的基因表達(dá)特征，Luminal型乳腺癌具有ER的表達(dá)特征。Luminal A型乳腺癌是最常見的亞型，在乳腺導(dǎo)管內(nèi)的腔上皮通常也具有高表達(dá)的基因如GATA3、FOXA1、Bcl-2以及低表達(dá)的和細(xì)胞增殖相關(guān)基因[9]。更為積極的表現(xiàn)型Luminal B型是罕見的，具有更高的組織學(xué)分級和增殖指數(shù)，它的特點(diǎn)是細(xì)胞腔基因的低水平表達(dá)和細(xì)胞增殖基因的高水平表達(dá)[9]。Her2過表達(dá)型乳腺癌通常高表達(dá)Her2和生長因子受體結(jié)合蛋白7(GRB7)，后者也位于17q21 Her2擴(kuò)增子?；讟尤橄侔┑幕蚝灻ǖ退降腅R受體表達(dá)或ER缺失，缺乏Her2過表達(dá)，表達(dá)的基因通常發(fā)生在基底或肌上皮細(xì)胞正常的乳房(細(xì)胞角蛋白5、6、17)和高水平表達(dá)的與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因[8]。

Banerji等[10]對125例患者(4種主要亞型乳腺癌)進(jìn)行DNA測序，外顯子組測序證實(shí)了TP53、PIK3CA、AKT1、GATA3和MAP3K1基因的高頻突變，也第一次證實(shí)了CBFB是乳腺癌有意義的突變[10]。突變CBFB只發(fā)現(xiàn)在ER+腫瘤，然而，由于樣本太小，不能確定這種突變是否為ER+腫瘤特有。CBFB基因編碼的異二聚體的β亞基核心結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)節(jié)一組特定于造血[11]和成骨[12]的基因。RUNX1是CBFB的合作伙伴，被認(rèn)為具有腫瘤抑制因子角色[13]?；谶@些數(shù)據(jù)很容易推測，乳腺癌轉(zhuǎn)錄因子的失活可能與疾病的病因有關(guān)系，未來的研究應(yīng)該致力于闡明其功能喪失的影響。

癌癥基因組網(wǎng)絡(luò)(TCGA)通過整合507例患者的基因組(DNA拷貝數(shù)與外顯子)、轉(zhuǎn)錄組(基因和miRNA的表達(dá))、表觀基因組(DNA甲基化)和蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)，完整地研究了乳腺癌的分子特征[14]。510例乳腺腫瘤的全基因組測序分析確定了30 626個突變和生物信息學(xué)分析確定35個體細(xì)胞突變，包括在上述研究中所描述的基因，以及一些新的基因，除了PIK3CA(編碼PI3K的催化亞基的基因)基因突變，還確定了PIK3R1(編碼PI3K調(diào)節(jié)亞基的基因)基因突變。PI3K通路的所有重要的調(diào)節(jié)器PIK3R1、PIK3CA、PTEN和AKT1進(jìn)行突變后相互排斥[14]。這項(xiàng)研究表明腫瘤的體細(xì)胞突變具有不同的突變模式。雖然管狀乳腺癌體細(xì)胞突變率低于基底型乳腺癌和Her-2過表達(dá)型，但管狀乳腺癌體細(xì)胞突變呈現(xiàn)最多樣化和較高的復(fù)發(fā)率，這一發(fā)現(xiàn)表明這些突變基因在管狀乳腺癌起著驅(qū)動作用。Luminal A型乳腺癌體細(xì)胞突變最常見的是PIK3CA(45%)，其次是MAP3K1、GATA3、TP53、CDH1和MAP2K4。Stephens等[3]認(rèn)為MAP3K1和MAP2K4基因突變將導(dǎo)致JNK信號通路的失活或廢除，這些突變間具有互斥性特點(diǎn)。Luminal B型顯著突變的基因具有多樣性的特點(diǎn)，TP53和PIK3CA(各占29%)是最常見的，其他一些TP53通路失活事件(ATM損失和MDM2擴(kuò)增)也頻繁地發(fā)生在這個亞型，相對于A亞型如果假定B型TP53通路失活就可以解釋B亞型為更積極的表型。絕大多數(shù)基底樣癌(80%)進(jìn)行TP53基因突變，只有9%發(fā)生PIK3CA突變，細(xì)胞腔的顯著突變基因則不存在。在Her2+亞型，頻繁的Her2基因擴(kuò)增(80%)，表現(xiàn)出混合模式的高頻率的TP53(72%)和PIK3CA(39%)以及低頻率的PIK3R1和PTEN基因突變。

腫瘤相關(guān)基因的識別一直是腫瘤研究的一個焦點(diǎn)，二代測序推動了乳腺癌基因組學(xué)的研究進(jìn)展，這一過程的研究定會成為“精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)”不可或缺的一部分[15]。

2 了解乳腺癌的突變過程及機(jī)制

全乳腺癌基因組測序使我們對乳腺疾病的突變過程有了進(jìn)一步的了解。研究者應(yīng)用二代測序技術(shù)在21例乳腺癌組織和正常組織中確定了183 916個體細(xì)胞發(fā)生堿基替換，在這些基因中存在驅(qū)動突變，如TP53、GATA3、PIK3CA、MAP2K4、SMAD4、MLL2、MLL3、NCOR1、ERBB2、CCND1、MYC、MDM2、ZNF217、ZNF703[16]。通過二代測序分析可以全面揭示遺傳與環(huán)境變化在癌癥基因組內(nèi)留下的簽名(與不同的DNA損傷和修復(fù)的分子機(jī)制相關(guān))，每一個突變的過程都會在癌癥基因組上留下一個標(biāo)記，這是一個特定的突變類型的組合，這個突變的簽名是由每一個突變過程暴露的強(qiáng)度和持續(xù)時間決定的[16]。以這種方式確定5種生物學(xué)上不同的單核苷酸替換過程，能觀察到癌癥之間突變數(shù)量和模式的變化(簽名A-E)。簽名A：主要特點(diǎn)是TpCpG三核苷酸序列上的C>T突變，也存在少量其他類型的突變。簽名B:主要特征是TpCpX三核苷酸序列上的C>T、C>G和C>A突變，主要發(fā)生在10%的ER+腫瘤樣本。簽名C:XpCpG三核苷酸序列上適量的C>T、C>G突變及少量的C>A突變。簽名D則表現(xiàn)出較均勻的分布。簽名E主要特點(diǎn)是TpCpX三核苷酸序列上的C>G突變，簽名E因此類似于簽名B，但缺乏簽名B中TpCpX三核苷酸序列上的C>T突變。該研究的主要發(fā)現(xiàn)是對病灶局部置換突變的檢測，即雷雨(kataegis)。雷雨特點(diǎn)是C>T和(或)C>G突變，主要發(fā)生在TpCpX三核苷酸序列的同一DNA鏈上。雷雨灶包括幾個到幾千個突變，主要發(fā)生基因組重排。雷雨簽名和簽名B可能與APOBEC家族(載脂蛋白B mRNA編輯酶催化多肽家族)成員胞苷脫氨酶有關(guān)，在堿基切除修復(fù)和DNA復(fù)制機(jī)制的共同作用下，胞嘧啶轉(zhuǎn)換成尿嘧啶。隨后的大型研究，檢查了超過7 000個樣本30種不同類型的癌癥也表明APOBEC突變簽名富集在腫瘤細(xì)胞[17]。APOBEC家族成員加劇亞克隆擴(kuò)張和瘤內(nèi)異質(zhì)性，這可能代表了一種新的靶向藥物，旨在限制腫瘤的演進(jìn)、適應(yīng)及耐藥。

3 解剖瘤內(nèi)異質(zhì)性

乳腺癌所有可識別的形態(tài)和功能特征均可呈現(xiàn)瘤內(nèi)異質(zhì)性，反映的是多克隆的存在。研究者通過基因組測序研究揭示了乳腺癌瘤內(nèi)異質(zhì)性(相同的腫瘤類型不同患者之間的分子差異)。他們通過估算在散發(fā)腫瘤內(nèi)檢測到的突變事件的等位基因頻率也發(fā)現(xiàn)了空間的瘤內(nèi)異質(zhì)性(原發(fā)腫瘤的不同區(qū)域之間的分子差異)。時間的瘤內(nèi)異質(zhì)性描述了在疾病的進(jìn)展過程中腫瘤的進(jìn)化，它是腫瘤自然發(fā)展過程中的遺傳變異和抗癌治療過程中產(chǎn)生的選擇性壓力的組合。

時間的瘤內(nèi)異質(zhì)性最廣泛的研究形式涉及一個原發(fā)性乳腺癌及其相關(guān)的轉(zhuǎn)移性病變隨著時間的發(fā)展所產(chǎn)生的差異[17]。兩個開創(chuàng)性研究試圖通過深度測序理清這個問題[18-19]，Shah等[19]在一個原發(fā)乳腺小葉腫瘤并且9年后發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者身上證實(shí)了基因組畸變的存在。小葉乳腺癌ER+亞型，雖然具有高轉(zhuǎn)移性，但可以在最初診斷后的許多年后復(fù)發(fā)，顯示出良好的預(yù)后[20]。這項(xiàng)研究揭示了32個基因發(fā)生體細(xì)胞非同義突變參與乳腺癌的轉(zhuǎn)移[19]，其中一些基因如CHD3、SP1、PALB2、ERBB2、USP28、klhl4、CDC6、kiaa1468、rnf220、COL1A1和SNX4在以前已被確定為乳腺癌的突變(但在不同的位置)，其余的在乳腺癌中首次被發(fā)現(xiàn)。32個基因中有11個也被發(fā)現(xiàn)在原發(fā)腫瘤中，而且11個中只有5個比較普遍，其余的則以較低的頻率出現(xiàn)，這意味著這些特定的基因突變被限制在亞克隆腫瘤細(xì)胞。這些數(shù)據(jù)有力地表明，在癌癥進(jìn)展過程中發(fā)生了突變進(jìn)化，然而目前還不清楚在乳腺癌轉(zhuǎn)移過程中是否腫瘤自然進(jìn)化或化療的副作用會產(chǎn)生額外的突變。

基底樣乳腺癌具有侵襲性，并由于缺乏靶向治療，預(yù)后較差，往往遵循一個轉(zhuǎn)移過程，最終導(dǎo)致死亡[21]。目前，還不清楚侵襲性表型的轉(zhuǎn)移是否由最初發(fā)生在原發(fā)腫瘤的細(xì)胞突變驅(qū)動或由遷移到轉(zhuǎn)移部位后的腫瘤細(xì)胞突變驅(qū)動。在2010年發(fā)表的一項(xiàng)研究通過對新輔助治療一年后發(fā)生腦轉(zhuǎn)移的原發(fā)乳腺癌患者進(jìn)行基因測序解決了這個問題[18]。原發(fā)性腫瘤最顯著的特點(diǎn)是突變的等位基因頻率范圍較寬，這意味著相當(dāng)大的空間瘤內(nèi)異質(zhì)性。對于原發(fā)性腫瘤和轉(zhuǎn)移性腫瘤的時間異質(zhì)性，研究者在轉(zhuǎn)移瘤中(并不出現(xiàn)在原發(fā)腫瘤)確定了2種從頭合成突變，20個共享點(diǎn)突變，1個重要的染色體重排涉及FBXW7基因1個大雜合子的缺失，這種基因編碼的蛋白質(zhì)參與cyclin E和mTOR泛素介導(dǎo)的降解過程，如果這種功能缺失將導(dǎo)致染色體不穩(wěn)定或腫瘤的發(fā)生[22]，此外CTNNA1基因水平雙等位基因的缺失將導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞失去細(xì)胞黏附[23]，并增加致瘤的特征[24]。

雖然二代測序技術(shù)使我們對瘤內(nèi)異質(zhì)性有了初步的認(rèn)識，但有可能混雜了克隆多樣性，DNA和RNA的單細(xì)胞測序(SCS)方法為描述克隆多樣性和理解罕見細(xì)胞在癌癥進(jìn)展的作用提供強(qiáng)大的新工具[25]。第一項(xiàng)研究使用這種技術(shù)結(jié)合流式細(xì)胞核技術(shù)，應(yīng)用全基因組擴(kuò)增和二代測序從三陰性乳腺癌個體細(xì)胞核內(nèi)準(zhǔn)確量化基因組拷貝數(shù)[26]。數(shù)據(jù)分析顯示，拷貝數(shù)畸變不時地爆發(fā)，其次是穩(wěn)定的克隆擴(kuò)張，最終形成腫瘤。在隨后的研究中，同一研究小組開發(fā)了一種新的測序方法，即核序列，應(yīng)用于ER+浸潤性導(dǎo)管癌和三陰性乳腺癌患者，觀察腫瘤的突變景觀。這是一種高覆蓋、全外顯子組單細(xì)胞測序的方法[27]。從細(xì)胞群體和單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)顯示三類的突變：(1)克隆突變，發(fā)現(xiàn)在總體樣本和大多數(shù)單一腫瘤細(xì)胞；(2)亞克隆突變，發(fā)現(xiàn)僅在單一腫瘤細(xì)胞；(3)從頭突變，發(fā)現(xiàn)僅在一類腫瘤細(xì)胞[27]。這些數(shù)據(jù)清楚地表明，即使在單細(xì)胞水平，也有著顯著的腫瘤異質(zhì)性，而且不同腫瘤的亞克隆是隨著時間的推移積累不同的點(diǎn)突變的結(jié)果。

4 結(jié) 語

乳腺癌是一種異質(zhì)性疾病，有著不同的組織學(xué)與病理學(xué)特征，具有復(fù)雜的分子生物學(xué)特征，具有多樣的遺傳與表觀遺傳突變，包括體細(xì)胞突變和DNA甲基化模式。二代測序技術(shù)臨床應(yīng)用的意義在于識別疾病的分子亞型、腫瘤異質(zhì)性以及確定新的治療靶點(diǎn)，為患者量身定制個體化治療方案，為此二代測序技術(shù)在乳腺癌的診斷、預(yù)后及治療中都起著著重要作用。下一步研究的重點(diǎn)將是通過二代測序技術(shù)為臨床醫(yī)生提供有用的和有效的信息進(jìn)一步改善患者的預(yù)后水平。

[1] STRATTON M R，CAMPBELL P J，F(xiàn)UTREAL P A.The cancer genome[J].Nature，2009，458(7239):719-724．

[2] DING L，WENDL M C，McMICHAEL J F，et al.Expanding the computational toolbox for mining cancer genomes[J].Nat Rev Genet，2014，15(8):556-570．

[3] STEPHENS P J，TARPEY P S，DAVIES H，et al.The landscape of cancer genes and mutational processes in breast cancer[J].Nature 2012，486(7403):400-404．

[4] FORBES S A，BHAMRA G，BAMFORD S，et al.The catalogue of somatic mutations in cancer(COSMIC)[J/OL].Curr Protoc Hum Genet，2008.doi:10.1002/0471142905.hg1011s57

[5] DAVIES C，TOURNIER C.Exploring the function of the jnk(c-jun n-terminal kinase)signalling pathway in physiological and pathological processes to design novel therapeutic strategies[J].Biochem Soc Trans，2012，40(1):85-89．

[6] ANGEL P，HATTORI K，SMEAL T，et al.The jun proto-oncogene is positively autoregulated by its product，jun/ap-1[J].Cell，1988，55(5):875-885．

[7] PARK H S，KIM M S，HUH S H，et al.Akt(protein kinase b)negatively regulates SEK1 by means of protein phosphorylation[J].J Biol Chem，2002，277(4):2573-2578．

[8] PEROU C M，SORLIE T，EISEN M B，et al.Molecular portraits of human breast tumours[J].Nature，2000，406(6797):747-752．

[9] EROLES P，BOSCH A，PEREZ-FIDALGO J A，et al.Molecular biology in breast cancer:intrinsic subtypes and signaling pathways[J].Cancer Treat Rev，2012，38(6):698-707．

[10] BANERJI S，CIBULSKIS K，RANGEL-ESCARENO C，et al.Sequence analysis of mutations and translocations across breast cancer subtypes[J].Nature，2012，486(7403):405-409．

[11] SPECK N A.Core binding factor and its role in normal hematopoietic development[J].Curr Opin Hematol，2001，8(4):192-196．

[12] YOSHIDA C A，F(xiàn)URUICHI T，F(xiàn)UJITA T，et al.Core-binding factor beta interacts with Runx2 and is required for skeletal development[J].Nat Genet，2002，32(4):633-638．

[13] CHIMGE N O，F(xiàn)RENKEL B.The runx family in breast cancer:relationships with estrogen signaling[J].Oncogene，2012，32(17):2121-2130．

[14] Cancer Genome Atlas Network.Comprehensive molecular portraits of human breast tumours[J].Nature，2012，490(7418):61-70．

[15] ALEXANDROV L B，NIK-ZAINAL S，WEDGE D C，et al.Signatures of mutational processes in human cancer[J].Nature，2013，500(7463):415-421．

[16] ROYCHOWDHURY S，CHINNAIYAN A M.Translating genomics for precision cancer medicine[J].Ann Rev Genom Hum Genet，2014，15:395-415．

[17] NIK-ZAINAL S，ALEXANDROV L B，WEDGE D C，et al.Mutational processes molding the genomes of 21 breast cancers[J].Cell，2012，149(5):979-993．

[18] DING L，ELLIS M J，LI S，et al.Genome remodelling in a basal-like breast cancer metastasis and xenograft[J].Nature，2010，464(7291):999-1005．

[19] SHAH S P，MORIN R D，KHATTRA J，et al.Mutational evolution in a lobular breast tumour profiled at single nucleotide resolution[J].Nature，2009，461(7265):809-813．

[20] MCCART REED A E，KUTASOVIC J R，LAKHANI S R，et al.Invasive lobular carcinoma of the breast:morphology，biomarkers and omics[J].Breast Cancer Res，2015，17:12．

[21] RAKHA E A，REIS-FILHO J S，ELLIS I O.Basal-like breast cancer:a critical review[J].J Clin Oncol，2008，26(15):2568-2581．

[22] WELCKER M，CLURMAN B E.FBW7 ubiquitin ligase:a tumour suppressor at the crossroads of cell division，growth and differentiation[J].Nat Rev Cancer，2008，8(2):83-93．

[23] BAJPAI S，F(xiàn)ENG Y，KRISHNAMURTHY R，et al.Loss of alpha-catenin decreases the strength of single e-cadherin bonds between human cancer cells[J].J Biol Chem，2009，284(27):18252-18259．

[24] PLUMB C L，ADAMCIC U，SHAHRZAD S，et al.Modulation of the tumor suppressor protein alpha-catenin by ischemic microenvironment[J].Am J Pathol，2009，175(4):1662-1674．

[25] WANG Y，NAVIN N E.Advances and applications of single-cell sequencing technologies[J].Mol Cell，2015，58(4):598-609．

[26] NAVIN N，KENDALL J，TROGE J，et al.Tumour evolution inferred by single-cell sequencing[J].Nature，2011，472(7341):90-94.

[27] WANG Y，WATERS J，LEUNG M L，et al.Clonal evolution in breast cancer revealed by single nucleus genome sequencing[J].Nature，2014，512(7513):155-160．

2016-03-01

2016-05-20

葉新星(1990-)，女，黑龍江哈爾濱人，在讀碩士研究生。E-mail:290276584@qq.com

康欣梅 E-mail:kxm791107@163.com

葉新星，康欣梅.二代測序技術(shù)在乳腺癌分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用及進(jìn)展[J].東南大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2016，35(5)：813-816.

R737.9

A

1671-6264(2016)05-0813-04

10.3969/j.issn.1671-6264.2016.05．038