郭兆元， 聶忠莉， 胡一冰， 曾 吉， 王曉玲，葉 丁， 張 勇， 蕭茂玲， 郭 瑞

(1.成都大學(xué) 四川抗生素工業(yè)研究所， 四川 成都 610052；2.成都大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院， 四川 成都 610106；3.成都克萊蒙醫(yī)藥科技有限公司， 四川 成都 610041)

阿哌沙班片溶出度測定方法研究

郭兆元1， 聶忠莉2， 胡一冰2， 曾 吉2， 王曉玲3，葉 丁3， 張 勇3， 蕭茂玲3， 郭 瑞3

(1.成都大學(xué) 四川抗生素工業(yè)研究所， 四川 成都 610052；2.成都大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院， 四川 成都 610106；3.成都克萊蒙醫(yī)藥科技有限公司， 四川 成都 610041)

建立了以高效液相色填充譜法測定阿哌沙班片溶出度的測定方法，采用0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液900 mL為溶出介質(zhì)，溫度為37 ℃±0.5 ℃，轉(zhuǎn)速為75 r/min，溶出介質(zhì)經(jīng)脫氣處理，取樣時間為30 min.結(jié)果顯示，6批供試品及對照藥品30 min的溶出度均在80%以上，均符合規(guī)定.方法專屬性強(qiáng)，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于測定阿哌沙班片的溶出度.

阿哌沙班片；溶出度；高效液相色譜法

0 引 言

阿哌沙班是一類新型的強(qiáng)效可逆性凝血因子抑制劑.據(jù)報道，阿哌沙班已完成預(yù)防全髖關(guān)節(jié)和全膝關(guān)節(jié)成形術(shù)后靜脈血栓栓塞(VTE)的相關(guān)臨床試驗，并于2011年5月得到歐盟對其用于此適應(yīng)癥的上市許可[1-2].目前，阿哌沙班被廣泛用于針對術(shù)后靜脈血栓栓塞(VTE)的治療[3]、預(yù)防重病住院患者出現(xiàn)VTE與房顫患者[4]，以及其他血栓栓塞事件的Ⅲ期臨床試驗研究[5-6].藥品溶出度試驗作為一種模擬固體口服制劑在胃腸道中崩解和溶出的體外試驗方法，常被作為一種體外替代方法為體內(nèi)生物等效性研究和體內(nèi)外相關(guān)性研究提供信息和指導(dǎo)[7]。此外，溶出度試驗還被作為小分子藥物的質(zhì)量控制手段，用來保證產(chǎn)品批間的一致性以及后續(xù)的上市產(chǎn)品與臨床實驗樣品的一致性.貯藏過程中，產(chǎn)品溶解速率的變化體現(xiàn)出固體口服制劑穩(wěn)定性的差異，因此，溶出度試驗在藥物固體口服制劑的研發(fā)過程中具有重要的作用[8].本研究依據(jù)《化學(xué)藥物制劑研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《化學(xué)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的規(guī)范化過程技術(shù)指導(dǎo)原則》以及《中國藥典》2015年版四部通則中有關(guān)的指導(dǎo)原則對阿哌沙班片溶出度方法進(jìn)行了探討，通過對阿哌沙班片溶出度方法學(xué)驗證，證明本方法適合阿哌沙班片的溶出度測定，結(jié)果準(zhǔn)確可靠.

1 儀器與試藥

1.1 試 藥

實驗所用試藥包括：阿哌沙班片(供試品，批號，140101、140102、140103、140201、140202、140203)，由成都克萊蒙醫(yī)藥科技有限公司提供，阿哌沙班片(對照品，批號，AP130901)；十二烷基磺酸鈉(AR)、磷酸鈉(AR)、磷酸(AR)、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)(AR)、純化水、醋酸(AR)、鹽酸(AR)、乙腈(AR)、三乙胺(AR).

1.2 儀 器

實驗所用儀器包括：ZRS-8G型智能溶出試驗儀(天津大學(xué)無線電廠)；ACS-30-JC11型電子秤(廣東香山衡器集團(tuán)有限公司)；MS分析天平(梅特勒—托利多)；Agilent-1200型液相色譜儀(山東金普分析儀器有限公司)；PHS-3C型PH計(上海雷磁儀器廠)；TU-1901型紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司).

2 方 法

2.1 阿哌沙班片溶出度含量測定方法學(xué)研究

2.1.1 測定波長掃描及空白干擾試驗.

1)輔料空白溶液的制備.取空白輔料約60 mg(相當(dāng)于1片的輔料)，置100 mL量瓶中，加4 mL乙腈，充分振搖使?jié)櫇瘢曁幚?5 min，加0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸緩沖液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取1 mL置10 mL量瓶中，加0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸緩沖液稀釋至刻度，搖勻，即得.同法制得在0.05%CTAB-水、0.5%CTAB-pH 4.5的醋酸緩沖液、0.5%CTAB-0.1 mol/L的鹽酸溶液中的空白輔料溶液.

2)對照品溶液的制備.精密稱取阿哌沙班對照品約11 mg，置于100 mL量瓶中，加4 mL乙腈溶解后，加0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸緩沖液稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL置于10 mL量瓶中，加0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸緩沖液稀釋至刻度，搖勻，即得.同法制得在0.05%CTAB-水、0.5%CTAB-pH 4.5的醋酸緩沖液、0.5%CTAB-0.1 mol/L的鹽酸溶液中的對照品溶液.

3)供試品溶液的制備.精密稱取阿哌沙班片粉末約70 mg(相當(dāng)于阿哌沙班10 mg)，置于100 mL量瓶中，加4 mL乙腈，充分振搖使?jié)櫇瘢曁幚?5 min，加0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸緩沖液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取1 mL置于10 mL量瓶中，加0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸緩沖液稀釋至刻度，搖勻，即得.同法制得在0.05%CTAB-水、0.5%CTAB-pH 4.5的醋酸緩沖液、0.5%CTAB-0.1 mol/L的鹽酸溶液中的供試品溶液.

分別取上述溶液在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描.結(jié)果表明，4種溶出介質(zhì)中阿哌沙班對照品和供試藥品均在270±5 nm波長處有最大吸收，輔料在此范圍內(nèi)無明顯吸收峰，表明輔料不干擾該法測定.因此，將270 nm作為阿哌沙班溶出度測定的檢測波長.

2.1.2 色譜條件.

阿哌沙班溶出度檢測的色譜條件為：除檢測波長為270 nm外，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，柱溫為35 ℃，以水(1 000 mL水，加入三乙胺1 mL，用磷酸調(diào)pH值至3.0)—乙腈(45∶55)為流動相，流速為1.0 mL/min；理論板數(shù)按阿哌沙班主峰計算不低于5 000.

2.1.3 線性關(guān)系考察.

取阿哌沙班對照品約11 mg，加4 mL乙腈溶解后，用0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液稀釋并制成每1 mL含阿哌沙班0.11 mg的溶液，作為儲備液.分別精密量取儲備液適量，加0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液稀釋成表1所示濃度，搖勻，分別進(jìn)樣測定.以對照溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸處理.計算回歸方程及相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見表1及圖1.

表1 溶出度線性實驗結(jié)果

圖1 阿哌沙班片溶出度線性圖

實驗結(jié)果表明，阿哌沙班在0.61 μg/mL～19.90 μg/mL濃度范圍內(nèi)，其濃度與吸收度呈良好線性關(guān)系.

2.1.4 重復(fù)性實驗.

取線性實驗項下5號樣品(10.85 μg/mL)，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄圖譜，按外標(biāo)法以峰面積計算測定，結(jié)果見表2.

表2 重復(fù)性實驗結(jié)果

實驗結(jié)果表明，阿哌沙班樣品溶出度測定重復(fù)性良好.

2.1.5 穩(wěn)定性考察.

取線性實驗項下5號樣品(10.85 μg/mL)，室溫放置，分別于0、30、60、90、120、180、240、360 min取樣，測定，并計算RSD(%)值，結(jié)果見表3.

表3 穩(wěn)定性實驗結(jié)果

實驗結(jié)果表明，阿哌沙班樣品在360 min內(nèi)保持穩(wěn)定.

2.1.6 回收率實驗.

取阿哌沙班對照品11 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加少量乙腈使其溶解，用0.1%CTAB-pH6.8的磷酸鹽緩沖溶液稀釋至刻度，作為儲備液.分別精密量取2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL溶液置于100 mL量瓶中，再按處方比例加入空白輔料，模擬溶出條件使其溶解，用0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液，制得供試品溶液.另取上述儲備液適量，用pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液稀釋并制成每1 mL含阿哌沙班11 μg/mL的溶液，搖勻，制得對照品溶液.

取上述對照品溶液和供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄圖譜，按外標(biāo)法以峰面積計算其回收率，結(jié)果見表4.

表4 溶出度測定回收率實驗結(jié)果

實驗結(jié)果表明，阿哌沙班樣品回收率良好，方法可靠.

2.2 溶出度實驗方法研究

2.2.1 溶出介質(zhì)確定.

取供試藥品6片，按照溶出度測定法(《中國藥典》2015年版四部 通則0931)，采用槳法，以900 mL 0.05%CTAB-水、0.5%CTAB-pH 4.5的醋酸緩沖液、0.5%CTAB-0.1 mol/L的鹽酸溶液、0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸緩沖液作為溶出介質(zhì)，溫度為37 ℃±0.5 ℃，溶出介質(zhì)均經(jīng)脫氣處理，轉(zhuǎn)速為75 r/min，分別在5、10、15、30、45、60、90、120 min時取樣10 mL，并補(bǔ)加等溫等體積的溶出介質(zhì)10 mL，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液.另取阿哌沙班對照品適量，用相應(yīng)的溶出介質(zhì)溶解并稀釋制成每1 mL中含阿哌沙班11 μg的溶液，搖勻，作為對照品溶液.除檢測波長為270 nm外，按照含量測定項下色譜條件測定，取上述種溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄圖譜，計算出每片不同時間的累計百分溶出度，計算公式為，

測定結(jié)果如表5及圖2所示.

表5 供試品在不同溶出介質(zhì)中的累積溶出度測定結(jié)果(n=6)

圖2 不同溶出介質(zhì)的溶出曲線比較圖

由上述結(jié)果可知，本品在0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液中的溶出最快.因此，選擇0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液作為本品的溶出介質(zhì).

2.2.2 溶出體積選擇.

取阿哌沙班原料藥約10 mg置于250 mL量瓶中加0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液100 mL振搖5 min，結(jié)果未完全溶解，再加入0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液50 mL，振搖5 min，完全溶解，即10 mg阿哌沙班能完全溶解于150 mL 0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液中，符合漏槽條件的溶液體積至少應(yīng)為450 mL.因此，將溶出介質(zhì)的體積暫定為900 mL.

2.2.3 溶出轉(zhuǎn)速選擇.

取供試藥品6片，按照溶出度測定法(《中國藥典》2015年版四部 通則0931)，以900 mL的0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液作為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速分別為50 r/min和75 r/min，溫度為37 ℃±0.5 ℃，溶出介質(zhì)均經(jīng)脫氣處理，分別在5、10、15、30、45、60 min時取樣10 mL，并補(bǔ)加等溫等體積的溶出介質(zhì)10 mL，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液.另取阿哌沙班對照品適量，用相應(yīng)的溶出介質(zhì)溶解，并制成每1 mL含阿哌沙班15 μg的溶液，搖勻，作為對照品溶液.除檢測波長為270 nm外，按照含量測定項下色譜條件測定，取上述種溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄圖譜，計算出每片不同時間的累計百分溶出率.

測定結(jié)果見表6，溶出曲線比較如圖3所示.

圖3 不同轉(zhuǎn)速的溶出度曲線比較圖

由上述結(jié)果可知，供試藥品在相同的取樣時間點，75 r/min的溶出速率總體稍高于50 r/min的溶出速率，故選擇轉(zhuǎn)速為75 r/min.

2.2.4 取樣時間選擇.

對于普通制劑，在大多數(shù)情況下，藥品標(biāo)準(zhǔn)中采用單點控制即可，取樣時間點一般為30～60 min，溶出限度通常應(yīng)在70%～不少于85%.從本品的溶出曲線可以看出，15 min時溶出限度就已經(jīng)達(dá)到85%左右，因此選取30 min為取樣點.

2.2.5 阿哌沙班片溶出度測定方法確定.

根據(jù)以上實驗結(jié)果，將阿哌沙班片溶出方法確定為：取本品，按照溶出度測定法(《藥典》2015年版四部 通則0931)，以0.1%CTAB-pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液900 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為75 r/min，經(jīng)30 min時，取溶液10 mL，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液.另精密稱取阿哌沙班對照品適量，加0.1%CTAB-pH6.8的磷酸鹽緩沖溶液制成每1 mL含11 μg的溶液，作為對照品溶液.按照高效液相色譜法(《藥典》2015年版二部附錄ⅤD)測定：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，柱溫為35 ℃，以水(1 000 mL水，加入三乙胺1 mL，用磷酸調(diào)pH值至3.0)-乙腈(45∶55)為流動相，流速為1.0 mL/min，檢測波長為270 nm.精密量取對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，理論板數(shù)按阿哌沙班主峰計算不低于5 000.精密量取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計算每片溶出量，限度為標(biāo)示量的80%.

2.3 溶出度測定結(jié)果

依據(jù)上述溶出度測定法，測定6批供試品的溶出度，結(jié)果見表7.

表7 溶出度檢查結(jié)果

由表7結(jié)果可知：6批供試品及對照藥品30 min的溶出度均在80%以上，均符合規(guī)定.

3 結(jié) 論

通過對阿哌沙班片溶出度含量檢測方法和溶出度實驗方法的研究，建立了可控制其質(zhì)量的溶出度測定方法.該方法操作方便快捷，測量結(jié)果準(zhǔn)確.

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Study on Dissolution Determination Method of Apixaban

GUOZhaoyuan1,NIEZhongli2,HUYibing2,ZENGJi2,WANGXiaoling3,YEDing3,ZHANGYong3,XIAOMaoling3,GUORui3

1.Sichuan Industrial Institute of Antibiotics, Chengdu University, Chengdu 610052， China;2.School of Pharmacy and Bioengineering, Chengdu University, Chengdu 610106, China；3.Chengdu Climb Phamaceutical Technology Co., Ltd., Chengdu 610041, China)

The paper is going to establish a method of dissolution determination of Apixaban.The establishment of the determination method for dissolution of Apixaban tablets is based on High Performance Liquid Chromatography.Phosphate buffer solution of 0.1% CTAB-pH 6.8 is used as dissolution medium which is degassed at 37±0.5 ℃,with the rotate speed of 75 r/min and the sampling time of 30 min.The results show that the dissolution of six batches of test samples and reference drug is over 80% in 30 min.It is in compliance with the regulations.The method can be used to determine the dissolution of Apixaban tablets with its selective,sensitive and accurate traits.

Apixaban tablets;dissolution;High Performance Liquid Chromatography(HPLC)

1004-5422(2016)04-0317-04

2016-11-02.

郭兆元(1991 — )， 男， 碩士研究生， 從事藥物制劑與分析研究.

R927.11

A