張雪

凍融胚胎和凍融囊胚移植對分娩結(jié)局影響的比較

張雪

目的探討分析凍融囊胚移植對分娩結(jié)局的影響。方法比較1 715例凍融胚胎移植和228例冷凍囊胚移植后兩組胚胎種植率、妊娠率、異位妊娠率、早產(chǎn)率、新生兒缺陷、男女比例、死胎、巨大兒發(fā)生情況。結(jié)果B組患者的胚胎種植率、妊娠率、異位妊娠率均優(yōu)于A組（均P＜0.05），兩組新生兒缺陷、男女比例、死胎、巨大兒情況比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。結(jié)論凍融囊胚移植技術(shù)是可以提高胚胎種植率，降低妊娠率、異位妊娠率，能夠改善后期妊娠結(jié)局。

凍融囊胚；凍融胚胎；移植；分娩結(jié)局

1983年自從首例冷凍胚胎移植獲得圓滿成功以來，凍融胚胎技術(shù)得以迅速傳播和發(fā)展，目前凍融胚胎技術(shù)已經(jīng)逐漸成為我們?nèi)祟愝o助生殖技術(shù)中的一個重要技術(shù)[1]。胚胎的解凍移植技術(shù)可以解決因卵巢過度刺激綜合癥、子宮內(nèi)膜異常等高風(fēng)險不能進(jìn)行自行移植的胚胎問題。此種技術(shù)不僅可以減少移植胚胎數(shù)目，還能增加積累妊娠率[2]。近些年，隨著序貫培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展，凍融囊胚技術(shù)逐漸發(fā)展，人類已使囊胚培養(yǎng)和移植成為可能。凍融囊胚移植可以實現(xiàn)胚胎發(fā)育和子宮內(nèi)膜的同步，能夠提供一個更加接近子宮的著床環(huán)境，可以大大提高胚胎種植率和臨床妊娠率，同時還能限制移植囊胚數(shù)目，既可以得到高的累積妊娠率，又能降低相關(guān)母嬰并發(fā)癥的發(fā)生率[3]。本研究通過對1 715例凍融胚胎移植和228例凍融囊胚移植病例的回顧性分析，以探討凍融胚胎和凍融囊胚對移植周期和分娩結(jié)局的影響。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2014年7月～2016年7月由我院生殖醫(yī)學(xué)研究中心收治的1 715例凍融胚胎移植和228例凍融囊胚移植患者；將1 715例凍融胚胎移植患者定為A組，228例凍融囊胚移植患者定為B組；回顧性分析兩組患者的臨床資料以及產(chǎn)后資料；其中A組年齡22～36歲，平均（28.5±5.7）歲；B組年齡23～35歲，平均（29.5±4.8）歲；本研究納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）兩組患者均采用長方案控制性超促排卵；（2）患者的年齡均在38周歲以內(nèi)；兩組間患者的不孕年限、年齡、子宮內(nèi)膜厚度、基礎(chǔ)性激素水平以及體質(zhì)量指數(shù)（BMI）等資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 胚胎及囊胚的評分 依據(jù)胚胎的卵裂球數(shù)目和碎片比例將第3 d的卵裂期胚胎分為4個等級[4]：Ⅰ級（碎片比例在5%以內(nèi)），Ⅱ級（碎片比例5%～20%），Ⅲ級（碎片比例20%～50%），Ⅳ級（碎片比例在50%以上）；優(yōu)質(zhì)胚胎定義為6/Ⅱ級以上；囊胚分級依據(jù)文獻(xiàn)[5-6]，優(yōu)質(zhì)囊胚定義為3BB（囊腔完全占據(jù)胚胎的總體積，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)數(shù)量少，排列松散，滋養(yǎng)層細(xì)胞少，結(jié)構(gòu)松散。）以上；依據(jù)知情同意原則，選取患者第3 d，剩余3枚以上5/Ⅲ級胚胎進(jìn)行囊胚培養(yǎng)，并對第5 d 3BC（囊腔完全占據(jù)胚胎的總體積，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)數(shù)量少，排列松散，滋養(yǎng)層細(xì)胞稀疏，大細(xì)胞少。）或3CB（囊腔完全占據(jù)胚胎的總體積，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)數(shù)量很少，滋養(yǎng)層細(xì)胞稀疏，結(jié)構(gòu)松散。）以上囊胚和第3 d優(yōu)質(zhì)胚胎進(jìn)行冷凍；囊胚及卵裂期胚胎均使用玻璃化冷凍法，其中囊胚在冷凍前進(jìn)行激光打孔人工皺縮。

1.2.2 胚胎及囊胚的冷凍與復(fù)蘇移植 囊胚和胚胎的冷凍采用玻璃化冷凍方法：在常溫下（25 ℃左右）將囊胚和胚胎轉(zhuǎn)移至BS平衡液（胚胎冷凍緩沖液）中2 min，然后再轉(zhuǎn)移至ES平衡液（胚胎冷凍平衡液）中8 min，當(dāng)保護(hù)劑進(jìn)入胚胎后，使其恢復(fù)至原體積大小，再將其轉(zhuǎn)移至VS液（胚胎冷凍液）中1 min，并在30 s內(nèi)從VS液中轉(zhuǎn)移至冷凍載體，最后迅速侵入液氮內(nèi)保存。Ⅲ級及以上的囊胚在冷凍前行激光打孔人工皺縮。復(fù)蘇時將囊胚和胚胎從液氮取出，浸入TS（解凍液）平衡液中3 min，然后轉(zhuǎn)移至DS（稀釋液）平衡液中3 min以及WS（清洗液）平衡液中5 min，最后轉(zhuǎn)移至囊胚培養(yǎng)液內(nèi)。凍融胚胎存活細(xì)胞數(shù)目在1/2以上定義為存活，并培養(yǎng)2 h后進(jìn)行移植。

1.3 觀察指標(biāo)

凍融胚胎和凍融囊胚的妊娠結(jié)局：胚胎種植率、妊娠率、異位妊娠率、早產(chǎn)率；新生兒狀況：新生兒缺陷、男女比例、死胎、巨大兒。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組患者胚胎種植率、妊娠率、異位妊娠率、早產(chǎn)率比較

B組患者的胚胎種植率、妊娠率、異位妊娠率、早產(chǎn)率分別為 19.7%（45/228）、50.9%（116/228）、1.1%（26/228）、20.6%（47/228）， 均 優(yōu) 于 A組 的 39.7%（680/1 715）、30.0%（514/1 715）、4.6%（79/1 715）、21.1%（362/1 715），差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

表1 兩組患者胚胎種植率、妊娠率、異位妊娠率、早產(chǎn)率比較

2.2 兩組新生兒缺陷、男女比例、死胎、巨大兒情況比較

B組新生兒缺陷率、男女比例、死胎率、巨大兒率分別為0.9% （2/228）、1.19%（124/104）、0.0%（0/228）、1.3%（3/228），均與A組0.6%（10/1 715）、1.06%（881/834）、0.0%（0/1 715）、1.2% （20/1 715）比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），見表2。

表2 兩組新生兒缺陷、男女比例、死胎、巨大兒情況比較

3 討論

囊胚與胚胎的冷凍保存是人類輔助生殖必要且高效的技術(shù)。在體外將囊胚與胚胎冷凍保存，并通過合理的限制胚胎移植數(shù)目（3個以內(nèi)），不僅能顯著降低多胎妊娠和分娩的發(fā)生[7]，還可以為出現(xiàn)流產(chǎn)、想要二胎、首次移植失敗等情況的患者提供再移植的機(jī)會，同時還能大大降低卵巢過度刺激綜合征的發(fā)生[8]。

目前階段在輔助生殖領(lǐng)域廣泛使用的低溫冷凍技術(shù)主要包括慢速冷凍和玻璃化冷凍兩種。玻璃化冷凍技術(shù)是指使用一種高濃度的冷凍保護(hù)劑實現(xiàn)快速降溫，在快速降溫使溶液變得十分堅固、粘稠，從而形成玻璃樣物質(zhì)以減少或避免細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，進(jìn)而降低冰晶給細(xì)胞帶來的損傷[9-10]。與慢速冷凍技術(shù)相比，玻璃化冷凍技術(shù)主要有以下優(yōu)點：（1）操作簡單、費用低、耗時短；（2）效果好，胚胎存活率高；（3）無冰晶形成，對細(xì)胞損傷小。

自然狀態(tài)下早期胚胎首先在輸卵管中停留發(fā)育，當(dāng)?shù)竭_(dá)囊胚期時才開始進(jìn)入宮腔著床。對于一些不孕不育患者，可在體外利用囊胚培養(yǎng)技術(shù)先行囊胚培養(yǎng)，等囊胚形成后再人工將其植入子宮腔內(nèi)進(jìn)行著床，從而使胚胎發(fā)育和子宮內(nèi)膜趨于同步。同時隨著輔助生殖技術(shù)的不斷發(fā)展，在體外發(fā)現(xiàn)染色體異?；虬l(fā)育潛能差的胚胎后，可在其發(fā)育到囊胚之前便使其停止發(fā)育。這種體外的囊胚期胚胎培養(yǎng)移植的應(yīng)用可以幫助我們進(jìn)一步篩選發(fā)育潛能優(yōu)質(zhì)的胚胎，從而可以提高或改善后期的妊娠結(jié)局。

本研究結(jié)果顯示，B組患者的胚胎種植率、妊娠率、異位妊娠率均優(yōu)于A組，提示凍融囊胚移植技術(shù)是可以改善后期妊娠結(jié)局的。同時我們又對比分析了兩組新生兒情況，結(jié)果顯示兩組新生兒缺陷、男女比例、死胎、巨大兒情況比較差異并無明顯區(qū)別?？傊?，凍融囊胚移植技術(shù)是可以提高胚胎種植率，降低妊娠率、異位妊娠率，能夠改善后期妊娠結(jié)局。

[1]姚寧，鄭菊芬，向祖瓊，等. 影響凍融胚胎復(fù)蘇率和移植成功率因素分析[J]. 上海交通大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2009，29（6）：729-732.

[2]周光斌，張清靖，侯云鵬，等. 哺乳動物胚胎玻璃化冷凍研究進(jìn)展[J]. 中國畜牧雜志，2010，46（7）：69-72.

[3]侯曉紅，黃永剛，張慧娜，等. 評估兩種黃體支持方法在IVF/ ICSI新鮮周期及凍融胚胎激素替代周期妊娠結(jié)局的對比研究[J].實用婦產(chǎn)科雜志，2013，29（2）：152-154.

[4]李頌軍，柴小山，周昱言，等. 單純來曲唑促排卵在凍融胚胎移植內(nèi)膜準(zhǔn)備中的臨床療效[J]. 中南大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2012，37（12）：1233-1238.

[5]Gardenr DK，Lane M，Stevens J，et al. Blastocyst score affects implantation and pregnancy outcome: towards a single blastocyst transfer[J]. Fertil Steril，2000，73（6）：1155-1158.

[6]牟聯(lián)俊，李楠，韋繼紅，等. 三種不同受精方式的凍融胚胎和囊胚分娩結(jié)局及新生兒狀況[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2014，11（18）：44-48.

[7]陳京京，姜宏，李攀. 凍融周期囊胚移植的臨床價值[J]. 重慶醫(yī)學(xué)，2014，43（34）：4610-4612.

[8]梁明明，唐永梅，韋立紅，等. 凍融移植周期中單、雙囊胚及卵裂期雙胚胎移植結(jié)局的臨床分析[J]. 中國計劃生育學(xué)雜志，2016，24（10）：682-686.

[9]許麗娟，陳薪，田小龍，等. 非優(yōu)良胚胎形成的囊胚與卵裂期優(yōu)良胚胎的凍融胚胎移植的臨床結(jié)局比較[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2015，35（4）：481-485.

[10]王寧怡，孫曉溪，陸朱娣，等. 影響凍融胚胎發(fā)育潛能及妊娠結(jié)局因素的探討[J]. 生殖與避孕，2012，32（8）：533-539，517.

Comparison of Effects of Frozen Thawed Embryos and Frozen Thawed Blastocysts on Delivery Outcome

ZHANG Xue Reproductive Medicine Center, Xuzhou Maternal and Child Health Care, Xuzhou Jiangsu 221000, China

ObjectiveTo investigate the analysis of the influence of the freeze-thaw blastocyst transplant outcome for delivery.Methods1 715 cases of frozen thawed embryo transplantation and 228 cases of the two groups after transplantation of frozen blastocysts implantation rate, pregnancy rate, ectopic pregnancy rate, premature birth, birth defects, the proportion of men and women, stillbirth, fetal macrosomia incidence.ResultsIn group B patients grow rate and pregnancy rate of embryo, ectopic pregnancy rate were better than that of group A (P＜0.05), two groups of birth defects, the sex ratio, stillbirth, macrosomia situation compare diferences and no signifcant diference (P＞0.05).ConclusionFreeze-thaw blastocyst transplant technology is can increase the rate of embryo planting, decrease the rate of pregnancy, ectopic pregnancy rate, can improve the late pregnancy outcomes, has a certain use value.

Freeze-thaw blastocyst, Freezing and thawing embryo, Transplantation, Delivery outcomes

R714.8

A

1674-9308（2016）36-0081-03

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.36.044

徐州市婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)中心，江蘇 徐州 221000