于淼琛，程艷杰

(大連醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗科，遼寧大連 116011)

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·個案與短篇·

1例微粒子化學發(fā)光免疫技術(shù)測定梅毒螺旋體抗體假陽性分析

于淼琛，程艷杰△

(大連醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗科，遼寧大連 116011)

化學發(fā)光； 微粒子； 梅毒螺旋抗體

近年來，梅毒假陽性報道日益增多，給患者及家屬帶來很多困擾，容易引起家庭糾紛及醫(yī)療糾紛。筆者用微粒子化學發(fā)光免疫技術(shù)測定梅毒螺旋體抗體假陽性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 女，21歲，5年前體檢發(fā)現(xiàn)先心病(動脈導管未閉)。心臟超聲：多普勒探及大動脈水平連續(xù)性左向右分流，門診就診建議可擇期手術(shù)。既往史：否認肝炎、心臟病史，否認高血壓，否認手術(shù)、創(chuàng)傷、輸血史。無化學性物質(zhì)、放射性物質(zhì)、有毒物質(zhì)接觸史，無吸毒史，無吸煙、飲酒史，無冶游史。無婚育史。否認家族性遺傳病、傳染病史。

1.2 儀器與試劑 本次試驗微粒子化學發(fā)光免疫技術(shù)采用美國雅培公司全自動微粒子學發(fā)光儀Architect I-2000 System 及配套試劑、校準品、質(zhì)控品；金標方法試劑購自杭州艾博生物醫(yī)藥；酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)采用北京萬泰生物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品和珠海麗珠生物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品；快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗(RPR)采用上海科華生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；梅毒明膠顆粒凝集試驗(TPPA)試劑購自日本富士株式會社；微粒子化學發(fā)光免疫技術(shù)采用羅氏自動電化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)Cobas 601及配套試劑、校準品、質(zhì)控品。

1.3 方法 清晨空腹以真空采血管按要求定量采血檢測血常規(guī)、生化指標、梅毒螺旋體抗體及自身免疫疾病相關(guān)指標，按常規(guī)操作分離血清，無溶血、乳糜及黃疸等。

2 結(jié) 果

實驗室檢測結(jié)果：血常規(guī)、生化肝、腎功能指標正常；雅培微粒子化學發(fā)光免疫技術(shù)測定梅毒螺旋體抗體陽性(雙測試信號強度與臨界值之比S/CO值分別9.90、9.95)；金標方法復查梅毒螺旋體抗體結(jié)果為陰性。

檢測結(jié)果為臨床少見模式，引起注意。筆者用金標方法復查梅毒螺旋體抗體，結(jié)果為陰性；再用ELISA檢測梅毒螺旋體抗體，結(jié)果顯示梅毒螺旋體抗體陰性，雙孔測試信號強度與臨界值之比S/CO值分別為：萬泰ELISA為0.071、0.073；麗珠ELISA為0.059、0.057；RPR陰性；TPPA陰性；羅氏Cobas 601陰性，雙測試信號強度與臨界值之比S/CO值分別0.84、0.85；檢測結(jié)果與金標方法檢測結(jié)果基本一致。

抗核抗體及抗核抗體滴度均為陰性、免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G亞型4指標正常；補體成分C3、補體成分C4指標正常；抗鏈球菌溶血素O、類風濕因子、C反應蛋白指標正常。

3 討 論

近年來，梅毒假陽性報道日益增多，給患者及家屬帶來很多困擾，容易引起家庭糾紛及醫(yī)療糾紛。有文獻報道，老年人(60歲以上)、風濕免疫系統(tǒng)性疾病、惡性腫瘤可作為獨立影響因素而造成梅毒血清學生物假陽性[1]。而此患者年僅21歲，經(jīng)入院系列檢查及免疫檢測指標分析，無風濕免疫系統(tǒng)性疾病及惡性腫瘤，與臨床及患者溝通后,發(fā)現(xiàn)患者無梅毒臨床癥狀、不潔性生活史和既往史。進行跟蹤調(diào)查，也未出現(xiàn)梅毒癥狀。為慎重報告梅毒螺旋體抗體結(jié)果，采用金標法、ELISA雙試劑盒(不同廠家)、RPR、TPPA、羅氏電化學微粒子發(fā)光免疫技術(shù)等5種方法復檢，其檢測結(jié)果均為陰性。因此，認為雅培化學微粒子發(fā)光免疫技術(shù)檢測結(jié)果與臨床癥狀不符或疑似假陽性。

目前，國內(nèi)檢測梅毒螺旋體抗體的主要方法包括：ELISA、RPR、TPPA、微粒子化學發(fā)光免疫技術(shù)等。其中，雅培公司的全自動免疫分析儀采用微粒子化學發(fā)光免疫技術(shù)，其測定梅毒螺旋體抗體原理為：標本與包被有重組抗原(TpN15、TpN17和TpN47)的微粒子及稀釋液混合后，標本中的抗體同微粒子上包被的梅毒抗原結(jié)合，通過清洗程序后，加入吖啶酯標志物，洗滌后加入預激發(fā)液和激發(fā)液后，測定反應液的相對發(fā)光強度，根據(jù)臨界值判斷樣品中是否含有梅毒螺旋體特異性抗體[2]。

用基因重組表達得到多肽抗原，再用人血清清蛋白與之聯(lián)接，合成后的多肽一般不作提純，直接作為試劑抗原使用[3]。如片段過長，非特異性反應增高，即出現(xiàn)不符合；同時微粒子化學發(fā)光免疫技術(shù)所用的重組抗原可能包含引起不符合的序列使檢測結(jié)果為不符合。此外，重組抗原存在不純問題，且使用人血清清蛋白，增加了意外假陽性抗原位點的可能[4]?；颊邩吮局校锌赡芎懈蓴_免疫測定導致不符合的干擾因素，干擾因素一般包括類風濕因子、補體、高水平的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體、交叉反應物質(zhì)等[5]。

該樣本用微粒子化學發(fā)光免疫技術(shù)檢測結(jié)果呈陽性，與其他檢測方法均不符，實屬少見。在排除外在影響因素情況下，主要考慮患者樣本自身由交叉反應物質(zhì)、某些自身抗體或試劑因素造成，即血清中存在與固相和液相交叉反應的物質(zhì)。但是筆者排除了類風濕因子、自身抗體、甲胎蛋白的影響，具體原因尚不清楚，有待進一步研究。此類報告應結(jié)合臨床癥狀、是否有不潔性生活史及既往史等現(xiàn)實狀況，慎重審發(fā)報告。如若錯發(fā)陽性結(jié)果，會給患者及家人帶來極大傷害，應引起注意。

[1]馮文莉,劉兵,高謹,等.住院患者梅毒血清學生物假陽性的相關(guān)因素分析[J].中國藥物與臨床,2015,15(6):815-818.

[2]郭慧娟,尚曉泓.微粒子化學發(fā)光法檢測梅毒螺旋體抗體陽性結(jié)果分析[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2011,8(20):2444-2445.

[3]傅均星,周瀟,曾鐵兵.基因重組抗原ELISA法在梅毒螺旋體抗體檢測中的評價[J].南華大學學報(醫(yī)學版),2004,32(3):305-306.

[4]王柳溪.TP-ELISA法檢測老年人梅毒螺旋體抗體易產(chǎn)生假陽性原因分析[J].醫(yī)學理論與實踐,2008,21(9):1085-1086.

[5]Ismail AA.A radical approach is needed to eliminate interference from endogenous antibodies in immunoassays[J].Clin Chem,2005,51(1):25-26.

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.22.062

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1673-4130(2016)22-3235-02

2016-04-17

2016-06-26)

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