王昕曦

(黔西南州漁業(yè)發(fā)展中心水產(chǎn)站，貴州 興義 562400)

人工養(yǎng)殖大鯢感染柱狀黃桿菌的診治

王昕曦

(黔西南州漁業(yè)發(fā)展中心水產(chǎn)站，貴州 興義 562400)

大鯢(Andrias davidianus)俗稱(chēng)“娃娃魚(yú)”，屬兩棲綱、有尾目、隱鰓鯢科，是我國(guó)特有的珍稀有尾兩棲動(dòng)物，為國(guó)家二級(jí)保護(hù)動(dòng)物，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，具有廣泛的開(kāi)發(fā)利用前景。近年來(lái)人工養(yǎng)殖大鯢中不斷發(fā)生各種疾病，給養(yǎng)殖戶造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。2012年3月，貴州省某大鯢養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生了大鯢體表和四肢多處潰爛，內(nèi)臟器官充血、出血的疾病，經(jīng)過(guò)臨床癥狀觀察、病理解剖及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，診斷為柱狀黃桿菌感染。通過(guò)采取綜合防治措施，大鯢養(yǎng)殖場(chǎng)疫情得到有效控制。現(xiàn)將診治情況報(bào)道如下。

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

該場(chǎng)大鯢(體重50～100 g，體長(zhǎng)10.0～15.0 cm)因更換餌料魚(yú)突然發(fā)病。發(fā)病初期大鯢行動(dòng)緩慢，攝食量減少，5～7天后病鯢出現(xiàn)腹部腫脹，前后肢嚴(yán)重腫脹、潰爛，口腔黏膜彌漫性出血。曾用青霉素和慶大霉素浸泡，部分進(jìn)行肌肉注射治療無(wú)效，并在治療過(guò)程中陸續(xù)死亡，病死率高達(dá)90%。

2 病理變化

對(duì)病死大鯢進(jìn)行病理剖檢可見(jiàn):下頜與腹部肌肉組織充血;腹腔內(nèi)有大量淡黃色的積水;肝臟腫大，有淤血呈花斑狀，膽囊充盈;脾臟、腎臟腫大，充血、出血;腸道充血、出血，腸壁內(nèi)充滿淡黃色的漿液。

3 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

3.1 細(xì)菌學(xué)檢查

3.1.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng):采用無(wú)菌操作取患病大鯢的肝臟組織，用接種環(huán)接種在普通瓊脂平板上，于28℃恒溫培養(yǎng)24 h后，長(zhǎng)出1.0～2.5 mm、表面光滑、濕潤(rùn)、凸起、有光澤、邊緣整齊、不透明的黃色菌落。經(jīng)革蘭氏染色鏡檢為革蘭氏陰性、兩端鈍圓、散在或個(gè)別成雙排列、無(wú)芽胞的長(zhǎng)桿菌。

3.1.2 生化鑒定:將分離得到的菌株進(jìn)行生化鑒定，結(jié)果該菌能分解七葉苷，氧化酶陽(yáng)性，不能分解甘露醇、蔗糖、阿拉伯糖、葡萄糖、肌醇、乳糖，不產(chǎn)生靛基質(zhì)，不產(chǎn)生硫化氫，不分解尿素，硝酸鹽還原陰性，鳥(niǎo)氨酸脫羧酶、精氨酸水解酶、水楊素、賴(lài)氨酸脫羧酶陰性，M.R.試驗(yàn)和V－P試驗(yàn)均為陰性。

3.1.3 藥敏試驗(yàn):按常規(guī)藥敏紙片法測(cè)定17種抗菌素對(duì)分離菌株的抗藥譜，以涂布法接種分離菌株，然后將藥敏紙片貼在培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)24 h后，測(cè)定抑菌圈直徑，敏感度根據(jù)杭州微生物試劑有限公司提供的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。結(jié)果該菌株對(duì)頭孢噻吩、頭孢拉定、氟苯尼考高度敏感，對(duì)慶大霉素、氟哌酸、頭孢三嗪、強(qiáng)力霉素、頭孢唑啉、四環(huán)素、青霉素、氨芐青霉素、紅霉素、潔霉素、痢特靈、復(fù)方新諾明、利福平、鏈霉素不敏感。

3.2 16S rRNA基因序列分析 本試驗(yàn)采用細(xì)菌16S rRNA基因通用引物，采用的25 μL反應(yīng)體系中含有:10 × Taq Buffer(15 mM MgCl2)2.5 μL，dNTP Mixure(2.5 mM)2 μL，Taq 酶(2.5 U/μL)0.5 μL，引物各 1 μL，模板 DNA 0.5 μL，用 ddH2O補(bǔ)齊25 μL。PCR反應(yīng)條件為:94℃預(yù)變性4 min，94℃變性30 s，54℃退火30 s，72℃延伸1 min，30個(gè)循環(huán)后，72℃延伸10 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)純化后，送由寶生物(大連)工程有限公司進(jìn)行序列測(cè)定。分離菌株的16S rRNA序列與GenBank基因庫(kù)柱狀黃桿菌的16S rRNA基因進(jìn)行比對(duì)，核苷酸相似性為99%以上，表明分離到的病原菌為柱狀黃桿菌。

3.3 餌料魚(yú)的細(xì)菌檢測(cè) 參照3.1的細(xì)菌檢測(cè)方法，對(duì)餌料魚(yú)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果分離出柱狀黃桿菌。

4 診斷

經(jīng)過(guò)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀、病理變化及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，該養(yǎng)殖場(chǎng)大鯢發(fā)生的疾病診斷為柱狀黃桿菌感染。

5 防治措施

將患病大鯢與健康大鯢進(jìn)行隔離，對(duì)未患病大鯢應(yīng)用黃芪多糖、電解多維、葡萄糖進(jìn)行浸泡，連用15天;對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)殖水體及養(yǎng)殖用具等徹底消毒;對(duì)餌料魚(yú)應(yīng)用高錳酸鉀進(jìn)行浸泡;對(duì)患病大鯢采用水產(chǎn)用氟苯尼考20 mg/kg體重劑量進(jìn)行腹腔注射，同時(shí)應(yīng)用水產(chǎn)用高效維生素進(jìn)行浸泡，每天1次，連用7天。15天后發(fā)病的大鯢開(kāi)始攝食，死亡數(shù)量明顯減少，疫情得到了有效控制。

6 小結(jié)與討論

隨著大鯢的規(guī)?；图s化人工繁殖發(fā)展，由于缺乏對(duì)引種和餌料消毒的重視，近年來(lái)大鯢的疾病不斷爆發(fā)，且診斷和防治的難度增加。本研究中臨床用藥根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果合理選擇藥物進(jìn)行治療，以減少耐藥菌株的產(chǎn)生。同時(shí)對(duì)患病大鯢制定科學(xué)的用藥方案，正確配伍，協(xié)同用藥，綜合治療。針對(duì)目前規(guī)?；篥F養(yǎng)殖場(chǎng)疫病的復(fù)雜局面，應(yīng)重視保健和預(yù)防，采取合理的消毒程序，建立完善的預(yù)防方案，加強(qiáng)對(duì)餌料魚(yú)的檢測(cè)與消毒。

S947.3

B

1007－1474(2016)01－0067－02

2015－10－20