金　晶，李群芳，張升暉（湖北民族學(xué)院化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院，湖北恩施445000）

?

阻抗型免疫傳感器的發(fā)展與應(yīng)用

金晶，李群芳*，張升暉*
（湖北民族學(xué)院化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院，湖北恩施445000）

摘要：阻抗型免疫傳感器是利用抗原（或抗體）在電極表面發(fā)生特異性結(jié)合前后導(dǎo)致電極表面的電化學(xué)性質(zhì)發(fā)生改變而實(shí)現(xiàn)對(duì)抗體（或抗原）進(jìn)行測(cè)定一類新型免疫傳感器，其具有制備簡(jiǎn)單、響應(yīng)時(shí)間短和靈敏度高等特點(diǎn)。該文對(duì)阻抗型免疫傳感器的工作原理，發(fā)展及現(xiàn)階段的應(yīng)用進(jìn)行了綜述，并對(duì)未來的發(fā)展趨勢(shì)進(jìn)行了展望。

關(guān)鍵詞：阻抗型免疫傳感器；生物分子；分析檢測(cè)

0　引言

免疫傳感器是將免疫檢測(cè)技術(shù)與高靈敏的傳感技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的一類新型生物傳感器。電化學(xué)免疫傳感器是免疫傳感器中研究最早、種類最多，也較為成熟的一個(gè)分支，它有效結(jié)合了各種電分析技術(shù)（如脈沖伏安法、溶出伏安法、交流阻抗譜圖法等），使靈敏度得到了大大的提高，在短短幾十年里相繼開辟了種類繁多的研究和應(yīng)用領(lǐng)域，目前正朝著更加靈敏、高效、微型和適用的方向發(fā)展。其通常是由三部分組成分別為：識(shí)別元件、換能器及相應(yīng)電路，并將電化學(xué)的高度靈敏的特性與免疫復(fù)合物之間的特異性反應(yīng)聯(lián)系在一起，從而對(duì)目標(biāo)待測(cè)物進(jìn)行分析，具有制備簡(jiǎn)單，響應(yīng)靈敏，對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的檢測(cè)速度快的優(yōu)點(diǎn)，且有良好的選擇性和穩(wěn)定性，克服了傳統(tǒng)檢測(cè)方法的諸多缺點(diǎn)。隨著免疫傳感器的不斷發(fā)展，免疫傳感器的應(yīng)用越來越多，類型越來越豐富，根據(jù)檢測(cè)所用到的分析技術(shù)的不同，按照工作原理可被分為電位型，電流型，電導(dǎo)型，電容型和電阻型，而其中阻抗型免疫傳感器是通過研究電極界面電子傳遞能力的變化來對(duì)待測(cè)物進(jìn)行分析的一種檢測(cè)手段，不僅具備上述電化學(xué)免疫傳感器的共同特性，還具有高通量，無標(biāo)記的特點(diǎn)［1-7］。該文將對(duì)阻抗型免疫傳感器在各領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)行綜述，并對(duì)其發(fā)展進(jìn)行評(píng)述。

1　阻抗型免疫傳感器的原理

阻抗型免疫傳感器是采用了交流阻抗法（EIS）通過測(cè)定免疫復(fù)合物或酶與底物在電極表面發(fā)生特異性的結(jié)合或反應(yīng)而引起電極表面阻抗值的變化值來對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行測(cè)定，交流阻抗法是以不同頻率的小幅值正弦電壓為擾動(dòng)信號(hào)，隨著時(shí)間的變化所引起電流與微擾信號(hào)之間呈現(xiàn)出線性關(guān)系而得到電極阻抗，阻抗（Z）的定義為V（t）/I（t）［8］，而把每個(gè)動(dòng)力學(xué)的過程都用電化學(xué)電池中的組件表示，可以推測(cè)電極的等效電路，其中包括電阻，電感和電容，可用于分析電極系統(tǒng)所包含的動(dòng)力學(xué)過程及其機(jī)理。而阻抗型免疫傳感器主要是對(duì)等效電路中電阻值的檢測(cè)，通過交流阻抗譜圖可以直接得到阻抗值，阻抗曲線包含兩個(gè)部分：一個(gè)半圓部分和一個(gè)線性部分。半圓直徑在更高頻率對(duì)應(yīng)的是電荷轉(zhuǎn)移電阻（Rct），線性部分在較低頻率對(duì)應(yīng)于擴(kuò)散的過程［9-11］。通常交流阻抗法作為一個(gè)強(qiáng)有力的表征手段用于檢測(cè)電極制備過程電極表面的電化學(xué)性質(zhì)，在對(duì)生物小分子及有害物質(zhì)檢測(cè)的應(yīng)用也非常廣泛。

2　阻抗型免疫傳感器的應(yīng)用

2.1臨床檢測(cè)

2.1.1腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)

腫瘤標(biāo)志物是在1978年由Herberman提出，是反映腫瘤存在的一類化學(xué)物質(zhì)，目前發(fā)現(xiàn)的腫瘤標(biāo)志物有一百多種，而常用的只有二十多種［12］，其在人體內(nèi)的存在與濃度的量變都可能暗示著某種腫瘤的產(chǎn)生，在臨床檢測(cè)中常常被用來了解腫瘤組織的細(xì)胞分化及細(xì)胞功能，而達(dá)到對(duì)腫瘤進(jìn)行早期診斷及治療指導(dǎo)。目前免疫傳感器在腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的相關(guān)報(bào)道有很多，常見的目標(biāo)檢測(cè)物有癌胚抗原（CEA），甲胎蛋白（AFP），前列腺特異性抗原（PSA）等。Tang等［13］合成的尺寸為15±1.5 nm的納米金顆粒表面自組裝單層谷胱甘肽用于固定癌胚抗原的抗體（anti-CEA）并與鄰氨基苯酚通過CV的方法共聚合在電極表面，隨著抗原抗體免疫復(fù)合物的形成，CEA濃度在0.5～20 ng/mL時(shí)，與阻抗值呈正相關(guān)。Zhou等［14］將金電極置于1，6-己二硫醇中，通過Au-s鍵在金電極表面進(jìn)行組裝，然后置于納米金膠體中使得電極表面生成納米金顆粒，納米金顆?？梢耘c葡萄球菌A蛋白結(jié)合，最后用葡萄球菌A來固定anti-CEA，對(duì)CEA進(jìn)行測(cè)定，在濃度范圍為0.001～100 ng/mL時(shí)，濃度的對(duì)數(shù)值與阻抗值成正比，檢測(cè)限為達(dá)到0.0001 ng/mL。王麗娟等［15］制備的納米金/殼聚糖/石墨烯修飾玻碳電極形成的阻抗型免疫傳感器測(cè)定CEA，實(shí)驗(yàn)利用了納米金良好的生物相容性固定抗體以氧化石墨烯良好的導(dǎo)電能力，制得的傳感器具有良好的響應(yīng)，得到線性范圍為0.1～85 ng/mL。AFP作為肝癌的標(biāo)志物，一般情況下采用抗體與抗原特異性結(jié)合來完成對(duì)抗原的檢測(cè)，Yang等［16］建立了以麥胚凝集素作為分子識(shí)別元件識(shí)別AFP，羧基功能化的碳納米管可以與麥胚凝集素以共價(jià)鍵的形式在絲網(wǎng)印刷碳電極的表面結(jié)合，而隨著AFP的濃度增加，電極的電子轉(zhuǎn)移電阻增加，并與濃度的對(duì)數(shù)值有一個(gè)良好的線性，提供了一個(gè)檢測(cè)AFP的簡(jiǎn)單靈敏的新方法。Kavosi等［17］分別用差分脈沖伏安法（DPV）和交流阻抗法（EIS）對(duì)PSA進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)建立了夾心型電流免疫傳感器和無信標(biāo)的阻抗型免疫傳感器，并可以應(yīng)用于對(duì)血液中實(shí)際樣品的檢測(cè)，檢測(cè)限分別為10 fg/mL和5 pg/mL。阻抗型免疫傳感器一般情況下會(huì)用Fe （CN）63-/4-作為氧化還原介質(zhì)，而Li等［18］用4-氯奈-1-萘酚（4-CN）作為氧化還原介質(zhì)，抗體和DNA酶功能化的金鈀納米復(fù)合材料進(jìn)行結(jié)合形成Ab2-AuPd-DNA作為信號(hào)放大的標(biāo)記物，4-CN可以被DNA酶催化氧化形成不溶的物質(zhì)附著在電極表面，從而降低電極傳遞電子的能力，并與PSA的濃度呈正相關(guān)。當(dāng)胃癌、乳腺癌、膀胱癌或頭頸部鱗癌的存在時(shí)表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）表達(dá)就會(huì)急劇增加，Elshafey等［19］在電極表面鍍一層納米金以擴(kuò)大電極的比表面積，并用蛋白質(zhì)G作為支架用于固定 EGFR抗體，對(duì)EGFR進(jìn)行檢測(cè)，并且在PBS中的檢測(cè)限為0.34 pg/mL，而在人類血漿中得到的檢測(cè)限達(dá)到了0.88 pg/mL。Arkan等［20］則是通過制備金納米粒子/多壁碳納米管-離子液體電極對(duì)人表皮生長(zhǎng)因子受體2進(jìn)行測(cè)定，實(shí)驗(yàn)用納米金來增強(qiáng)電極對(duì)抗體的固定能力，電極有一個(gè)很好的響應(yīng)，檢測(cè)范圍為10～110 ng/mL，并有一個(gè)較低的檢測(cè)限7.4 ng/mL。CA125可用作卵巢癌的診斷和預(yù)防，Raghav等［21］合成了金核殼銀型的納米材料直接用于固定抗體用于檢測(cè)CA125，線性范圍1～150 IU/mL。2.1.2其他疾病標(biāo)志物的檢測(cè)

葡萄糖是人體生命活動(dòng)不可缺少的物質(zhì)，是人體新陳代謝的主要來源，而當(dāng)人體內(nèi)胰島素分泌缺陷或胰島素作用有障礙時(shí)就會(huì)患糖尿病，其為以高血糖為特征的代謝性疾病，而對(duì)糖尿病患者來說，血糖是診斷糖尿病的唯一標(biāo)準(zhǔn)。目前葡萄糖的免疫傳感器非常多，Shervedani等［22］利用黃金巰基丙酸在金電極表面進(jìn)行自組裝，用于固定葡萄糖氧化酶，并用對(duì)苯醌作為氧化還原介質(zhì)，其會(huì)被還原為鄰苯二酚，利用葡萄糖在電極表面氧化會(huì)使得鄰苯二酚的擴(kuò)散電流增加，而表現(xiàn)出隨葡萄糖濃度的增加會(huì)有一個(gè)減小的阻抗值，并與阻抗的倒數(shù)值呈良好的線性關(guān)系，第一次實(shí)現(xiàn)了使用感應(yīng)電流的阻抗傳感器對(duì)葡萄糖進(jìn)行測(cè)定。卵巢基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）在神經(jīng)炎癥硬化病理過程中起著至關(guān)重要的作用，為多發(fā)性硬化癥的外圍神經(jīng)炎癥的生物標(biāo)志物，Biela等［23］在互相交叉金電極表面自主裝一層半胱氨酸，結(jié)合氧化葡聚糖后，在表面滴加肽鏈?zhǔn)蛊涑浞值慕宦?lián)，然后加入MMP-9使肽鏈鏈斷開，用阻抗法進(jìn)行監(jiān)測(cè)，△Z%隨其濃度增加而增加，得到一個(gè)可應(yīng)用于臨床檢測(cè)的線性范圍為50～400 ng/mL。免疫球蛋白G（（IgG）是人體血清中的主要抗體成分，大約占血清蛋白的75%左右，可以對(duì)病毒、病菌進(jìn)行防御，在人體中起到保護(hù)作用。其濃度的升高和降低都暗示著一些疾病的發(fā)生，如結(jié)締組織病、肝臟病、傳染病、免疫缺陷綜合征，某些白血病等，故對(duì)其進(jìn)行快速靈敏的檢測(cè)是很有必要的。目前對(duì)IgG檢測(cè)的方法有很多種，其中用免疫傳感器對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)的報(bào)道也很多。Zhang等［24］建立了一個(gè)簡(jiǎn)單的阻抗型免疫傳感器，將一定量的吡啶甲醛與聚環(huán)氧氯丙烷在DMF中混合，并在氬氣的保護(hù)下120℃時(shí)反應(yīng)，得到帶有醛基的聚合物，直接滴涂在電極表面與反IgG抗體進(jìn)行結(jié)合，當(dāng)IgG滴加到電極表面時(shí)會(huì)使得電極表面?zhèn)鬟f電子能力降低，從而對(duì)IgG進(jìn)行檢測(cè)。Tabrizia等［25］則利用了過氧化聚吡咯修飾金納米顆粒對(duì)Fe（CN）63-/4-有良好的磁導(dǎo)率，用其修飾絲網(wǎng)印刷電極，用EIS對(duì)人免疫球蛋白G進(jìn)行檢測(cè)。人血清（HSA）可以反映肝臟合成功能和腎病造成的蛋白丟失的情況，同時(shí)可能暗示著一些疾病的產(chǎn)生，Arkan等［26］首先在離子液體-多壁碳納米管的表面電沉積一層納米金修飾電極，然后納米金膠是通過1，6-己二硫醇上的巰基結(jié)合到電極表面用于固定anti-HAS，有HAS存在時(shí)電極的阻抗值升高，并與濃度呈良好的線性關(guān)系，線性范圍和檢測(cè)限分別為0.1～100 μg/mL，15.4 ng/mL，可以用于人類尿液和血清樣本中對(duì)HAS的檢測(cè)，對(duì)蛋白尿和糖尿病患者進(jìn)行診斷。

2.2病菌的檢測(cè)

病菌為引起人類疾病的細(xì)菌，寄生于生命體中，病菌按照尺寸的大小可以分為細(xì)菌和病毒，細(xì)菌長(zhǎng)約一微米，病毒是最小的病菌。病菌可以引起很多的傳染病，在病菌發(fā)現(xiàn)初期，中國(guó)就出現(xiàn)了天花的相關(guān)記錄，而到如今的非典，甲流，禽流感等一些病菌所引起的疾病越來越普遍。所以對(duì)病菌的檢測(cè)非常重要。Lin等［27］建立了一種簡(jiǎn)單靈敏低成本的快速檢測(cè)禽流感（Al）H5N1的阻抗型免疫傳感器，分析了雞在一個(gè)小時(shí)以內(nèi)分泌物中Al H5N1的含量并證明病毒的存在，相應(yīng)的抗體特定單克隆抗體AI H5N1病毒是由小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合脾淋巴細(xì)胞與H5N1病毒免疫產(chǎn)生，得到的檢測(cè)范圍為2-1～24HAU/50 μL，并且電極有很好的抗干擾性。鼠傷寒沙門氏菌是引起急性胃腸炎的主要病原菌，一般通過食品和飲料進(jìn)入到人體，每年的發(fā)病率也相對(duì)較高，Dong等［28］將制備的聚酰胺-多壁碳納米管-殼聚糖納米復(fù)合材料用于修飾玻碳電極，結(jié)合納米金用于固定鼠傷寒沙門氏菌抗體，用于檢測(cè)牛奶中鼠傷寒沙門氏菌的含量，阻抗值與其濃度在1.0×103～1.0×107CFU/mL之間時(shí)有一個(gè)良好的線性關(guān)系，得到檢測(cè)限為5.0×102CFU/mL。Nguyen等［29］用磁性二氧化硅納米管（MSNTs）固定抗體和互相交叉微電極建立了對(duì)鼠傷寒沙門氏菌進(jìn)行測(cè)定的阻抗型免疫傳感器，MSNTs極大的增加了傳感器的信號(hào)使得不同濃度的鼠傷寒沙門氏菌之間的阻抗值有很明顯的差別，整個(gè)測(cè)量過程大約30 min左右且低成本和方便操作，可用于實(shí)際樣品中的檢測(cè)。Joung等［30］使用氧化鋁納米多孔膜和透明質(zhì)酸 （HA）有效地減少生物分子和其他細(xì)胞的非特異性結(jié)合，并能很好的固定抗體，建立了一個(gè)簡(jiǎn)單的和快速的檢測(cè)方法用于牛奶中大腸桿菌的測(cè)定?；魜y弧菌可以引起一種烈性腸道傳染病，一般發(fā)病急，死亡率也很高，Tam等［31］以氧化鈰納米線作為點(diǎn)滴材料，通過乙基二甲基胺丙基碳化二亞胺和N-羥基硫代琥珀酰亞胺鈉鹽形成氨基酸酯將O1群霍亂弧菌抗體固定在氧化鈰納米線表面，當(dāng)加入不同濃度的O1群霍亂弧菌時(shí)，電極表面的阻抗值發(fā)生變化，阻抗值與濃度有一個(gè)很好的線性關(guān)系，得到一個(gè)低的檢測(cè)限1.0×102CFU/mL。

2.3食品中的應(yīng)用

日常生活飲食與人類身體的健康是正相關(guān)的，而目前隨著生活節(jié)奏的日益增長(zhǎng)，速食品越來越多，食品安全問題一直備受關(guān)注，人們所接觸到的食品中有很多對(duì)人體有害的物質(zhì)，除了上述的病毒病菌會(huì)存在于食品中，還有各種霉菌素，農(nóng)殘，添加劑等，這些都會(huì)給人體健康帶來傷害，而對(duì)這些物質(zhì)快速有效的檢測(cè)是很有必要的。黃曲霉毒素B1（AFB1）是一個(gè)豐富毒素存在于橄欖及其衍生物中，一直和人類肝細(xì)胞癌的病因脫不了干系，Yu等［32］將羧基化切短的碳納米管加入到離子液體中用瑪瑙研缽打磨30 min，離心后取沉淀，并加入抗體，形成了碳納米管/離子液體/抗體滴涂到電極表面，碳納米管良好的導(dǎo)電性能和離子液體能為抗體提供了一個(gè)良好的微環(huán)境，二者共同作用提高了電極測(cè)定AFB1的靈敏度。檢測(cè)范圍為0.1～10 ng/mL，可以用于各種農(nóng)產(chǎn)品和植物油中AFB1的檢測(cè)。Dan等［33］應(yīng)用了還原的氧化石墨烯與聚吡咯 （PPy）和吡咯丙基酸（PPa）結(jié)合形成一個(gè)獨(dú)特的傳感平臺(tái)用于檢測(cè)AFB1，PPy的加入提供了探針固定共價(jià)鏈接器，PPa的摻雜賦予了膜的電化學(xué)活性從而大大促進(jìn)了阻抗型免疫傳感器檢測(cè)的靈敏度，實(shí)驗(yàn)得到了一個(gè)寬的檢測(cè)范圍。呋喃丹是一種氨基甲酸酯類殺蟲劑，主要是通過蔬菜瓜果進(jìn)入到人體內(nèi)，主要抑制體內(nèi)膽堿酯酶活性，使乙酰膽堿在組織中蓄積而引起中毒。Liu等［34］制備了一種簡(jiǎn)單快速檢測(cè)呋喃丹的阻抗型免疫傳感器，用L-半胱氨酸修飾電極，戊二醛作為固定抗體的交聯(lián)劑，在優(yōu)化的條件下，阻抗的變化與呋喃丹的濃度的對(duì)數(shù)值正相關(guān)，所能檢測(cè)的濃度范圍為1.0×10-1～1.0×103ng/mL，可應(yīng)用于監(jiān)測(cè)呋喃丹在農(nóng)業(yè)和環(huán)境樣品的殘留。

3　結(jié)論與展望

目前阻抗型免疫傳感器的應(yīng)用已經(jīng)涉及到臨床檢測(cè)、細(xì)菌病毒檢測(cè)、食品環(huán)境、非法藥品［35-36］、氣體［37］等等，這是由于阻抗型免疫傳感器具有小型化，制備簡(jiǎn)單，反應(yīng)靈敏且不需要加入酶標(biāo)就可以對(duì)待測(cè)物直接進(jìn)行檢測(cè)，但阻抗型免疫傳感器的靈敏度，檢測(cè)范圍和檢測(cè)限一般都會(huì)比電流型免疫傳感器高很多，導(dǎo)致其應(yīng)用并沒有電流型免疫傳感器廣泛，故進(jìn)一步提高阻抗型免疫傳感器的檢測(cè)靈敏度一直倍受研究人員的關(guān)注。未來在構(gòu)建阻抗型免疫傳感器將會(huì)延續(xù)制備簡(jiǎn)單無酶標(biāo)的特點(diǎn)，致力于研究新的納米材料提高電極傳導(dǎo)電子的能力，提高傳感器的靈敏度，更廣泛的應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域，同時(shí)要考慮傳感器的制備成本，保證低成本，高穩(wěn)定性和使用壽命。相信隨著不斷地發(fā)展阻抗型免疫傳感器的性能會(huì)越來越好，并能做到更加高效、更加快速、更加靈敏地應(yīng)用到各領(lǐng)域的檢測(cè)中。

參考文獻(xiàn)

［1］Clark L C，Lyons C.Electrode systems for continuous monitoring in cardiovascular surgery［J］.Ann.N.Y.A-cad.Sci.，1962，102:29-45.

［2］Pravda M，Kreuzer M P，Guilbault G G.Analysis of important freshwater and marine toxins［J］.Anal.Lett.，2002，35（1）:1-15.

［3］Sapsford K E，Charles P T，Patterson C H，et al.Demonstration of four immunoassay formats using the array biosensor［J］.Anal.Chem.，2002，74（5）:1061-1068.

［4］Smith J C，Jean-Philippe L，F(xiàn)red E，et al.Proteomics in 2005/2006:developments，applications and challenges. ［J］.Anal.Chem.，2007，79（12）:4325-4343.

［5］Pimenta-Martinsa M G R，F(xiàn)urtado R F，Heneine L G D，et al.Development of an amperometric immunosensor for detection of staphylococcal enterotoxin type A in cheese ［J］.Journal of Microbiological Methods，2012，91（1）: 138-143.

［6］Conzuelo F，Campuzano S，Gamella M，et al.Integrated disposable electrochemical immune-sensors for the simultaneous determination of sulfonamide and tetracycline antibiotics residues in milk［J］.Biosensors and Bio-electronics，2013，50:100-105.

［7］范瑾瑾，俞純山.電化學(xué)免疫傳感器測(cè)定Ag-Ab反應(yīng)［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè)，1995，16 （4）:159.

［8］Prodromidis M I.Impedimetric immunosensors—A review［J］.Electrochimica Acta，2010，55（14）:4227–4233.

［9］Huang K J，Niu D J，Xie W Z，et al.A disposable electrochemical immunosensor for carcinoembryonic antigen based on nano-Au/multi-walled carbon nanotubes-chitosans nanocomposite film modified glassy carbon electrode［J］.Analytica ChimicaActa，2010，659（1-2）: 102-108.

［10］Cui R，Huang H，Yin Z D，et al.Horseradish peroxidasefunctionalized gold nanoparticle label for amplified immunoanalysis based on gold nanoparticles/carbon nanotubes hybrids modified biosensor.［J］.Biosensors& Bioelectronics，2008，23（11）:1666–1673.

［11］Atta N，El-Kady M.Poly（3-methylthiophene）/palladium sub-micro-modified sensor electrode.Part II:Voltammetric and EIS studies，and analysis of catecholamine neurotransmitters，ascorbic acid and acetaminophen［J］. Talanta，2009，79:639-647.

［12］陶華林，李紅霞.腫瘤標(biāo)志物的研究及臨床應(yīng)用進(jìn)展［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005，26（01）:54-56.

［13］Tang H，Chen J，Nie L，et al.A label-free electrochemical immunoassay for carcinoembryonic antigen（CEA）based on gold nanoparticles（AuNPs）and nonconductive polymer film.［J］.Biosensors&Bioelectronics，2007，22 （6）:1061-1067.

［14］Zhou J，Du L，Zou L，et al.An ultrasensitive electrochemical immunosensor for carcinoembryonic antigen detection based on staphylococcal protein A—Au nanoparticle modified gold electrode［J］.Sensors&Actuators B Chemical，2014，197（7）:220–227.

［15］王麗娟，賈翠娟.基于納米金/殼聚糖/石墨烯的癌胚抗原阻抗型免疫傳感器［J］.分析試驗(yàn)室，2012，31（07）: 101-104.

［16］Yang H Y，Li Z J，Wei X M，et al.Detection and discrimin ation of alpha-fetopro tein wit h a label-free electrochem ical impedance spectroscopy biosens or array based on lectin functiona lized car bon nanotubes［J］. Talanta，2013，111:62–68.

［17］Kavosi B，Salimi A，Hallaj R，et al.Ultrasensitive electrochemical immunosensor for PSA biomarker detection in prostate cancer cells using gold nanoparticles/PAMAM dendrimer loaded with enzyme linked aptamer as integrated triple signal amplification strategy［J］.Biosensors &Bioelectronics，2015，74:915-923.

［18］Li H，Gao Z，Xu M，et al.DNAzyme-functionalized goldpalladium hybrid nanostructures for triple signal amplification of impedimetric immunosensor［J］.Biosensors& Bioelectronics，2014，54（15）:365–371.

［19］Elshafey R，Tavares A C，Siaj M，et al.Electrochemical impedance immunosensor based on gold nanoparticles–protein G for the detection of cancer marker epidermal growth factor receptor in human plasma and brain tissue ［J］.Biosensors&Bioelectronics，2013，50（4）:143-149.

［20］Arkan E，Saber R，Karimi Z，et al.A novel antibody–antigen based impedimetric immunosensor for low level detection of HER2 in serum samples of breast cancer patients via modification of a gold nanoparticles decorated multiwall carbon nanotube-ionic liquid electrode［J］. Analytica Chimica Acta，2015，874:66-74.

［21］Raghav R，Srivastava S.Core-shell Gold-Silver nanoparticles based impedimetric immunosensor for cancer antigen CA125［J］.Sensors&Actuators B Chemical，2015，220:557–564.

［22］Shervedani R，Mehrjardi A N.A novel method for glucose determinationbasedonelectrochemicalimpedance spectroscopy using glucose oxidase self-assembled biosensor［J］.Bioelectrochemistry，2006，69（2）:201-208.

［23］Biela A，Watkinson M，Meier U C，et al.Disposable MMP-9 sensor based on the degradation of peptide cross-linked Hydrogel filmsusingelectrochemical impedance spectroscopy［J］.Biosensors&Bioelectronics，2015，68C:660-667.

［24］Zhang X，Shen G，Shen Y，et al.Direct immobilization of antibodies on a new polymer film for fabricating an electrochemical impedance immunosensor［J］.Analytical Biochemistry，2015，485:81-85.

［25］Tabrizia M A，Shamsipura M，Mostafaieb A.A high sensitive label-free immunosensor for the determination of human serum IgG using overoxidized polypyrrole decorated with gold nanoparticle modified electrode［J］.Materials Science and Engineering C，2016，59:965–969.

［26］Arkan E，Saber R，Karimi Z，et al.Multiwall carbon nanotube-ionic liquid electrode modified with gold nanoparticles as a base for preparation of a novel impedimetric immunosensor for low level detection of human serum albumin in biological fluids［J］.Journal of Pharmaceutical&Biomedical Analysis，2014，92:74-81.

［27］Lin J，Wang R，Jiao P，et al.An impedance immunosensor based on low-cost microelectrodes and specific monoclonal antibodies for rapid detection of avian influenza virus H5N1 in chicken swabs［J］.Biosensors&Bioelectronics，2015，67:546-552.

［28］Dong J，Zhao H，Xu M，et al.A label-free electrochemical impedance immunosensor based on AuNPs/PAMAMMWCNT-Chi nanocomposite modified glassy carbon electrode for detection of Salmonella typhimurium in milk［J］.Food Chemistry，2013，141（3）:1980-1986.

［29］Nguyen P D，Tran T B，Nguyen D T X，et al.Magnetic silica nanotube-assisted impedimetric immunosensor for the separation and label-free detection of Salmonella typhimurium［J］.Sensors&Actuators B Chemical，2014，197（7）:314-320.

［30］Joung C K，Kim H N，Lim M C，et al.A nanoporous membrane-based impedimetric immunosensor for labelfree detection of pathogenic bacteria in whole milk［J］. Biosensors&Bioelectronics，2013，44（18）:210-215.

［31］Tam P D，Thang C X.Label-free electrochemical immunosensor based on cerium oxide nanowires for Vibrio cholerae O1 detection［J］.Materials science&engineering C，Materials for biological applications，2016，58.

［32］Yu L，Yang Z，Hu C，et al.Highly sensitive electrochemical impedance spectroscopy immunosensor for the detection of AFB1 in olive oil［J］.Food Chemistry，2015，176: 22-26.

［33］Dan W，Hu W，Xiong Y，et al.Multifunctionalized reduced graphene oxide-doped polypyrrole/pyrrolepropylic acid nanocomposite impedimetric immunosensor to ultra-sensitively detect small molecular aflatoxin B1［J］. Biosensors&Bioelectronics，2015，63:185-189.

［34］Liu L，Xu D，Hu Y，et al.Construction of an impedimetric immunosensor for label-free detecting carbofuran residual in agricultural and environmental samples［J］.Food Control，2015，53:72-80.

［35］Yang Y，Pan J，Hua W，et al.An approach for the preparation of highly sensitive electrochemical impedimetric immunosensors for the detection of illicit drugs［J］. Journal of Electroanalytical Chemistry，2014，726（4）:1-6.

［36］Chen Y，Yang Y，Tu Y.An electrochemical impedimetric immunosensor for ultrasensitive determination of ketamine hydrochloride［J］.Sensors&Actuators B Chemical，2013，183（8）:150-156.

［37］Fedorov F S，Varezhnikov A S，Kiselev I，et al.Potassium Polytitanate gas-sensor study by Impedance Spectroscopy［J］.Analytica Chimica Acta，2015，897:81-86.

*通信聯(lián)系人，E-mail:slindar809@126.com，Tel:0718-8437531

Development and application of electrochemical impedance spectroscopy immunosensor

Jin Jing，Li Qun-fang*，Zhang Sheng-hui*
（College of Chemical and Environmental Engineering，Hubei University for Nationalities，Enshi 445000，China）

Abstract:Electrochemical impedance spectroscopy immunosensor was based on the specific binding between biological molecules on the electrode surface to change the electrochemical properties of the electrode，so as to determination of biological molecules，which possesses simple preparation，short response time and high sensitivity characteristics.The working principle，current development and application of the electrochemical impedance spectroscopy immunosensor are summarized in this review，and the latest technological challenges and future development trend is prospected.

Key words:electrochemical impedance spectroscopy immunosensor；biological molecules；analysis detection