錢(qián) 俊，劉 軍，吳 云，李燕英，吳佳妮，張保獻(xiàn)，蕭 偉＊＊

（1.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司 連云港 222001；2.中藥制藥過(guò)程新技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室連云港 222001；3.北京因科瑞斯醫(yī)藥科技有限公司 北京 102209）

紫金化毒栓制備工藝研究＊

錢(qián) 俊1，2，劉 軍3，吳 云1，2，李燕英3，吳佳妮3，張保獻(xiàn)3，蕭 偉1，2＊＊

（1.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司 連云港 222001；2.中藥制藥過(guò)程新技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室連云港 222001；3.北京因科瑞斯醫(yī)藥科技有限公司 北京 102209）

目的：優(yōu)選最佳紫金化毒栓制劑工藝。方法：以外觀性狀、融變時(shí)限、指標(biāo)成分溶出度為考察指標(biāo)，優(yōu)選基質(zhì)，確定栓劑的載藥量、附加劑種類(lèi)和用量、基質(zhì)熔融溫度、注模及固化溫度等工藝條件及參數(shù)。結(jié)果：栓劑中藥物占比37%，輔料為吐溫80 1.0%、單硬脂酸甘油酯5.0%、硬脂酸3.0%、半合成脂肪酸甘油酯（36）54.0%。栓劑基質(zhì)在65℃熔融完全后，加入膏粉，攪拌均勻；待降溫至約50℃時(shí)，將揮發(fā)油用吐溫80溶解，加入到藥液中，攪拌均勻；待降溫至約40℃時(shí)，灌注于栓模內(nèi)，5℃固化10 min，脫模，即得。結(jié)論：通過(guò)對(duì)制劑處方及工藝條件的研究，確定了最佳工藝，并進(jìn)行了3批中試工藝驗(yàn)證，表明紫金化毒栓制劑工藝合理可行，可用于工業(yè)化生產(chǎn)。

紫金化毒栓 綠原酸 制備工藝 高效液相色譜法

紫金化毒栓主要由金銀花、連翹、莪術(shù)等中藥組成，具有清熱解毒、活血燥濕、消腫生肌的功效，用于濕熱瘀阻所致的帶下病及宮頸高危型人乳頭瘤病毒感染（Human Papillomavirus，HPV）。在前期研究已確定其中間體提取純化工藝的基礎(chǔ)上，本試驗(yàn)對(duì)其栓劑制備所需的基質(zhì)、附加劑及工藝的參數(shù)等進(jìn)行優(yōu)選，為該制劑的開(kāi)發(fā)提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

LC-2010Aht液相色譜儀（日本島津公司）；BT25S電子分析天平（德國(guó)賽多利斯公司）；BS124S電子分析天平（德國(guó)賽多利斯公司）；RBY-4型自動(dòng)融變時(shí)限檢查儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；ZRS-8GD溶出試驗(yàn)儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）。

甲醇、乙腈為色譜純（均購(gòu)自北京迪馬科技有限公司，批號(hào)分別為：70116、70122）；乙醇、磷酸、三氯甲烷為分析純（均購(gòu)自北京化學(xué)試劑廠，批號(hào)分 別 為：20130926、20131101、20121213）；硅 藻土為分析純（北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司，批號(hào)：12112305）；綠原酸對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110753-200413）；聚乙二醇4000、6000（均購(gòu)自湖南爾康制藥有限公司，批號(hào)分別為：20121028、20130301）；半合成脂肪酸甘油酯36（湖北新河化工，批號(hào)：121115、121207）；聚氧乙烯（40）硬脂酸酯（S-40，巴斯夫中國(guó)有限公司，批號(hào)：20130113）；吐溫80（南京威爾化工有限公司，批號(hào)：20130402）；單硬脂酸甘油酯（巴斯夫中國(guó)有限公司，批號(hào)：20130424）；硬脂酸（上海倍特化工有限公司，批號(hào)：20120911）；紫金化毒栓（江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：140301）。

金銀花、連翹、莪術(shù)等藥材均購(gòu)自亳州藥材市場(chǎng)，經(jīng)本公司檢測(cè)分析部檢驗(yàn)符合2010版《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 綠原酸含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件[1]

色譜柱Ultimate LP-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-0.4%磷酸（9：91）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為327 nm，柱溫30℃，流速1 mL·min-1，進(jìn)樣量10 μL。

2.1.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱(chēng)取綠原酸對(duì)照品9.97 mg，置25 mL量瓶中，加50%甲醇適量使溶解并定容至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。

2.1.3 線性關(guān)系的考察

分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，配制成7.976、19.94、39.88、79.76、119.64、199.4 μg·mL-1的對(duì)照品溶液，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液10 μL按“2.1.1”項(xiàng)下方法測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程：y= 3 140 417.177 2x-94 926.322 0，相關(guān)系數(shù)r=0.999 8。結(jié)果表明，綠原酸在0.079 76-1.994 00 μg范圍內(nèi)線性良好。

2.1.4 供試品溶液制備[2,3]

取本品，切碎，取約0.5 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加硅藻土1 g，精密加水50 mL，稱(chēng)定重量，置60℃水浴5 min，溶散均勻，取出，40℃超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，冷凍（-10℃）30 min，取出，離心（轉(zhuǎn)速為4 000 轉(zhuǎn)/min）10 min，取上清液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.5 專(zhuān)屬性試驗(yàn)

取除金銀花外的其它各味藥材，制成不含金銀花的陰性制劑，按“2.1.4”項(xiàng)下方法制成陰性樣品溶液。取供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性樣品溶液各10 μL，按“2.1.1”項(xiàng)下方法測(cè)定。結(jié)果顯示，該處方中其余藥材對(duì)綠原酸的含量測(cè)定無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

2.1.6 儀器精密度

精密吸取同一供試品溶液10 μL，按“2.1.1”項(xiàng)下方法連續(xù)進(jìn)樣6次，綠原酸峰面積的RSD為0.07%，表明儀器精密度良好。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h按“2.1.1”項(xiàng)下方法進(jìn)樣測(cè)定，綠原酸峰面積的RSD 為0.25%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

圖1 紫金化毒栓中綠原酸HPLC圖

2.1.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品6份，分別按“2.1.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下方法測(cè)定，綠原酸含量的RSD為0.18%，表明本法重復(fù)性良好。

2.1.9 加樣回收率試驗(yàn)

取本品同一批號(hào)已知含量的樣品約0.25 g，共6份，精密稱(chēng)定，置錐形瓶中，精密加入一定量綠原酸對(duì)照品，按“2.1.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下方法測(cè)定，綠原酸平均加樣回收率為98.53%，RSD為1.49%，表明該方法準(zhǔn)確可靠。

2.2 制劑工藝研究

2.2.1 紫金化毒栓干膏粉制備

金銀花等用80%乙醇回流提取2次，每次1.5 h，過(guò)濾，濾液備用；連翹等用水提取2次，每次1.5 h，過(guò)濾，濾液備用；莪術(shù)用水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油，揮發(fā)油另器收集，備用。上述提取液合并濃縮、干燥，干膏粉碎后過(guò)120目篩，備用。

2.2.2 基質(zhì)選擇

栓劑常用基質(zhì)有水溶性和油溶性的基質(zhì)[4,5]，水溶性的基質(zhì)常用的有聚乙二醇類(lèi)、明膠、聚氧乙烯（40）硬脂酸酯等，油溶性的基質(zhì)有可可豆脂、半合成脂肪酸甘油酯等。根據(jù)本制劑的使用特點(diǎn)和實(shí)際生產(chǎn)中常用的基質(zhì)，選擇聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、半合成脂肪酸甘油酯36、聚氧乙烯（40）硬脂酸酯為基質(zhì)，以栓劑外觀、融變時(shí)限、溶出度等為指標(biāo)進(jìn)行制劑的優(yōu)選。

2.2.2.1 供試樣品制備

稱(chēng)取各基質(zhì)，分別置于燒杯中，在恒溫水浴鍋上加熱融解（65-75℃），加入膏粉，攪拌均勻，待降溫至約50℃時(shí)，將適量揮發(fā)油用吐溫80溶解，加入到藥液中，攪拌均勻，灌注于栓模內(nèi)，在2-5℃固化約10 min，削去溢出部分，脫模，即得樣品。

2.2.2.2 外觀性狀及融變時(shí)限檢查[6-8]

采用目視觀察藥物外觀性狀及切面性狀。分別取4種栓各3粒，根據(jù)《中國(guó)藥典》2010版一部附錄XII B融變時(shí)限檢查法測(cè)定，結(jié)果顯示，以半合成脂肪酸甘油酯36為基質(zhì)的栓劑在30 min內(nèi)全部軟化，觸壓無(wú)硬芯，切面均勻，其余3種基質(zhì)制得的栓劑1 h內(nèi)尚有少量硬芯，且切面不勻，有沙粒感。

2.2.2.3 溶出度測(cè)定[9-11]

用《中國(guó)藥典》2010版二部漿法測(cè)定栓劑中綠原酸溶出度。釋放介質(zhì)為pH4.5的鹽酸溶液700 mL，溫度為（37.0±0.5）℃，轉(zhuǎn)速100 r·min-1。取栓劑1枚，放入溶出杯中，分別于5、10、15、20、30、40、60、90 min取樣5 mL，同時(shí)補(bǔ)加5 mL等溫溶出遞質(zhì)。溶出液經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1 mL，蒸干，加甲醇溶解并定容至25 mL容量瓶中。分別進(jìn)液相測(cè)定，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)各樣品的綠原酸溶出量，并求出各樣品不同時(shí)間的累積溶出率，繪制溶出曲線，見(jiàn)圖2。

圖2 不同基質(zhì)栓劑溶出度曲線

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以半合成脂肪酸甘油酯36制備的栓劑外觀、切面、融變時(shí)限及溶出度最佳，故選擇半合成脂肪酸甘油酯36為栓劑基質(zhì)。

2.2.3 栓劑載藥量

本品日用生藥材量較大，按上述的載藥量27.75%折算，一日使用的栓劑重量為4.0 g，使用栓劑較大，患者順應(yīng)性較差，故需對(duì)栓劑的載藥量作進(jìn)一步的優(yōu)化，增大載藥量，降低使用的栓劑重量。

根據(jù)每日用膏粉的量及栓劑的用法用量，設(shè)定栓劑載藥藥量分別為55.55%（2.0 g/粒）、44.44% （2.5 g/粒）、37.0%（3.0 g/粒）、31.71%（3.5 g/粒），以半合成脂肪酸甘油酯36為基質(zhì)，進(jìn)行栓劑成型試驗(yàn)。以栓劑外觀、融變時(shí)限、藥液混合均勻性、混合物流動(dòng)性、穩(wěn)定性（30℃，放置7天）等為指標(biāo)進(jìn)行載藥量?jī)?yōu)選。

稱(chēng)取各個(gè)基質(zhì)，分別置于燒杯中，在恒溫水浴鍋上加熱融解（65-75℃），加入膏粉，攪拌均勻，待降溫至約50℃時(shí)，將揮發(fā)油用吐溫80溶解，加入到藥液中，攪拌均勻，灌注于栓模內(nèi)，在2-5℃固化約10 min，削去溢出部分，脫模，即得樣品。

試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)載藥量在37.0%左右時(shí)（栓劑重量3.0 g/粒），制備的栓劑外觀形態(tài)、穩(wěn)定性、融變時(shí)限等均較好，并符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，故確定制備的栓劑規(guī)格為每粒3.0 g（載藥量為37.0%左右）。

2.2.4 栓劑基質(zhì)的優(yōu)化[12,13]

為增加栓劑的彈性，降低脆性，增加栓劑硬度，便于儲(chǔ)存，同時(shí)增加膏粉在基質(zhì)中的溶解性、分散性，需加入助溶劑、硬化劑、增稠劑等輔料。優(yōu)選常用輔料吐溫80、單硬脂酸甘油酯、硬脂酸為附加劑，并對(duì)其用量進(jìn)行優(yōu)選。

按配比稱(chēng)取各基質(zhì)，分別置于燒杯中，在恒溫水浴鍋上加熱融解（65-75℃），加入膏粉，攪拌均勻，待降溫至約50℃時(shí)，將揮發(fā)油用吐溫80溶解，加入到藥液中，攪拌均勻，灌注于栓模內(nèi)，2-5℃固化約10 min，削去溢出部分，脫模，即得樣品，結(jié)果見(jiàn)表1。

根據(jù)以上的試驗(yàn)，表明處方5制備的栓劑成型及穩(wěn)定性較好，故確定處方5為紫金化毒栓的成型處方。即吐溫80 1.0%、單硬脂酸甘油酯5.0%、硬脂酸3.0%、半合成脂肪酸甘油酯36 54.0%（根據(jù)膏粉量可適當(dāng)調(diào)整比例）。

2.2.5 溫度選擇

2.2.5.1 基質(zhì)熔融溫度考察[14,15]

按比例稱(chēng)取各基質(zhì)，分別置于燒杯中，分別于55、60、65、70、75℃水浴鍋上，加熱熔融至2/3時(shí)，停止加熱，攪拌使完全融解，加入膏粉，攪拌均勻，待降溫至約50℃時(shí)，將揮發(fā)油用吐溫80溶解，加入到藥液中，攪拌均勻，灌注于栓模內(nèi)，2-5℃固化約10 min，削去溢出部分，脫模，即得樣品。

結(jié)果表明，當(dāng)溫度在65-75℃時(shí)，能滿足成型要求，所得栓劑外觀色澤均勻，光滑細(xì)膩，切面均勻，故基質(zhì)熔融溫度定在65℃。

2.2.5.2 注模藥液溫度及固化溫度考察

按比例稱(chēng)取各基質(zhì)，分別置于燒杯中，分別于65℃水浴鍋上，加熱熔融至2/3時(shí)，停止加熱，攪拌使完全融解，加入膏粉，攪拌均勻，待分別降溫至40、45、50、60℃時(shí)，將揮發(fā)油用吐溫80溶解，加入到藥液中，攪拌均勻，灌注于栓模內(nèi)，分別放置于0、5、10、15℃固化約10 min，削去溢出部分，脫模，即得樣品。

表1 栓劑成型的優(yōu)化結(jié)果

結(jié)果表明，注模藥液溫度為40-45℃，固化溫度為0-5℃時(shí)，栓劑成型較好。

2.3 中試工藝放大驗(yàn)證

經(jīng)上述試驗(yàn)，優(yōu)化后紫金化毒栓制劑工藝為：栓劑基質(zhì)在65℃熔融完全后，加入膏粉，攪拌均勻，待降溫至約50℃時(shí)，將揮發(fā)油用吐溫80溶解，加入到藥液中，攪拌均勻，待降溫至約40℃時(shí)，灌注于栓模內(nèi)，在5℃固化約10 min，脫模，即得。

按照該工藝中試試制了3批樣品，每批8 000粒，結(jié)果見(jiàn)表2。

結(jié)果表明，該工藝符合生產(chǎn)實(shí)際，可用于工業(yè)化生產(chǎn)。

3 討論

綠原酸為處方中君藥金銀花的主要有效成分，故以該成分的溶出度為指標(biāo)選擇適宜的基質(zhì)。

制劑中加入的硬脂酸作為增塑劑可增加栓劑彈性，降低脆性；吐溫80、單硬脂酸甘油酯是表面活性劑，可促進(jìn)藥物與基質(zhì)混合均勻，改善藥物外觀。

藥液熔融、注模及固化溫度對(duì)栓劑的成型有較大影響。熔融時(shí)溫度過(guò)低，基質(zhì)不能完全熔融，浸膏粉與基質(zhì)不易混合均勻，制得栓劑外表粗糙，不夠光滑細(xì)膩，切面不勻；注模時(shí)藥液溫度過(guò)低，溶液的流動(dòng)性下降，影響注模，溫度過(guò)高，冷卻時(shí)間延長(zhǎng)，膏粉易沉積，導(dǎo)致藥物分散不均勻；固化溫度低，栓劑注模后迅速固化，尾部無(wú)明顯凹陷，固化溫度過(guò)高，制劑尾部凹陷明顯。因此，控制基質(zhì)熔融溫度為65℃、注模溫度為40℃、固化溫度為5℃能較好地解決這一問(wèn)題。

表2 3批中試生產(chǎn)結(jié)果

本文通過(guò)一系列試驗(yàn)，確定了紫金化毒栓的基質(zhì)配比及熔融、灌注、冷卻溫度等關(guān)鍵工藝參數(shù)，該工藝合理可行，符合生產(chǎn)實(shí)際，可用于工業(yè)化生產(chǎn)。

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Optimization on Preparation Technology of Zi-Jin Hua-Du Suppository

Qian Jun1,2, Liu Jun3, Wu Yun1,2, Li Yanying3, Wu Jiani3, Zhang Baoxian3, Xiao Wei1,2
(1. Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co. Ltd., Lianyungang 222001, China; 2. State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process, Lianyungang 222001, China; 3. Institute of Beijing Increase Biological Products, Beijing 102209, China)

This study was aimed to optimize the preparation technology of Zi-Jin Hua-Du (ZJHD) suppository. The examining indexes contained appearance, characteristics, melting time, and dissolution of indicators. The matrix was optimized. Technological conditions and indexes, which included the suppository drug-loading rate,the type and amount of additives, matrix melting temperature, temperature of molding and solidification, were identified. The results showed that the best prescription index of ZJHD suppository was drug-Tween 80-glycerin monostearate-stearic acid-adeps solidus (36) at 37%: 1.0%: 5.0%: 3.0%: 54.0%. When the suppository matrix was totally melted at the temperature of 65℃, powder was added and mixed evenly. When the temperature was decreased to about 50℃, the essential oil was dissolved with Tween 80, added into the medical liquid, and mixed evenly. When the temperature decreased to about 40℃, the liquid was added into the mold. The solidification was 10 min at the temperature of 10℃. The suppository was received after the mold was removed. It was concluded that through the study on the prescription and the technological conditions, the best technology was identified. This technology was verified with three batches of pilot trials. It showed that the ZJHD suppository preparation technology was rational and practicable, which can be used in the industrial manufacture.

Zi-Jin Hua-Du suppository, chlorogenic acid, preparation technology, HPLC

10.11842/wst.2016.01.015

R283

A

（責(zé)任編輯：劉馨雨 張志華，責(zé)任譯審：王 晶）

2014-11-15

修回日期：2014-11-19

＊ 科學(xué)技術(shù)部國(guó)家重大新藥創(chuàng)制項(xiàng)目（2013ZX09402203）：現(xiàn)代中藥創(chuàng)新集群與數(shù)字制藥技術(shù)平臺(tái)，負(fù)責(zé)人：王振中。

＊＊ 通訊作者：蕭偉，本刊編委，博士，研究員級(jí)高級(jí)工程師，主要研究方向：中藥新藥研究。