吳曉怡 董海展 李建海

【摘要】目的：探究甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（tolulized red unheated serum test，TRUST）陽性與自身免疫性疾病的關(guān)系，為臨床研究提供參考依據(jù)。方法：選擇2010年5月至2014年6月期間來我院診治的100例紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病患者為病例組，分別采用TRUST和酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測，比較兩種方法的陽性檢測率。同期選擇100例健康人群為對(duì)照組，比較病例組和對(duì)照組人群的抗心磷脂抗體（ACA）濃度的高低。結(jié)果：采用ELISA檢測病例組和對(duì)照組ACA濃度，病例組患者的IgG-ACA、IgM-ACA與β2-GP1的水平均顯著高于對(duì)照組人群，具有明顯差異性（P<005）；經(jīng)過TRUST檢測，實(shí)驗(yàn)組患者凝集反應(yīng)強(qiáng)度為3+～4+ 者35例，2+者45例，1+者15例，-者為5例，陽性率950%，顯著高于對(duì)照組患者，具有明顯差異性（P<005）。結(jié)論：患有自身免疫性疾病的患者的IgG-ACA、IgM-ACA與β2-GP1等ACA水平顯著高于正常人群，是一項(xiàng)值得重視的檢測指標(biāo)。TRUST對(duì)于篩選自身免疫性疾病陽性患者，具有一定的特異性，具有較高的檢查率，可以在臨床上使用。

【關(guān)鍵詞】甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)；自身免疫性疾??；酶聯(lián)免疫吸附法；抗心磷脂抗體

【中圖分類號(hào)】R4466【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

迄今為止國內(nèi)外報(bào)道的自身免疫性疾病大約有30多種，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性血管炎、皮肌炎等，嚴(yán)重影響了患者的身心健康，給患者及其家庭帶來了困擾?？剐牧字贵w（anticardiolipin，ACA）是一種以血小板和內(nèi)皮細(xì)胞膜上帶負(fù)電荷的心磷脂作為靶抗原的自身抗體，常見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其他自身免疫性疾病，是一種非特異性的標(biāo)志抗體[3]。根據(jù)非特異性抗體-抗心磷脂抗體的檢測原理，甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（tolulized red unheated serum test， TRUST）可用于評(píng)價(jià)自身免疫性疾病。本文的研究目的是選擇ACA為檢測目標(biāo)，選擇TRUST檢測自身免疫性疾病的患者，探究分析該臨床檢查方法的可行性。

1臨床資料與方法

11臨床資料

選擇2010年5月至2014年6月期間來我院診治的100例紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病患者為病例組，同期選擇100例健康人群為對(duì)照組。分別采用TRUST和酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測，比較兩種方法的陽性檢測率。兩組研究對(duì)象在年齡、性別等臨床資料無顯著性差異（P>005）。見表1。

12儀器、試劑與檢測方法

121儀器、試劑（1）TRUST：儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀、直徑為18mm圓圈的反應(yīng)卡片、抗原滴管、針頭；試劑：TRUST試劑盒。（2）ELISA：儀器：微量移液器、超低溫冰箱、LXJ-04離心沉淀機(jī)、Coda全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀；試劑：抗心磷脂抗體（IgG）檢測試劑盒、抗心磷脂抗體（IgM）檢測試劑盒、抗β2膽糖蛋白1抗體檢測試劑盒。

122檢測方法所有研究對(duì)象均禁食10h以上，于次日清晨空腹抽取肘靜脈血3mL，以2000r/min迅速離心分離10min，取上層血清統(tǒng)一編號(hào)，置于-80℃的超低溫冰箱中集中待檢。（1）TRUST [4]：吸取50μL血清放在卡片圓圈中，并均勻地涂布在整個(gè)圈內(nèi)將TRUST抗原輕輕搖勻，然后用9號(hào)針頭（60±1）d/mL加一滴抗原。最后將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8min（100±2）r/min。立即在亮光下觀察結(jié)果。（2）ELISA：ACA抗體水平采用ELISA試劑盒，由德國歐蒙公司提供。按照試劑盒說明操作。

123結(jié)果判定TRUST：出現(xiàn)1+～4+強(qiáng)度的凝集反應(yīng)為陽性結(jié)果；不產(chǎn)生凝集反應(yīng)為陰性結(jié)果。凝集反應(yīng)強(qiáng)度分級(jí)[5]：3+～4+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)中到大的紅色絮狀物，液體清亮；2+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小到中的紅色絮狀物，液體較清亮；1+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小的黑色絮狀物，液體渾濁；–：圓圈內(nèi)僅見甲苯胺紅顆粒集于中央一點(diǎn)或均勻分散。

13統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)處理軟件包為SPSS160，計(jì)量的比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)的比較采用χ2檢驗(yàn)，P<005表示有顯著性差異。

2結(jié)果

21病例組和對(duì)照組人群ACA水平分析

采用ELISA檢測病例組和對(duì)照組ACA濃度，病例組患者的IgG-ACA、IgM-ACA與β2-GP1的水平均顯著高于對(duì)照組人群（P<005）。見表2。

3討論

自身免疫是指機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)自身成分發(fā)生免疫應(yīng)答，產(chǎn)生針對(duì)自身成分的抗體和/或致敏的自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞免疫效應(yīng)。當(dāng)自身免疫是病理性的，引起自身免疫性疾病。自身免疫性疾病是指機(jī)體對(duì)自身抗原發(fā)生免疫反應(yīng)而導(dǎo)致自身組織損害所引起的疾病[6，7]。國內(nèi)外大量文獻(xiàn)報(bào)道的自身免疫性疾病大約有30多種，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性血管炎等[8，9]。自身免疫性疾病的發(fā)生機(jī)制主要在于“自身耐受”的破壞，機(jī)體產(chǎn)生自身抗體和/或致敏淋巴細(xì)胞，損傷表達(dá)相應(yīng)自身抗原的靶器官組織，導(dǎo)致疾病發(fā)生[10，11]。該類疾病基本特征表現(xiàn)在：（1）病損部位有變性的免疫球蛋白沉積呈現(xiàn)以大量淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤為主的慢性炎癥；（2）有遺傳傾向；（3）患者以女性多見，發(fā)病率隨年齡而增高；（4）多數(shù)自身免疫病是自發(fā)或特發(fā)性的，感染、藥物等外因可能有一定的影響；（5）常與其它自身免疫疾病同時(shí)存在。因此，自身免疫性疾病嚴(yán)重影響了患者的身心健康，治療概率疾病刻不容緩[12]。

ACA水平的檢測對(duì)臨床上判斷SLE以及其他自身免疫性疾病的活動(dòng)性及是否并發(fā)血管病變和狼瘡性腎炎有重要作用，并可作為自身免疫性疾病療效觀察的指標(biāo)之一，可以作為某些自身免疫性疾病非特異性的標(biāo)志抗體[13]。ACA是一組異質(zhì)抗體，包括IgG、lgA、IgM三類、可結(jié)合心磷脂、磷脂酞絲氨酸和磷脂酞肌醇，是一種以血小板和內(nèi)皮細(xì)胞膜上帶負(fù)電荷的心磷脂作為抗原的自身抗體[14]。該抗體與血栓形成、血管栓塞以及血小板減少等密切相關(guān)。TRUST是一種非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，主要用于梅毒的篩選和療效觀察[15]。其檢測原理為使用正常牛心肌的心類脂作為抗原，來測定病人血清中的反應(yīng)素（非特異性抗體-抗心磷脂抗體），用來初步篩查梅毒螺旋體感染。由于非特異性抗體-抗心磷脂抗體在紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病患者血清內(nèi)存在，理論上可以使用TRUST檢測方法檢測患者是否患有紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病。本文研究表明，病例組患者的IgG-ACA、IgM-ACA與β2-GP1的水平均顯著高于正常人群，提示ACA與部分自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制有密切關(guān)系。本文作者研究還發(fā)現(xiàn)，100例病例組患者經(jīng)過TRUST檢測，實(shí)驗(yàn)組患者凝集反應(yīng)強(qiáng)度為3+～4+者35例，2+者45例，1+者15例，-者為5例，陽性率950%，同對(duì)照組3%的陽性率比較具有顯著差異，提示TRUST對(duì)于篩選自身免疫性疾病或具有一定的診斷作用。

綜上所述，患有自身免疫性疾病的患者的IgG-ACA、IgM-ACA與β2-GP1等抗心磷脂抗體（ACA）水平顯著高于正常人群，是一項(xiàng)值得重視的檢測指標(biāo)。

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（收稿日期：2015-03-26）